一、成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖的NOS-NO通路机制研究（论文文献综述）
刘霞[1]（2020）在《Ndrg2在癫痫海马神经发生中的变化及相关蛋白Hes1研究》文中研究指明目的:本课题阐明Ndrg2（N-myc downstream regulated gene）在癫痫海马齿状回中的变化,及该变化与神经发生的相关性,并进一步探讨Ndrg2在癫痫海马神经发生的机制是否与Hes1（hairy and enhancer of split 1）有关。方法:40只雄性C57BL/6小鼠,20-25 g,随机分为对照组与癫痫组,每组又分为两个亚组:1 d和7 d,各个亚组10只。小鼠于上海斯莱克动物中心购买后饲养一周以适应环境,腹腔注射（匹鲁卡品,PILO）100 mg/kg,30 min后重复1次,引发癫痫出现III级以上发作,并出现癫痫持续状态后1 h,10 mg/kg地西泮终止癫痫发作,此后给予保暖及补液。对照组小鼠腹腔注射相同剂量的生理盐水代替PILO,其余处理相同。PILO给药后不出现急性III级以上癫痫持续发作（即癫痫持续状态）的小鼠不纳入本研究。根据经Becker等修改后的Racine分级标准来判断癫痫造模是否成功。造模成功后存活的癫痫组及对照组于1 d、7 d断头取脑,采用western blot、Polymerase Chain Reaction（PCR）及免疫荧光检测Ndrg2在癫痫的变化;采用western blot检测神经发生相关因子Nestin、DCX（Doublecortin）、Neun（Neuronal Nuclei）蛋白表达,采用Nestin标记神经干细胞、BrdU（5-bromo-2-deoxyuridine）染色标记新生细胞等荧光染色技术观察海马齿状回神经干细胞增殖、分化等神经发生过程;采用western blot、PCR检测Hes1蛋白及mRNA在癫痫的变化。结果:1.行为学观察癫痫组小鼠均出现癫痫发作,出现典型的外周胆碱能周围神经刺激表现及刻板反应。2.癫痫海马齿状回Ndrg2表达和神经发生相关因子的变化及其相关性（1）癫痫1 d和7 d,Ndrg2的蛋白及mRNA表达均显着性增加,并随时间逐渐递增且免疫荧光实验结果观察到Ndrg2阳性细胞广泛分布在颗粒细胞层和齿状回。（2）神经干细胞相关标志物Nestin、未成熟神经细胞标志物DCX、成熟神经元标志物Neun蛋白表达量在1 d和7 d显着性增加。癫痫1 d,齿状回颗粒细胞下区（subgranular zone,SGZ）区观察到癫痫组Nestin阳性细胞增生较多。癫痫7d,齿状回SGZ区观察到Brdu阳性细胞,实验结果显示癫痫组与对照组的Brdu数量无差异。（3）Ndrg2蛋白表达水平与DCX呈正相关性（r=0.83,p<0.05）,Ndrg2与Nestin在海马齿状回荧光染色共定位实验结果表明癫痫组共定位染色多于对照组。3.Ndrg2可能通过Hes1调控癫痫神经发生癫痫发作后,Hes1蛋白在1 d与7 d的蛋白表达量升高,与对照组相比具有显着性差异。与对照组相比,随时间增加,癫痫组的Hes1的mRNA水平逐渐升高;Ndrg2的mRNA表达水平与Hes1呈正相关性（r=0.79,p<0.05）。结论:1.PILO造模方式简便,成功率高,癫痫行为表现明显。2.癫痫发作后,Ndrg2蛋白及神经发生相关标志物的蛋白水平表达增加,和癫痫发作后海马齿状回的神经细胞增殖时间具有一致性和相关性,Ndrg2可能参与癫痫发作后海马齿状回的神经发生过程。3.海马Ndrg2表达增加和Hes1分子表达增加具有相关性,故推测Ndrg2可能通过Hes1参与癫痫发作后海马齿状回的神经发生。
袁萍[2]（2020）在《Notch信号途径对未成熟脑惊厥持续状态后海马神经发生和癫痫形成的调控作用》文中认为第一部分未成熟脑SC后不同时期海马神经发生和Notch信号途径的动态演变特征目的:探索未成熟脑在惊厥持续状态（Status convulsion,SC）后不同时期海马区神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）增殖、迁移、分化的动态演变过程,明确Notch信号途径在SC后不同时期的变化特点。方法:选取20日龄的健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠120只,随机分为SC模型组60只和正常对照组60只。采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导建立SC模型,进行如下实验:（1）用Ki67标记细胞增殖状态,免疫荧光染色检测SC后1d、3d、60d时海马齿状回（dentategyrus,DG）中细胞增殖情况。（2）SC模型建立后腹腔注射Brd U标记NSCs,于SC后7天免疫荧光染色检测Brd U分布情况,分析NSCs的迁移情况。（3）于SC后28天荧光染色双标Brd U和GFAP或双标Brd U和Neu N,以检测NSCs分化为星型胶质细胞和神经元的情况。（4）免疫印迹法检测SC后7d、28d、60d海马Neu N和GFAP蛋白的表达。（5）尼氏染色分析SC后28d海马神经元丢失的情况。（6）Q-PCR检测SC后1d、3d、60d海马Notch1和Hes1m RNA的表达差异。（7）免疫组化染色观察SC后1d、3d、60d Notch1蛋白表达情况和分布。免疫印迹分析SC后1d、3d、60d Notch信号途径相关主要蛋白Notch1、NICD1、Numb1的表达变化。结果:（1）与正常对照组比较,SC后1d海马DG区中Ki67阳性细胞增加（t=6.147,p=0.0003）,第3天表达更高（t=6.534,p=0.0002）。而在SC后60天,Ki67阳性细胞的数量迅速减少,甚至低于正常对照组（t=3.158,p=0.0134）。SC组在不同时期Ki67阳性细胞数差异有统计学意义（F=33.21,p<0.0001）。（2）SC后7天,正常对照组大鼠的Brd U阳性细胞多数分布于颗粒细胞下层,少部分开始迁移至颗粒细胞层,在CA1区和CA3区极少有Brd U阳性细胞。而SC组位于齿状回颗粒细胞下层的Brd U阳性细胞大部分已移位,除了向颗粒细胞层迁移外,在门区有较多新生细胞,还有少部分细胞在分子层。除DG区外,CA1区和CA3区均可见Brd U阳性细胞。（3）SC组DG区、CA1区、CA3区内Brd U/Neu N双标阳性细胞占Brd U阳性细胞的比率分别为57.29%、46.29%和53.84%,较正常对照组的68.24%、80.23%和76.37%均显着下降（p值均<0.05）;SC组DG区、CA1区、CA3区内Brd U/GFAP双标阳性细胞占Brd U阳性细胞的比率分别为38.24%、41.27%和43.72%,较正常对照组的20.49%、10.59%和19.37%显着增加（p分别<0.05,0.001,0.05）。（4）免疫印迹法检测SC组和正常对照组大鼠海马组织GFAP和Neu N的蛋白表达情况。SC后7天两组海马组织内GAFP和Neu N蛋白表达均无显着统计差异;而SC后28天,SC组GFAP表达量较正常对照组增加（t=3.679,p=0.0062）,Neu N表达量较对照组减少（t=3.621,p=0.0068）,这种差异在SC后60天仍然存在。（5）尼氏染色发现SC后28天海马结构严重破坏,神经元丢失,可见散在的核溶解,SC组海马DG、CA1、CA3区尼氏染色细胞计数较正常对照组均明显减少（p<0.05）。（6）SC后1d海马Notch1m RNA表达较正常对照组有升高趋势,但差异无统计学意义（t=2.291,p=0.0512）。SC后3d Notch1m RNA表达较对照组有明显升高（t=3.555,p=0.0074）,而SC后60d明显减少（t=4.942,p=0.0011）。不同时期SC组内差异具有统计学意义（p=0.0001）。SC后海马区Hes1m RNA的变化特征与Notch1相似,即SC后1d和3d海马区Hes1m RNA表达均高于正常对照组（t1=3.020,p1=0.0166;t3=4.657,p3=0.0016）,SC后60d较对照组减少（t=3.879,p=0.0047）,不同时期的SC组内差异具有统计学意义（p<0.0001）。（7）免疫组化方法检测SC后1天、3天、60天海马DG区Notch1蛋白的表达情况。可见Notch1在整个DG区都有表达。进一步免疫印迹法检测SC后1天Notch1蛋白表达开始较正常对照组增加（t=3.030,p=0.0163）,SC后3天增加更加明显（t=4.833,p=0.0013）,而SC后60天Notch1蛋白表达量却较对照组减少（t=4.463,p=0.0017）。NICD1蛋白有同样的变化趋势,而Numb1在SC后存在与Notch1相反的变化。结论:（1）幼年鼠长时程惊厥后急性期海马神经发生显着增加,慢性期神经发生减少。（2）SC后海马神经干细胞有明显的异位迁移现象,较多新生细胞向门区迁移,部分细胞迁移至内分子层、CA1区和CA3区。（3）SC后海马神经干细胞分化比例失衡,神经元损伤增加,星形胶质细胞增生,导致海马结构破坏。（4）SC后急性期海马内Notch信号途径被激活,慢性Notch信号途径被抑制。Notch信号途径的动态改变规律与SC后海马神经发生的动态变化一致。第二部分SC后急性期干预Notch信号途径对未成熟脑海马神经发生的影响目的:探索在SC后急性期抑制Notch信号通路后,海马神经干细胞增殖、分化的变化情况,观察其对SC所致胶质增生和海马神经元丢失的影响。方法:选取20日龄的SD大鼠60只,采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导建立SC模型后,侧脑室注射γ-分泌酶（γ-secretase）抑制剂DAPT干预Notch信号途径的活化状态。将实验对象随机分为SC模型组、侧脑室注射DAPT组和侧脑室注射溶媒DMSO组,进行如下实验:（1）SC后3天免疫印迹法检测Notch1蛋白表达情况,验证DAPT对Notch信号通路的影响。（2）Bru U标记NSCs,免疫荧光方法检测SC后3天海马DG区神经干细胞增殖情况。（3）免疫荧光染色双标Brd U和GFAP或双标Brd U和Neu N,检测SC后28天DG区神经干细胞分化为星型胶质细胞和神经元的情况。（4）免疫印迹法检测SC后28天和60天海马组织GFAP和Neu N的蛋白表达。（5）尼氏染色观察SC后28天海马神经元丢失的情况。结果:（1）SC后3天抑制剂DAPT组大鼠Notch1蛋白表达低于SC组（t=3.194,p=0.0127）,也低于溶媒DMSO组（t=2.910,p=0.0196）。而DMSO组Notch1蛋白表达与SC组比较无明显差异。（2）SC后3天注射DAPT组大鼠海马DG区Brd U阳性细胞显着少于SC组,（t=4.923,p=0.0012）,溶媒DMSO组海马神经干细胞增殖情况与SC组无明显差异。（3）SC后28天,DAPT组中Brd U、Brd U/GFAP双阳性、Brd U/Neu N双阳性细胞数平均分别为27.29、7.36、18.01,均少于SC组（分别为68.24、25.93、38.89）和DMSO组（分别为65.33、24.17、37.45）,差异有统计学意义（与SC组比较p分别为<0.05,0.01,0.05;与DMSO组比较p均<0.05）。Brd U/GFAP双阳性细胞比率在DAPT组为27.0%,低于SC组的38.0%和DMSO组的37.0%（p<0.01）。Brd U/Neu N双阳性细胞比率在DAPT组为66.0%,高于SC组的57.0%和DMSO组的57.3%（p<0.05）。（4）SC后28天DAPT组海马内GFAP表达较SC组和DMSO组均有减少（p<0.05）,SC与DAPT组的差异到SC后60天更加明显（t=4.325,p=0.0025）。SC组与DMSO组的GFAP蛋白表达比较无显着统计学差异。SC后28天DAPT组海马内Neu N表达较SC组有增加（t=2.464,p=0.0390）,这种差异到SC后60天更加明显（t=3.363,p=0.0099）。SC组和DMSO组的Neu N蛋白表达在SC后28天无统计学差异,但到SC后60天DAPT组有所增加（t=2.779,p=0.0240）。（5）尼氏染色显示,DMSO组CA3区细胞排列较SC组相对整齐、致密,核溶解较SC组减少。但在CA1区,DMSO组仍见明显核溶解,细胞排列较紊乱。在DAPT组,CA3区和CA1区的神经元排列均较SC组更加整齐、紧密,细胞层次清晰,细胞大小和形态基本正常,胞浆内有均匀蓝染的Nissl体颗粒,在CA3区和CA1区神经元丢失较SC组和DMSO均有减少。结论:DAPT干预可以有效抑制未成熟脑SC后急性期Notch信号通路的活化水平,可显着抑制海马神经干细胞的增殖及海马神经干细胞向胶质细胞方向分化,增加神经干细胞分化为神经元的比例,减少SC后神经元丢失,有助于修复海马结构。第三部分SC后急性期干预Notch信号途径对未成熟脑癫痫形成的影响目的:探讨急性期使用DAPT干预Notch信号途径对未成熟脑癫痫形成机制的影响。方法:选取72只20日龄SD大鼠,采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导建立SC模型后,侧脑室注射DAPT干预Notch信号途径的活化状态。采用随机数字法将实验动物随机分成正常组、SC组和DAPT组每组各24只。其中,正常组5只和拟建模组10只大鼠在建立SC模型前3天安装颅内脑电图电极,待大鼠伤口愈合后建立SC模型。建立SC模型后,DAPT组在SC模型建立后侧脑室注射DAPT抑制Notch通路活性。长时程脑电图监测观察慢性期自发性反复癫痫发作（spontaneousrecurrentseizures,SRS）的情况。于SC后28天留取脑组织标本,透射电镜观察海马突触超微结构的差异。体外无镁诱发脑片放电的方法分析SC后28天海马脑片惊厥易感性的变化。Timm染色分析SC后28天海马苔藓纤维出芽情况。结果:（1）透射电镜显示,与正常对照组相比,SC组突触前膜活性带长度减少（t=3.406,p=0.0067）,突触间隙增宽（t=3.441,p=0.0063）,突触后膜致密物模糊不清,突触后膜致密物厚度减少（t=3.213,p=0.0093）。与SC组比较,DAPT组突触前膜活性带长度增加（t=2.242,p=0.0489）,突触后致密物厚度增加（t=2.267,p=0.0468）,突触间隙宽度增大的幅度较SC组无显着差异。（2）脑电图监测显示,DAPT干预组在SC后慢性期也发现有SRS,但其平均每次发作的持续时间（t=2.326,p=0.0423）、放电频率（t=3.181,p=0.0098）以及平均每天发作的次数（t=2.256,p=0.0477）较SC组均明显减少。肉眼观察DAPT组大鼠行为学表现较SC组严重程度显着减轻,主要为双眼凝视、面肌抽搐,少有单侧或双侧的前肢阵挛。（3）利用膜片钳技术记录海马脑片在无镁记录液诱导后的自发性放电。DAPT组平均潜伏期为25.64min,长于SC模型组14.16min,差异有统计学意义（t=3.364,p=0.0099）。SC组和DAPT组脑片自发性放电持续发作时间均以小于5分钟的次数最多,其中DAPT组中平均为4.10次,少于SC组的6.46次（t=3.119,p=0.0143）。DAPT组中发作时间超过30分钟的平均为0.80次,少于SC组1.86次（t=3.027,p=0.0164）。（4）苔藓纤维染色发现,同龄正常鼠CA3区和DG区可见少量细小苔藓颗粒。SC后28天SC组CA3区和DG区苔藓纤维颗粒明显增加,Timm评分增加（t=4.189,p=0.0030）,苔藓纤维密度增加（t=4.444,p=0.0022）。DAPT干预后CA3区和DG区Timm评分及苔藓纤维颗粒密度均较未干预SC组无显着差异。结论:SC后急性期使用DAPT干预Notch信号途径可一定程度修复突触超微结构损伤,降低未成熟脑惊厥易感性,有效减轻SRS期痫性放电的严重程度,提示SC后急性期抑制Notch信号通路有助于阻止癫痫形成,其作用机制可能与SC后海马苔藓纤维出芽无明显关系。
周超[3]（2020）在《膜联蛋白2在创伤性脑损伤中的神经发生作用及其机制研究》文中指出目的创伤性脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）引起脑组织缺损、神经元丢失,导致严重残疾和神经功能障碍,为患者本人和家庭带来极大的精神压力和经济负担。然而目前针对TBI仍没有确切有效的手段来修复受损的神经功能。研究发现,包括人类在内的成年哺乳动物大脑侧脑室下区（subventricular zone,SVZ）和海马颗粒层下区（Subgranular zone,SGZ）存在神经干细胞（Neural stem cells）/神经前体细胞（Neuroblast）（以下统称神经前体细胞）。有趣的是,TBI在引起脑损伤的同时,也诱发、增强了这些神经前体细胞增殖和迁移等过程（神经发生）。研究脑损伤后神经发生机制,促进修复受损的神经功能,具有广阔的临床应用前景。膜联蛋白2（Annexin 2）是一种由ANXA2基因编码,与细胞骨架动力学关系密切,参与多种细胞存活、增殖、迁移以及信号转导的多效蛋白。最新文献报道Annexin 2在TBI后具有神经保护作用,ANXA2基因缺陷小鼠TBI后具有更差的长期神经功能缺损。是否Annexin 2参与了TBI后神经发生尚无报道。为此,本研究主要通过控制性皮层损伤（Controlled cortical impact,CCI）,建立小鼠中度TBI模型,检测Annexin 2表达分布,以及干扰ANXA2表达对神经功能恢复的影响;在体外通过神经球和SVZ外植体（SVZ explants）培养,检测ANXA2表达对神经前体细胞增殖和迁移的作用;最后在体内、外通过应用重组膜联蛋白2（recombinant Annexin 2,rA2）干预,探讨Annexin 2对神经前体细胞增殖、迁移作用的分子机制。方法1.检测成年人TBI大脑神经发生。筛选收集重庆医科大学法医学教研室标本库内TBI病史成年人伤侧SVZ附近脑组织,石蜡包埋固定、切片,免疫荧光实验同时检测Annexin 2以及神经前体细胞标志物DCX,寻找成年人TBI神经发生证据及其与Annexin 2表达的关系。2.检测Annexin 2在小鼠TBI后脑内的表达。60只C57BL/6成年雄性小鼠,随机分为sham组（n=12）和TBI组（n=48）,通过CCI建立中度TBI模型。免疫印迹实验检测sham小鼠和TBI小鼠CCI后第6小时,1、3、5、7、14、28天伤侧半球Annexin 2表达变化趋势;免疫荧光实验检测CCI后第7天Annexin 2在小鼠TBI后脑内表达分布。3.检测Annexin 2对小鼠TBI后神经功能恢复的影响。58只成年、雄性C57BL/6小鼠随机分成4组:sham组（n=13）,vehicle组（n=13）;siR-ANXA2组（n=16）;和siR-scramble组（n=16）。CCI前15天侧脑室注射ANXA2干扰腺相关病毒或对照试剂。分别在CCI前1天,CCI后第1、3、5、7、14、21天通过抓线实验（Wire grip test）和神经功能缺损评分（Neurological severity scores,NSS）检测小鼠感觉-平衡运动功能;CCI后第16天开始,通过莫氏水迷宫（Morris water maze,MWM）检测小鼠空间学习记忆功能恢复情况。4.研究Annexin 2在体外对神经前体细胞的增殖、迁移作用。从C57BL/6小鼠SVZ区提取神经前体细胞和SVZ外植体进行体外培养,应用ANXA2干扰和过表达腺病毒干预,通过免疫荧光实验检测BrdU阳性比例,探讨Annexin 2对神经前体细胞增殖的作用;通过SVZ外植体迁移实验,检测神经前体细胞迁移距离,探讨Annexin 2对神经前体细胞迁移的影响。5.探讨Annexin 2对神经前体细胞的增殖、迁移作用机制。体外培养的神经前体细胞中给与梯度浓度的rA2,免疫印迹实验检测对增殖迁移相关PDK1通路影响及其下游分子激活情况。应用PDK1抑制剂OSU-03012以及ANXA2干扰腺病毒,验证对PDK1-Akt-Girdin信号通路的作用;动物体内实验,24只成年雄性C57BL/6小鼠随机分成sham组、Control组、rA2组、rA2+OSU-03012组,每组6只。CCI后6小时开始通过侧脑室导管注射rA2或对照溶剂,并腹腔注射OSU-03012,每天1次,连续十天。并在CCI后第3天开始,以50mg/kg剂量BrdU,每天1次,腹腔注射,连续7天。通过免疫荧光实验,检测DCX、BrdU和NeuN指标,验证Annexin 2通过PDK1信号通路促进了神经前体细胞增殖和迁移。结果1.所有3例成年人TBI后伤侧SVZ附近脑组织中均发现有DCX阳性神经前体细胞,并且这些细胞同时表达Annexin 2。2.小鼠CCI后伤侧半球Annexin 2在第6小时即表达显着增高（**p<0.01）,持续增加至第7天达到高峰（****p<0.0001）,然后逐渐降低。免疫荧光证实,增加的Annexin 2表达主要分布在伤侧SVZ附近,并于SVZ区DCX阳性神经前体细胞和伤灶附近神经元共表达。3.下调CCI后小鼠脑内Annexin 2的表达,（1）增加了NSS评分和降低了抓线测试评分（****p<0.0001）;（2）增加了MWM定位航行实验中小鼠寻找隐藏平台的潜伏期（****p<0.0001）、降低了在隐藏平台耗时比例（*p<0.05）和减少了空间探索实验中小鼠穿越原隐藏平台位置次数（*p<0.05）。4.体外实验,（1）下调神经前体细胞Annexin 2表达,降低了神经球中BrdU阳性细胞比例（**P<0.01）和SVZ外植体中神经前体细胞迁移距离（***P<0.001）;（2）上调神经前体细胞Annexin 2表达,增加了神经球中BrdU阳性细胞比例（****P<0.0001）和SVZ外植体中神经前体细胞迁移距离（####P<0.0001）。5.免疫印迹实验表明rA2干预体外培养的神经前体细胞,增加了PDK1ser241和下游分子Aktser473,Girdins-1416磷酸化（****P<0.0001）。免疫荧光实验证实,侧脑室连续注射rA2,增加了SVZ区DCX阳性面积比例（####P<0.0001）,增加了伤灶周围DCX/NeuN双染细胞数量（****P<0.0001）、BrdU/NeuN双染细胞数量（***p<0.001）、SGZ区DCX阳性细胞数量（###p<0.001）和海马BrdU/NeuN双染细胞数量（##p<0.01）,而PDK1抑制剂OSU-03012腹腔注射削弱了rA2的这一作用。结论TBI后Annexin 2在小鼠伤灶附近和伤侧SVZ中表达增加,并通过PDK1-Akt-Girdin信号通路促进SVZ和SGZ的神经前体细胞增殖并引导SVZ神经前体细胞向伤灶迁移,最终促进小鼠神经功能恢复。
陈云飞[4]（2020）在《人脂肪间充质干细胞来源的外泌体通过抑制小胶质细胞/巨噬细胞活化促进创伤性脑损伤大鼠神经功能的恢复》文中提出研究背景:创伤性脑损伤（Traumatic Brain Injury,TBI）是45岁以下,年轻个体死亡和残疾的主要原因,幸存的患者可能出现认知和记忆缺陷,视力和听力的丧失,运动功能障碍以及各种心理问题。TBI还是慢性神经退行性病变（如阿尔兹海默病,帕金森病等）的已知风险因素。然而迄今为止,在临床上TBI仍缺乏有效的治疗措施。间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）是一种成体多能干细胞,来源于中胚层,具有多向分化和自我更新的能力,且免疫源性低,目前被认为是治疗损伤性疾病比较理想的干细胞。许多动物实验研究表明MSCs可显着改善TBI后神经功能障碍,其主要机制可能是通过旁分泌多种细胞因子发挥治疗作用,而并非细胞替代效应,间充干细胞来源的外泌体（exosomes）可能介导了主要的治疗作用。最新的研究证据表明,MSCs来源的exosomes可通过减轻损伤组织的炎性反应,降低功能细胞的凋亡,促进组织再生和血管新生,改善多种疾病的病理过程,而且与MSCs相比,exosomes治疗不存在栓塞和免疫排斥的风险,且便于批量化生产,易于存储,更加安全,故用exosomes替代MSCs治疗TBI将是一种更加安全而有效的治疗手段。研究目的:研究人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSC）来源的外泌体（hADSC-ex）对TBI的治疗作用及其潜在的机制。研究方法:通过Feeney自由落体法构建大鼠TBI模型,损伤后24小时,进行对侧脑室注射 hADSC,hADSC-ex 或磷酸盐缓冲液（Phosphate-buffered saline,PBS）。通过改良大鼠神经功能缺损评分（Modified Neurological Severity Scores,mNSS）和前肢踩空试验（Footfault test）,评估治疗后感觉运动功能的恢复;定量PCR和ELISAs检测受损脑组织和脑脊液中炎症因子的表达;CD68免疫组织化染色检测损伤灶周边区域小胶质/巨噬细胞的浸润;Tunel-NeuN免疫荧光染色检测损伤灶周边区域神经元凋亡;Brdu-NeuN和Brdu-GFAP免疫荧光染色检测海马齿状回（dentate gyrus,DG）神经再生和损伤灶周边区域星形胶质细胞增殖。侧脑室注射DiR标记的hADSC-ex（DiR-hADSC-ex）后,通过小动物活体成像仪观察DiR-hADSC-ex的迁移和生物分布。侧脑室注射DiI标记的hADSC-ex（DiI-hADSC-ex）后,对大鼠脑冠状切片和分离的神经细胞,进行IBA1或CD11b（小胶质细胞）,GFAP（星形胶质细胞）,NeuN或MAP2（神经元）和MBP（少突胶质细胞）神经细胞标记物的免疫荧光染色,以确定DiI-hADSC-ex在体内的细胞摄取。原代混合神经细胞与DiI-hADSC-ex共孵育24小时,通过Cytation5细胞成像仪检测每种神经细胞中DiI荧光强度随时间的变化。最后,在原代小胶质细胞LPS+IFN-γ诱导炎症模型中,hADSC-ex共孵育处理12小时后,通过定量PCR检测M1（促炎表型）相关因子的表达,Westerblot检测NF-κB和p38 MAPK信号通路亚基磷酸化水平的改变,免疫荧光检测p65亚基的核转位。研究结果:TBI后24小时,侧脑室注射hADSC-ex,促进大鼠感觉运动功能的恢复,降低受损脑组织和脑脊液促炎因子的表达,减少损伤灶周边区域小胶质细胞/巨噬细胞浸润和神经元凋亡,促进神经再生和星形胶质细胞增殖,且治疗效果与hADSC相当。同时,体内连续荧光成像显示,DiR-hADSC-ex在对侧脑室注射后,DiR荧光信号逐渐向病变区域富集。大鼠脑冠状切片和分离的神经细胞免疫荧光染色结果显示,DiI荧光信号主要与IBA1或CD11b阳性的小胶质细胞/巨噬细胞有明显的重叠。在原代混合神经细胞中,DiI荧光信号显着地富集于小胶质细胞。在原代小胶质细胞LPS+IFN-γ诱导炎症模型中,hADSC-ex抑制了 M1相关因子的表达,降低了 p65,IKKα/β,IKB α和p38亚基的磷酸化水平和p65亚基的核转位。研究结论:hADSC-ex脑室注射后优先被小胶质细胞/巨噬细胞摄取,并通过NF-κB和p38-MAPK信号通路抑制其在损伤过程中的活化,减轻神经炎症反应,从而改善损伤微环境,促进神经功能恢复。
张雅涵[5]（2020）在《七氟醚后处理改善缺血缺氧脑损伤新生大鼠海马神经迁移异常的作用及其机制》文中进行了进一步梳理目的:新生儿缺血缺氧性脑病（HIE）是指围产期窒息所致的新生儿脑损伤性疾病,伴有脑结构发育异常以及脑性瘫痪、癫痫及行为异常等后遗症,严重的威胁新生儿的生命健康。目前临床上使用的亚低温治疗以及氧疗等方法虽然对新生儿缺血缺氧性脑损伤有一定缓解作用,但远期治疗效果仍非常不乐观。寻找新型治疗方法减轻缺血缺氧性脑损伤,改善患儿远期预后仍迫在眉睫。诸多研究逐渐解释了新生儿缺血缺氧性脑病潜在的病理机制。缺血缺氧主要损伤大脑皮层,海马以及大脑室下区神经元。受损的神经元经历内环境稳态失衡,糖酵解ATP产能异常导致新生神经元能量代谢异常和凋亡、自噬、坏死、炎性等分子信号被过度激活导致的神经祖细胞程序化发育破坏甚至死亡。海马及海马环路作为大脑古皮质,在空间记忆力,学习能力以及情感调控中发挥重要作用。海马齿状回颗粒下层的新生神经元经历发生、迁移等过程最终将成熟神经元整合到现存的海马神经环路,对海马依赖性学习记忆功能尤其是新信息的储存,整理以及脑内信号传递处理有重要意义。目前研究发现,哺乳动物的大脑两个区域:海马和沿室壁的室下区（SVZ）侧脑室被认为是神经发生的重要部位。其中海马齿状回（DG）的祖细胞位于其颗粒下区域（SGZ）中。未成熟的海马神经元的神经发生与迁移在海马结构发育过程中逐渐成为密不可分的过程,且整个发生迁移过程极易受到外界环境刺激,许多有害刺激例如缺氧以及宫内发育受限等会对海马发育以及个体发育造成致命性损伤。实验研究证明全脑中风会过度诱发大脑神经再生,而对这些新生神经元进行追踪发现,过度增生的神经元最终发育为功能型细胞,整合到海马环路中的数量极少,甚至在分化为神经胶质细胞形成神经瘢痕,阻碍正常神经元的迁移,最终影响海马正常结构的形成。由诸多内在机制整合控制的海马发生迁移发育过程极易受到缺血缺氧等刺激影响,主要涉及神经发育调控因子NeuroD1,GDNF,CXCL12和以Reelin为代表的细胞外基质以及细胞间相互作用异常。由关键神经发生与迁移调控因子以及神经内在分子机制调控的正确的神经迁移发育过程对海马功能性回路的建立以及远期突触可塑性至关重要。近年来基于对大脑皮层Cajal-Retzius（CR）细胞发育以及其分泌的Reelin蛋白作用的研究逐渐揭示了海马神经迁移在中枢系统神经发育,神经元迁移,突触发生和海马依赖性远期学习记忆功能的重要作用。出生后,Reelin蛋白由脑内GABA能神经元持续分泌,其NPXY功能域进而与细胞膜表面受体ApoER2 and VLDLR结合,在SFK家族蛋白Src/Fyn激酶的激活下活化Dab1进一步激活Gsk-3β家族,最终作用于下游微管相关蛋白（MAP）影响神经元最终动态迁移过程。孕期缺氧刺激子代未成熟海马神经元Reelin蛋白变化的研究解释了Reelin蛋白介导的神经迁移紊乱与海马结构异常和远期行为认知障碍的潜在联系。近年来学者对于麻醉药对未成熟受损神经的保护作用展开了大量研究。七氟醚是新生儿手术中最常用的吸入性麻醉药,大量研究证实七氟醚预处理、后处理在大鼠缺血缺氧脑损伤中均具有显着保护作用。但以往的研究侧重于七氟醚通过抑制脑梗死体积,抑制神经细胞凋亡,抑制缺血再灌注后继发性炎症反应等减轻缺血缺氧脑损伤,而有关于七氟醚对缺血缺氧刺激下海马神经细胞发生与迁移的调控以及神经元排列重塑的作用研究鲜有报道。本课题首先探究缺血缺氧是否导致新生儿海马齿状回迁移发育异常、神经排列紊乱以及远期神经认知障碍,其次探究七氟醚后处理对缺血缺氧后神经迁移损伤以及远期行为认知障碍是否具有保护作用。最后探究七氟醚是否通过靶向调节神经迁移调控因子Reelin蛋白以及下游Reelin-Dab1通路,行使其修复受损后海马迁移发育异常,改善海马依赖性学习记忆功能的神经保护作用。研究方法:1.健康的SPF级SD新生七天大鼠,体重12-20g,由中国医科大学附属盛京医院本溪实验动物中心提供。饲养环境温度恒温24±2℃,相对湿度为50±10%且进食水自由。白昼黑夜更替12h:12h。七氟醚持续吸入麻醉新生7天SD大鼠,行左侧颈总动脉结扎手术。取仰卧位,安尔碘消毒皮肤后,做正中切口暴露左侧颈总动脉,用7-0丝线两次结扎动脉,缝合皮肤切口。术毕待其清醒后放回母鼠身边继续喂哺2h,然后将大鼠放入自制缺氧箱中（箱底部放有碱石灰吸收二氧化碳和湿气）并浸于36.5±5℃恒温水浴箱内。以2L/min流量向缺氧箱持续输入8%O2-92%N2的湿化混合气体2h来制备HIE模型。七氟醚后处理为HIE后立即吸入2.5%七氟醚（1.0MAC）30min。2.实验动物分组:将新生7天SD大鼠随机分组。第一部分实验中分为2组:（1）假手术组（Sham GROUP）,（2）缺血缺氧组（HI Group）,每组动物20只（n=20）。第二部分实验分为3组:（1）假手术组（Sham Group）,（2）缺血缺氧组（HI Group）,（3）缺血缺氧2.5%七氟醚后处理组（HI+Sev Group）,每组动物25只（n=25）。第三部分实验分为4组:（1）假手术组（Sham Group）,（2）缺血缺氧组（HI Group）,（3）缺血缺氧2.5%七氟醚后处理组（HI+Sev Group）（4）缺血缺氧2.5%七氟醚后处理加Reelin降解酶抑制剂组（HI+Sev+G Group）,每组动物35只（n=35）。3.各组新生大鼠生后第8,14,21天免疫荧光检测三个时间点内神经发生。生后第14,21天用免疫荧光检测神经迁移情况。生后第21天用尼氏染色观察DG区神经元排列方式以及神经元密度变化。生后第14,21天用免疫荧光检测Reelin表达情况。生后第14天用Western blot法检测左侧海马Reelin,Dab1,P-Dab1,Gsk-3β,P-Gsk-3β,total Tau,,P-Tau蛋白表达量。生后28到35天进行旷场、水迷宫和八臂迷宫实验检测大鼠神经行为学变化。结果:第一部分实验结果:生后8,14天,21天进行的免疫荧光结果显示,与Sham组相比,第8天海马齿状回神经发生显着增加（p<0.05）,而在第14天和21天检测时间点我们发现,HI组神经发生能力与Sham组无明显差异。HI组生后14天,21天进行的免疫荧光结果显示,海马齿状回新生神经元迁移阻滞于齿状回颗粒下层现象,迁移过程出现明显异常（p<0.05）,生后21天进行尼氏染色结果显示神经元排列杂乱且密度显着降低（p<0.05）。远期学习记忆功能检测结果显示,与Sham组相比,HI组从训练第二天开始,逃避潜伏期明显延长（p<0.05）且第六天穿越平台象限结果显示,HI组穿越平台象限次数明显降低（p<0.001）。第二部分实验结果:生后8,14天,21天进行的免疫荧光结果显示,与HI组相比,第8天HI+Sev组大鼠海马齿状回神经发生情况显着降低（p<0.05）,而在第14天和21天检测时间点各组之间神经发生能力无明显差异。生后14天,21天进行的免疫荧光结果显示,与Sham组相比HI+Sev组大鼠海马齿状回神经迁移阻滞现象得到显着缓解（p<0.05）,神经元生存比例以及神经元排列基本结构得到恢复（p<0.05）。水迷宫结果显示,七氟醚后处理能显着缩短潜伏期且增加穿越平台象限次数（p<0.05）。免疫荧光检测结果显示,大鼠生后第14,21天,HI组海马齿状回Reelin蛋白持续高表达（p<0.05）。七氟醚后处理能显着降低Reelin蛋白的持续性高表达（p<0.05）。第三部分实验结果:生后8,14天,21天进行的免疫荧光结果显示,与Sham组相比,第8天HI组大鼠海马齿状回神经发生情况显着增加（p<0.05）,七氟醚后处理能显着降低过度增殖的新生神经元（p<0.05）。而应用Piceatannol对神经发生无明显作用。在第14天和21天检测时间点各组之间神经发生能力无明显差异。七氟醚后处理加生后14天,21天进行的免疫荧光结果显示,与Sham组相比,HI组大鼠海马齿状回神经迁移受到阻滞,神经元生存比例以及神经元排列基本结构异常（p<0.05）。与HI组相比,七氟醚后处理能恢复以上损伤（p<0.05）。而在HI+Sev+G组中,七氟醚作用被逆转（p<0.05）。Western-blot结果显示,与Sham组相比,HI组中Reelin、活化的Dab1（P-Dab1）、活化的GSK-3β（P-GSK-3β）和磷酸化微管相关蛋白Tau水平显着升高（p<0.05）.七氟醚后处理组能显着抑制被HI激活的Reelin/Dab1/GSK-3β/Tau通路（p<0.05）。与HI+Sev组相比,HI+Sev+G组能阻断七氟醚后处理的作用（p<0.05）。水迷宫实验结果显示,与Sham组相比,HI组从训练第二天开始,逃避潜伏期明显延长（p<0.05）且穿越平台象限次数明显降低（p<0.05）。七氟醚后处理能显着缩短潜伏期且增加穿越平台象限次数（p<0.05）.应用Piceatannol能逆转七氟醚的作用。八臂迷宫结果显示,与Sham组相比,HI组大鼠运动总距离和参考记忆错误显着增加（p<0.05）,七氟醚后处理能显着降低HI组大鼠运动总距离和参考记忆错误（p<0.05）。应用Piceatannol后七氟醚的作用被逆转。结论:缺血缺氧后,大鼠海马齿状回神经迁移阻滞,24小时后神经元反应性增殖,远期神经元排列杂乱且成年后空间记忆学习能力受损。七氟醚后处理靶向性调节Reelin蛋白表达,抑制被缺血缺氧刺激激活的Reelin/Dab1信号通路,改善海马齿状回神经元迁移阻滞现象,恢复受损的海马结构并缓解大鼠远期空间学习记忆障碍。
陈嘉妮[6]（2019）在《弥漫性脑损伤后Wnt/β-catenin信号通路在海马表达的实验性研究及法医学意义》文中认为目的研究弥漫性脑损伤后Wnt/β-catenin信号通路在海马组织中的表达及分布,探讨Wnt/β-catenin信号通路在脑损伤中的作用机制及其与脑损伤时间的关系,为弥漫性脑损伤的法医学鉴定及分子病理研究提供相关的实验依据。方法健康成年SD大鼠30只,雌、雄均有,体质量300±10g,随机分成正常对照组、DBI 6h组、DBI 1d组、DBI 2d组、DBI 5d组、DBI 7d组,共6组,每组5只。参照Marmarou原理的自由落体打击法建立DBI模型,观察弥漫性脑损伤后大鼠的行为学变化,采用H-E染色光学显微镜下观察大鼠海马组织的病理改变;取大鼠脑内的海马组织,免疫组化染色及Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a、β-catenin、CyclinD1蛋白的表达及变化。结果正常对照组大鼠海马组织中Wnt3a、β-catenin、CyclinD1均有少量表达。与正常对照组相比,模型组海马组织中Wnt3a的表达在损伤后6h开始升高,1d达到高峰,2d后逐渐降低,损伤后7d又略呈升高趋势;β-catenin的表达在损伤后6h开始升高,ld达到高峰,然后逐渐降低,损伤后7d降至正常水平;CyclinD1的表达则在损伤后6h开始急剧升高并达到高峰,ld后逐渐降低,损伤后7d降至正常水平。结论Wnt/β-catenin信号通路在弥漫性脑损伤中具有重要的调控作用,其调控机制可能是通过该信号的激活与表达,促进弥漫性脑损伤后损伤神经的修复;该信号Wnt3a、β-catenin、CyclinD1蛋白表达在时间上存在着差异性,有可能作为推断早期损伤时间的指标,对弥漫性脑损伤分子病理机制的研究及颅脑损伤的法医学鉴定具有一定的指导意义。
屈杜洁[7]（2019）在《Wnt/β-catenin信号介导的海马神经元发生参与睡眠剥夺及脑创伤导致的认知功能下降》文中指出睡眠剥夺（sleep deprivation,SD）是指在一段时间内由各种原因引起的显着睡眠丧失,包括睡眠质量或数量的减少。随着现代社会生活节奏的加快,工作压力的增加,倒班工作等特殊职业的原因[1],睡眠剥夺已成为一种普遍的社会现象。长时间的睡眠剥夺易引起机体免疫系统失调、内分泌代谢紊乱、心血管疾病、神经认知功能下降、精神心理等疾病,其高合并症、低生活质量及死亡率的增加均与睡眠障碍有关。因此,与其他医学学科相比,睡眠医学越来越受到人们的关注。创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）亦称为脑创伤、颅脑损伤或头部创伤,是指由创伤引起的脑组织损伤,是导致儿童和中青年人群死亡、残疾和精神障碍的主要原因。大多数创伤性脑损伤患者患有创伤后应激障碍（Post-traumatic stress disorder,PTSD）、认知功能障碍和残疾,给家庭和社会带来了巨大的经济负担。Wnt信号通路是一种基本的生长调节途径,其中经典的Wnt/β-catenin信号通路在神经干细胞的增殖、分化、迁移和凋亡中起重要作用。Wnts也是大多数成年哺乳动物组织干细胞的关键驱动因子,从癌症和发育到动物的早期进化,Wnt信号对包括细胞增殖、分化和组织模式在内的发育过程是至关重要的,并且突变的Wnt信号传导途径组分通常导致多种与生长相关的病理性疾病和癌症。自从35年前Wnt家族的第一个成员被首次发现以来,人们对Wnt信号的兴趣一直在稳步上升。大量动物和人类的实验研究表明,海马新生神经元发生（neurogenesis）与认知和焦虑抑郁行为均有密切关系[2],而睡眠剥夺和创伤性脑损伤后是否影响海马新生神经元的发生,从而导致认知和行为障碍,尚未见相关研究。于是我们设计如下实验,研究睡眠剥夺和脑创伤后导致的认知功能下降行为是否通过Wnt/β-catenin信号通路介导的海马神经元发生参与的机制研究。本研究分为两部分:第一部分:Wnt/β-catenin信号参与睡眠剥夺导致认知功能下降的研究本部分实验通过对健康成年雄性野生型C57BL/6小鼠、多种基因修饰小鼠分别采用改良多平台水环境法制作小鼠睡眠剥夺模型,通过BrdU/DCX免疫荧光双标染色研究海马神经元的发生;采用Wnt信号报告基因Topgal小鼠[3]观察海马Wnt信号的改变;利用神经干细胞中激活Wnt信号的Nestin/ROSA/EX3小鼠[4]研究激活Wnt信号对睡眠剥夺小鼠海马神经元发生及认知和感觉运动协调能力的影响;通过高架十字迷宫和旷场实验检测小鼠的焦虑行为;通过转棒实验和Morris水迷宫分别测试小鼠的感觉运动协调能力和空间学习记忆能力。结果发现,与正常小鼠相比,SD 5天处理组小鼠无焦虑样行为,但空间学习记忆能力和感觉运动协调能力均明显降低。BrdU/DCX免疫荧光双标染色显示SD 5天后小鼠海马神经元发生明显减少。β-gal（Wnt信号的报告基因）染色显示SD 5天后小鼠在海马神经干细胞的表达显着降低。在Nestin/ROSA/EX3小鼠激活神经干细胞中的Wnt信号后,可以显着促进海马神经元发生,并改善SD小鼠的空间学习记忆能力和感觉运动协调能力。结论:Wnt/β-catenin信号参与睡眠剥夺引起的小鼠海马神经元发生减弱,激动Wnt信号可改善睡眠剥夺小鼠海马神经元发生及认知与运动功能下降。第二部分:Wnt/β-catenin信号参与创伤性脑损伤导致认知功能下降的研究本部分实验通过对雄性野生型C57BL/6小鼠、Wnt信号报告基因Topgal小鼠分别进行控制性皮层撞击建立控制性皮层撞击脑损伤模型,通过高架十字迷宫、旷场实验检测脑创伤后小鼠的焦虑行为,采用Morris水迷宫测试脑创伤后小鼠的空间学习记忆能力,运用BrdU/DCX免疫荧光双标染色,观察脑创伤后5天后小鼠海马神经元发生变化,利用Topgal小鼠进行控制性皮层撞击脑损伤模型,应用Nestin/β-gal免疫荧光双标染色观察神经干细胞中Wnt信号的改变,对创伤性脑损伤后小鼠给予Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂（1ithium chloride,LiCl）治疗后,观察氯化锂对Wnt信号和小鼠空间学习记忆能力的影响。结果发现,与假手术组小鼠相比,CCI 5天后小鼠空间学习记忆能力显着下降,出现明显的焦虑样行为,BrdU/DCX免疫荧光双标染色发现脑创伤5天后小鼠海马神经元发生减少,海马神经干细胞β-gal表达显着降低,给予氯化锂后,β-gal表达显着升高,空间学习记忆能力改善。结论:Wnt/β-catenin信号参与脑创伤引起的小鼠海马神经元发生减弱,氯化锂可改善脑创伤后的Wnt/β-catenin信号及学习记忆功能。
李慧[8]（2013）在《大鼠脑缺血再灌后Wnt7b/β-catenin信号通路在海马的表达与定位》文中研究指明研究背景：脑卒中是致死和致残的常见病因,中国内地平均每二十一秒就会有一个患者死于脑卒中类疾病,而且每十二秒会就会有一个新发病例,目前这类患者已有约达七百四十九万,而脑卒中的发病率仍居高不下,己成为中国人疾病中的第二大致死病因和第一大致残病因；现有患者中约有三分之二需要看护照顾,这给个人、家庭和社会三个方面都带来沉重的人力和经济负担。脑卒中发病比例中,缺血性脑卒中占60-80%,长期以来,缺血性脑卒中一直缺乏有效的防御手段和治疗措施,大多数患者都遗留有不同程度的偏瘫、疼痛和认知障碍等,虽然各类学者对脑卒中的病理生理机制的研究内容较深入,然而至今还没有能够研发出促进脑卒中患者神经功能恢复的有效药物和其他治疗手段,且多数研究尚处于理论阶段。研究目的：本实验通过建立局部脑缺血（MCAO）模型大鼠,在再灌注大鼠神经再生修复的过程中,研究大鼠脑组织海马齿状回颗粒下层,Wnt7b表达情况及其经典信号通路中分子：β-catenin的表达；初步探讨Wnt7b在脑缺血再灌注大鼠神经再生中的机制和作用。研究方法：60只Wistar大鼠,随机分为正常组和脑缺血再灌注组,用线栓阻塞大鼠大脑中动脉,制备大鼠局部脑缺血模型,90min后再灌注。术后在2h,1d,3d,7d,14d的时间点对模型进行神经功能评分。在上述各时间点,取海马组织,用RT-PCR、Q-PCR、免疫荧光技术检测不同组间大鼠Wnt7b mRNA和Wnt7b蛋白的差异性表达；用免疫荧光技术检测β-catenin的表达。研究结果：线栓阻塞法可以建立稳定的大鼠脑缺血再灌注模型；成年Wistar大鼠脑缺血再灌后2h和1d后,神经功能评分显着高于正常组（P＜0.01）,而在再灌注3d,7d,14d时,神经功能评分依然高于正常组（P＜0.05）；正常成年大鼠Wnt7b mRNA和Wnt7b蛋白呈低水平表达,大鼠脑缺血损伤后,在神经再生的过程中,Wnt7b mRNA表达显着增加（P＜0.01）：经典Wnt信号通路中的重要信号分子β-catenin表达也显着增加（P＜0.01）。结论：大鼠大脑中动脉阻塞90min可建立一种简易、稳定、理想的脑缺血再灌注损伤模型,该方法可重复性强,适合在基础实验研究中广泛应用；这种损伤可以使SGZ内的神经干细胞短暂再生；我们的实验首次用荧光定量PCR,普通PCR,免疫荧光染色等3种方法同时证明在大鼠脑缺血再灌注后,神经细胞再生的过程中,Wnt7b蛋白、Wnt7b mRNA和β-catenin同步上调,认为Wnt7b可能是通过经典Wnt/β-catenin信号通路对神经细胞的再生过程发挥了作用,并为下步实验：上调和下调大鼠脑内Wnt7b蛋白的水平；阻断β-catenin信号通路等进一步实验提供了可靠的理论基础。本课题说明Wnt7b可能是通过经典Wnt/β-catenin信号通路来调控神经干细胞的增殖分化,为如何调控内源性NSCs向着我们预期的方向增殖分化提供了一种新的思路。
江佩芳[9]（2012）在《CREB信号通路调控宫内炎症后仔鼠海马神经发生及分子机制研究》文中进行了进一步梳理围产期胎儿炎症反应综合征（Fetal Inflammatory Response Syndrome, FIRS）是造成早产和早产儿脑白质损伤的最常见原因,临床与流行病学资料证实早产儿脑白质损伤是儿童脑瘫的一个重要危险因素。由于早产儿脑白质损伤将影响神经系统发育,所以脑损伤后神经再生修复机制的研究将显得尤为重要。cAMP反应序列结合蛋白（CREB）是一种重要的核转录因子,调节启动子中具有环磷酸腺苷反应单元（CRE）的基因转录,在神经元再生、突触形成及学习记忆等方面具有重要的调节作用,是细胞内多种信号通路的一种关键成分。虽然国内外研究发现,缺氧缺血能诱导海马神经发生,但是对宫内炎症仔鼠脑白质损伤后海马神经发生的研究目前很少涉及,而且CREB信号通路是否参与脑白质损伤后海马神经发生和认知损害修复的分子机制尚不明确。本研究通过建立宫内炎症后仔鼠脑白质损伤模型,研究仔鼠生后不同时间点海马神经发生的规律；以及研究CREB信号通路是否参与脑白质损伤后海马神经发生；而且通过PI3K抑制剂LY294002和PDE4抑制剂Rolipram干预,探讨CREB信号通路在宫内炎症仔鼠脑白质损伤后海马神经发生中的作用和分子机制。从脑损伤自身修复角度进一步阐述CREB信号通路在神经发生及认知功能改善中的作用和分子机制,为防治早产儿脑白质损伤和儿童脑瘫的康复提供理论依据。目的：研究宫内炎症脑白质损伤后仔鼠生后不同时间点海马神经发生的规律,明确CREB信号通路是否参与调节脑白质损伤后海马神经发生,解释CREB信号通路在宫内炎症脑白质损伤后海马神经发生中的作用和分子机制,阐明CREB信号通路在宫内炎症脑白质损伤后海马神经发生及认知功能改善中的重要意义。方法：1.动物模型：实验动物分2组：①空白对照组：在各时间点和实验组等数量配对,②宫内炎症组：SD雌鼠孕15天于左右两侧宫颈内各注射大肠杆菌稀释液0.2mL,待其生产,制备宫内炎症后仔鼠脑白质损伤模型。各组仔鼠在不同时间点腹腔注射BrdU,24h后行主动脉灌注固定后制备3、7、14、28日龄脑组织石蜡标本,用免疫组织化学法检测BrdU阳性的增殖细胞数目变化；7日龄脑组织采用免疫荧光双标记（BrdU/Nestin）检测海马齿状回神经干细胞增殖情况；28日龄脑组织采用免疫荧光双标记（BrdU/NeuN、BrdU/GFAP）检测海马齿状回神经元与星形胶质细胞分化情况。2. Morris水迷宫法：水迷宫的水池直径为100cm,高60cm,水深51cm,水温（22±0.5）℃,站台高度为50cm,站台顶端平面10cm×10cm,平台没于水面下1cm,水池周围参照物保持不变。实验包括：①适应性训练：实验前1d让动物在无安全平台的水中适应性游泳2min；②定位航行试验：实验历时5d,每日分上下午系列,每个系列包括4次,操作者将大鼠面向池壁从不同象限入水,发现平台后,让其在平台上站立30s,将大鼠从平台上拿下来休息60s,再随机由下一象限入水进行试验,如果120s内找不到平台,则由操作者帮助其上平台,潜伏期记为最高分120s。记录大鼠找到平台的时间（逃避潜伏期）；③空间探索试验：第6天,撤去平台,取随机一点投大鼠入水池中,记录2min内大鼠穿过平台所在象限的时间。④探索实验结束后,休息三天,即水迷宫的第10天,再对全部大鼠进行一次水迷宫测试,方法同定位航行试验,测试其远期记忆的保持能力。3. CREB信号通路与神经发生：宫内炎症组和空白对照组动物在相应时间点（3、7、14、21、28日龄）断头取脑,应用RT-PCR及Western blot检测海马齿状回p-Akt、Survivin、p-CREB、BDNF、TrkB mRNA和蛋白质表达变化；应用免疫组化在28日龄对p-Akt、p-CREB、BDNF进行定位染色,进一步明确CREB信号通路的主要基因p-Akt、p-CREB和BDNF在海马齿状回神经细胞的表达情况。通过以上方法证明CREB信号通路参与宫内炎症脑白质损伤后海马神经发生。4. CREB信号通路干预：宫内炎症组和空白对照组动物侧脑室微量注射PI3K阻滞剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路,同时应用磷酸二酯酶（PDE4）抑制剂Rolipram,增加脑内cAMP浓度从而激活CREB信号通路。两组动物分别在28日龄进行Morris水迷宫实验观测仔鼠学习记忆能力改变,并通过激光共聚焦显微镜研究相应年龄点仔鼠海马齿状回神经细胞增殖和分化的变化,以及通过Western blot检测CREB信号通路主要组分p-Akt、p-CREB及BDNF蛋白的表达变化,进一步阐述CREB信号通路参与脑白质损伤后海马神经发生的分子机制。结果：1.宫内炎症组子宫及胎盘内血管充血、水肿,并见大量中性粒细胞浸润；宫内炎症组仔鼠脑白质出现弥漫性病理改变,表现为结构稀疏、呈筛网状,少数出现严重的凝固性坏死和囊状病变。2.定位航行实验结果显示宫内炎症组仔鼠游泳轨迹杂乱无章,逃避潜伏期较空白对照组显着延长（P<0.05）；经过寻找隐藏平台训练,两组动物的逃避潜伏期均有所下降,第4天以后两组动物的逃避潜伏期无显着性差异（P>0.05）。空间探索实验结果显示宫内炎症组仔鼠的穿越平台次数较空白对照组显着减少（P<0.05）,而且宫内炎症组仔鼠的远期记忆保持能力较空白对照组降低,逃避潜伏期较空白对照组显着延长（P<0.05）。3.宫内炎症组新生3,7,14日龄（P3,7,14）仔鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数较同日龄对照组显着增加（P<0.05）,28日龄（P28）仔鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数与对照组比较无显着性差异（P>0.05）。宫内炎症组新生7日龄（P7）仔鼠海马齿状回BrdU+/Nestin+细胞数较对照组显着增加（P<0.01）。官内炎症组新生28日龄（P28）仔鼠海马齿状回BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞数与对照组比较均无显着性差异（P>0.05）4.宫内炎症组仔鼠海马p-Akt mRNA和蛋白质表达与对照组比较有显着性差异（P<0.05）,于3,7,14日龄（P3,7,14）表达显着升高（P<0.05）。宫内炎症组仔鼠海马p-CREB mRNA和蛋白质表达与对照组比较有显着性差异（P<0.05）,于14,28日龄（P14,28）表达显着升高（P<0.05）。宫内炎症组仔鼠海马BDNF mRNA和蛋白质表达与对照组比较有显着性差异（P<0.05）,于3,7日龄（P3,7）表达显着升高（P<0.05）。免疫组化显示p-Akt、p-CREB、BDNF在海马齿状回有定位表达。5.予LY294002阻断PI3K/Akt信号通路发现LY294002组仔鼠逃避潜伏期较对照组显着延长（P<0.05）,经过5天的寻找隐藏平台训练,LY294002组的逃避潜伏期未见显着下降,并在第10天表现了较差的记忆保持能力,两组比较有显着性差异（P<0.05）。LY294002组仔鼠海马齿状回BrdU+/Nestin+细胞数较对照组显着减少（P<0.05）。LY294002组仔鼠海马p-Akt、p-CREB和BDNF蛋白质表达较对照组显着降低（P<0.05）。应用磷酸二酯酶（PDE4）抑制剂Rolipram激活CREB信号通路,发现LY294002+Rolipram组仔鼠逃避潜伏期较LY294002+生理盐水组显着缩短（P<0.05）,经过5天的寻找隐藏平台训练,LY294002+Rolipram组仔鼠的逃避潜伏期显着下降,并在第10天表现了良好的记忆保持能力,与LY294002+生理盐水组比较有显着性差异（P<0.05）,而与空白对照+生理盐水组比较无显着性差异（P>0.05）。而且实验发现LY294002+Rolipram组仔鼠海马齿状回BrdU+/Nestin+细胞数较LY294002+生理盐水组显着增加（P<0.05）。LY294002+Rolipram组仔鼠海马p-Akt、p-CREB和BDNF蛋白质表达较LY294002+生理盐水组显着增加（P<0.05）。结论：1.宫内炎症脑白质损伤可以造成学习记忆和认知功能缺陷；宫内炎症组仔鼠海马齿状回BrdU+细胞数和BrdU+/Nestin+细胞数显着增加,表明脑白质损伤可以诱导海马神经发生；经过5天寻找隐藏平台训练,宫内炎症组仔鼠的逃避潜伏期显着下降,表明脑白质损伤后机体存在自身修复机制,可以改善学习记忆和认知功能缺陷。2.宫内炎症组仔鼠海马p-Akt、p-CREB与BDNF mRNA和蛋白质表达较对照组显着性升高,而且发现p-Akt、p-CREB、BDNF在海马齿状回有定位表达情况,说明CREB信号通路参与调节宫内炎症脑白质损伤后海马神经发生。3.LY294002能减少海马神经发生、加重学习记忆和认知功能缺陷并降低p-Akt、p-CREB和BDNF蛋白质表达；Rolipram能促进海马神经发生、改善学习记忆和认知功能缺陷并增加p-Akt、p-CREB和BDNF蛋白质表达；说明Akt/CREB/BDNF信号通路可能是调节海马神经发生,改善学习记忆和认知功能缺陷的重要分子机制。
任秀君[10]（2007）在《针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响》文中研究说明研究目的:高脂血症（hyperlipidemia,HLP）由血中脂蛋白合成与清除紊乱所致,表现为血浆脂蛋白异常、血脂增高等,属于祖国医学的“痰浊”“瘀血”范畴。它是动脉粥样硬化等心脑血管疾病发生的重要危险因素,有效地防治HLP是防治心脑血管疾病的重要途径。脑血管疾病是目前严重危害人类健康的主要疾病之一。在我国死于脑血管病者居三大死因首位。其中缺血性脑血管疾病占60%～80%。脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高的“三高”特点,是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病。为了减少和延缓中风的发生,减轻中风后机体状态,从高血脂阶段早期进行针刺干预,是针刺防治中风的新视角,具有重要流行病学研究意义。高血脂与中风,神经干细胞与神经营养因子之间的关系是目前研究尚未进行探讨的部分,本研究试图通过建立高血脂合并脑缺血动物模型,并观察针刺的影响,探讨在高血脂阶段积极早期进行针刺干预,是否可通过升高神经营养因子的合成与分泌,从而促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,促进脑损伤的修复和再生。研究方法:应用大鼠喂养经典高脂饲料,化学诱导大脑中动脉血栓闭塞制造高血脂合并脑缺血模型。将动物随机分为八组:正常对照组、高血脂模型组、高血脂治疗组、脑缺血模型组、脑缺血治疗组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组。高血脂治疗组用电针三阴交、丰隆穴治疗10天。脑缺血治疗组用针刺人中、百会穴治疗7天。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组,先给大鼠喂养高脂饲料造成高血脂模型,治疗Ⅰ组电针三阴交、丰隆穴10天后,两组同时电针三阴交、丰隆穴,针刺人中、百会穴,7天后处死。正常对照组和模型组均不针刺。用生化方法检测各组治疗前后血脂四项。应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况。实验结束用免疫组化方法检测海马区和额叶皮层脑缺血病理改变、室管膜下区和大脑额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达情况。用酶联免疫法（ELISA）检测右侧大脑匀浆中神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）浓度。实验结果:1高血脂合并脑缺血模型的建立本实验选用经典高脂饲料喂养6周造成高脂血症大鼠模型,在此基础上用大脑中动脉FeCl3刺激血栓性闭塞法造成局灶性脑缺血,最终造成高血脂合并脑缺血模型。预实验结果显示,与同时段正常对照组比较,高血脂组4周、6周CHO、LDL-C、TG升高有显着差异,P<0.01,HDL-C没有显着差异。说明高脂饲料喂养4-6周可以造成大鼠高血脂模型。由于高血脂形成时间较长,饲养6周的高血脂症大鼠模型更近似于人类高血脂症的病理变化,正式实验定为6周。正式实验,42天,高脂饮料喂养的各组大鼠的CHO和LDL-C、TG与正常对照组大鼠比较,升高有显着性差异,P<0.01。HLD-C降低有显着性差异,P<0.01。证明高血脂症大鼠造模成功,可以进行实验。52天脑缺血造模后,在MCAO清醒（术后约1h）后,在1～2h内观察模型动物有脑缺血模型出现的神经功能缺失症状,各组大鼠在造模后1～2h的神经症状行为在评定上均有阳性反应,与正常对照组比较均有显着性差异p<0.01。HE染色结果可见,实验组动物脑缺血造模后,缺血灶出现在额叶,位置比较恒定,缺血灶内细胞排列散乱,并见大量神经元变性坏死,出现脑水肿表现,海马区大量神经元变性坏死,排列紊乱,各组有不同程度的神经元脱失现象等病理改变,说明本实验的脑缺血模型制作是成功的。本实验首次建立高血脂合并脑缺血的动物模型,此模型成功率高,死亡率小,重复性好,充分模拟了人类疾病的病理及生理改变。2正常大鼠血脂、HE染色结果、神经干细胞、NSE、神经营养因子的表达正常大鼠CHO 51.92±9.46mg/dL, HDL-C 26.80±8.16 mg/dL,LDL-C 30.50±8.19 mg/dL,TG47.98±12.18 mg/dL。HE染色结果显示,大鼠右侧海马区和额叶皮层神经细胞排列清楚,细胞形态清晰。神经干细胞标志,nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,在正常大鼠右侧脑内表达较少,在前脑背外侧伸展、侧脑室外侧壁可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞（背外侧伸展nestin:阳性细胞数63±9.40;面密度0.62±0.10%;光密度0.50±0.03%。PCNA:阳性细胞数185±10.60;面密度1.93±0.11%;光密度1.22±0.07%。vimentin:阳性细胞数95±6.31;面密度0.61±0.04%;光密度0.34±0.02%。Tuj-1:阳性细胞数56±7.69;面密度0.96±0.13%;光密度0.22±0.03%。侧脑室外侧壁:nestin:阳性细胞数41±5.61;面密度0.35±0.05%;光密度0.23±0.03%。PCNA:阳性细胞数114±22.79;面密度1.25±0.25%;光密度0.94±0.19%。vimentin:阳性细胞数48±11.85;面密度1.05±0.26%;光密度0.58±0.14%。Tuj-1:阳性细胞数35±4.69;面密度0.88±0.12%;光密度0.45±0.06%。）正常对照组大脑右侧额叶皮层相应区域表达更少。（nestin:阳性细胞数14±3.47;面密度0.11±0.03%;光密度0.09±0.02%。PCNA:阳性细胞数58±6.52;面密度0.64±0.07%;光密度0.39±0.04%。vimentin:阳性细胞数56±6.46;面密度0.22±0.03%;光密度0.11±0.01%。Tuj-1:阳性细胞数13±5.14;面密度0.08±0.03%;光密度0.05±0.02%。）右侧大脑匀浆中NSE（41.70±3.47 ng/dL）及神经营养因子NGF（79.36±7.07 pg/ml）、BDNF（5.66±0.86μg/L）、bFGF（51.20±6.05 ng/L）含量呈基础表达。3针刺对实验性高血脂大鼠的治疗作用3.1针刺对实验性高血脂大鼠血脂的作用经针刺治疗后,和高血脂模型组相比,高血脂治疗组大鼠的CHO、LDL-C、TG降低有极显着差异,P<0.01。HLD-C升高有极显着差异,P<0.01。说明针刺能降低实验性高血脂大鼠CHO、LDL-C、TG,升高HLD-C,调节血脂水平。3.2针刺对实验性高血脂大鼠右侧大脑SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1在实验性高血脂造模后大鼠脑内表达较少,在室管膜下区SVZ、背外侧角可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞,额叶皮质表达更少,与正常对照组相比,其阳性细胞数、面密度、光密度没有显着差异,P>0.05。针刺对实验性高血脂大鼠nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达影响不大。3.3针刺对高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中NSE的作用高血脂造模后,右侧脑匀浆中NSE浓度与正常脑匀浆中NSE浓度没有显着差异,P>0.05,说明高血脂本身不能影响右侧脑组织中NSE的分泌与合成。高血脂大鼠治疗组和模型组之间没有显着差异,说明针刺不能影响实验性高血脂大鼠NSE的分泌。3.4针刺对实验性高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组比较,高血脂模型组大鼠大脑匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显降低,P<0.05或P<0.01;与高血脂模型组比较,针刺治疗组BDNF显着升高,P<0.05,NGF、bFGF没有显着差异,P>0.05,但有升高的趋势。实验结果提示高血脂可降低大鼠大脑中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成,针刺可升高高血脂状态某些神经营养因子的含量,如BDNF。4针刺对实验性脑缺血大鼠的治疗作用4.1针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用59天,与正常对照组比较,脑缺血模型组和脑缺血治疗组神经症状评分升高有极显着性差异,p<0.01;与脑缺血模型对照组比较,脑缺血治疗组的神经症状评分降低有极显着性差异,p<0.01。HE染色结果显示,脑缺血治疗组缺血区周围组织水肿减轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。4.2针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用脑缺血后,大鼠缺血侧前脑室管膜下区（背外侧伸展、侧脑室外侧壁）、缺血区额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1强表达,并有多层阳性细胞,背外侧角可见大量的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,并向外形成了背外侧伸展,脑缺血区可见散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。与正常对照组比较,脑缺血模型组、治疗组nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组各项升高均有极显着差异,P<0.01。脑缺血后存在神经干细胞的增殖,并有一部分神经干细胞有向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化的趋向。针刺后各项指标高于脑缺血组。说明针刺可提高实验性脑缺血大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。针刺结果显示,针刺可促进大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。4.3针刺对实验性脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常组相比,脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组大脑匀浆中NSE含量降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示:脑缺血后,脑匀浆中NSE浓度显着升高,说明出现脑损伤。针刺可降低NSE浓度,从而减轻脑损伤。4.4针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常组相比,脑缺血模型组缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显上升,有显着性差异,P<0.05;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组缺血侧脑组织匀浆中NGF、bFGF含量升高有显着差异,P<0.05或P<0.01。实验结果提示脑缺血后,缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF浓度显着升高,说明脑缺血后,自身可分泌神经营养因子,从而产生一定的脑保护作用。针刺可通过促进缺血侧大脑NGF、bFGF的分泌与合成,加强脑保护作用。5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠的治疗作用5.1针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠血脂的作用经针刺治疗后,与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组、Ⅱ组CHO、LDL-C升高有极显着性差异,P<0.01;高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅱ组TG升高,有极显着性差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组CHO、TG、LDL-C降低有显着性差异,P<0.01或P<0.05,治疗Ⅱ组没有显着差异,P>0.05;与治疗Ⅰ组比较,治疗Ⅱ组CHO、LDL-C、TG没有显着差异,P>0.05;HDL-C,各组之间比较没有显着差异,P>0.05,但与42天比较,治疗Ⅰ组HDL-C升高有显着差异,P<0.01。本实验表明,针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,高血脂合并脑缺血模型治疗治疗Ⅰ组疗效好于治疗Ⅱ组,从而说明从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平。5.2针刺对实验性高血脂合并脑缺血脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用与合并模型组比较,合并治疗组神经症状评分显着降低,p<0.05;与合并治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组没有显着差异,p>0.05,说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。针刺后缺血区HE结果显示,针刺后缺血区周围组织水肿减轻。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组水肿程度最轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明电针在高血脂成模后积极治疗可减轻脑损害。5.3针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用高血脂合并脑缺血模型组前脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、额叶缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达弱于单纯脑缺血模型组。与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅱ组各项降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示高血脂可减弱脑缺血后nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达。即高血脂可减弱脑缺血后神经干细胞的增殖,迁移和分化。针刺可提高高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比Ⅱ组各项表达要强,说明在高血脂阶段介入治疗,更能提高nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。针刺结果显示,针刺可促进高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。说明在高血脂阶段介入治疗,更能促进神经干细胞的增殖,分化和迁移。5.4针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常对照组和脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量显着上升,有显着性差异,P<0.05,P<0.01。与正常对照组相比,合并各组缺血侧大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与合并模型组比较,合并治疗Ⅰ组、Ⅱ组下降有显着差异P<0.01,P<0.05;与高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组升高有显着差异P<0.05。实验结果提示,高血脂合并脑缺血可加重脑缺血后脑损伤,针刺可减低高血脂合并脑缺血大鼠的脑损伤,尤其在高血脂阶段介入针刺治疗的治疗Ⅰ组疗效远远好于治疗Ⅱ组。5.5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组、脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组NGF、BDNF、bFGF降低有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组NGF、bFGF上升有显着差异P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组NGF、BDNF降低有显着差异P<0.01。实验结果提示:高血脂可降低脑缺血后脑自身的保护作用,针刺可通过促进NGF、BDNF、bFGF的分泌和合成,从而起到脑保护的作用。针刺治疗Ⅰ组的NGF、BDNF高于Ⅱ组,说明在高血脂阶段积极进行针刺治疗可更好的提高神经营养因子分泌,从而起到脑保护的作用。实验结论:1高血脂合并脑缺血模型的建立是成功的。2高血脂本身并不能影响实验性高血脂大鼠右侧室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑匀浆中NSE的表达,但能降低右侧大脑匀浆中神经营养因子,如NGF、BDNF、bFGF的分泌。3脑缺血能增强实验性脑缺血大鼠缺血侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。4高血脂合并脑缺血,可减弱脑缺血后室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织NSE的分泌,降低缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,减弱大脑的自我保护作用。5针刺“丰隆”、“三阴交”,可降低实验性高血脂大鼠CHO、TG、LDL-C,升高HDL-C水平。针刺不能影响实验性高血脂大鼠高血脂后大脑右侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑组织中NSE的分泌,但能促进右侧脑组织中BDNF的分泌与合成。6针刺“百会”“人中”可改善实验性脑缺血大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,降低缺血侧NSE的分泌,增强实验性脑缺血大鼠缺血侧大脑室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进大脑缺血侧脑组织NGF、bFGF的分泌与合成。7针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,改善高血脂合并脑缺血模型大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,可提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。8从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平,改善脑缺血状态,明显提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧大脑NSE的分泌,促进缺血侧大脑匀浆中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。9针刺能通过促进缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,降低NSE分泌,促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,从而促进神经元的修复和再生。综上所述本实验结果显示,神经营养因子和神经干细胞增殖、迁移、分化之间存在必然联系。在实验性脑缺血和实验性高血脂合并脑缺血大鼠脑缺血造模后,神经营养因子含量的升高,往往同神经干细胞的增殖同时出现,所以猜测本实验脑缺血后是神经营养因子的升高促进了神经干细胞的增殖、迁移和分化。实验结果表明,针刺作为一种治疗手段在一定程度上促进了神经营养因子的分泌,从而最终促进了脑缺血后神经干细胞增殖、迁移、分化,尤其在高血脂阶段针刺治疗可减轻脑缺血后损伤,促进神经元的修复与再生。
二、成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖的NOS-NO通路机制研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖的NOS-NO通路机制研究（论文提纲范文）
（1）Ndrg2在癫痫海马神经发生中的变化及相关蛋白Hes1研究（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 结果 |
| 1.行为学观察 |
| 2.癫痫海马齿状回Ndrg2 表达和神经发生相关因子的变化及其相关性 |
| 3.Ndrg2 可能通过Hes1 调控癫痫神经发生 |
| 讨论 |
| 1.PILO致痫机制 |
| 2.癫痫海马齿状回Ndrg2 表达和神经发生相关因子的变化及其相关性 |
| 3.Ndrg2 可能通过Hes1 调控癫痫神经发生 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）Notch信号途径对未成熟脑惊厥持续状态后海马神经发生和癫痫形成的调控作用（论文提纲范文）
| 英汉缩略语对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 未成熟脑SC后不同时期海马神经发生和Notch信号途径的动态演变特征 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 结论 |
| 小结 |
| 第二部分 SC后急性期干预Notch信号途径对未成熟脑海马神经发生的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 SC后急性期干预Notch信号途径对未成熟脑癫痫形成的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表文章和科研成果 |
（3）膜联蛋白2在创伤性脑损伤中的神经发生作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 膜联蛋白2在创伤性脑损伤大脑内的表达与作用 |
| 第一节 成年人创伤性脑损伤后膜联蛋白2的表达与神经发生 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 小鼠脑创伤后大脑内膜联蛋白2表达与分布变化 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三节 膜联蛋白2对小鼠脑创伤后神经功能恢复的作用 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 膜联蛋白2对神经前体细胞增殖和迁移的影响 |
| 第一节 膜联蛋白2在体外对神经前体细胞增殖影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 膜联蛋白2在体外对神经前体细胞迁移的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 膜联蛋白2参与创伤性脑损伤后神经修复的机制 |
| 第一节 膜联蛋白2 激活PDK1-Akt-Girdin信号通路 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 膜联蛋白2在小鼠体内通过PDK1信号通路促进神经前体细胞增殖和迁移 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 神经前体细胞迁移研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文 |
（4）人脂肪间充质干细胞来源的外泌体通过抑制小胶质细胞/巨噬细胞活化促进创伤性脑损伤大鼠神经功能的恢复（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 人脂肪间充质干细胞来源的外泌体(hADSC-ex)促进创伤性脑损伤大鼠神经功能的恢复 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| Feeney自由落体法大鼠TBI模型的构建 |
| 人脂肪间充质干细胞(hADSC)及其来源的外泌体(hADSC-ex)的鉴定 |
| hADSC-ex治疗促进大鼠TBI后感觉运动功能的改善 |
| hADSC-ex治疗降低大鼠TBI后炎症反应 |
| hADSC-ex治疗减少大鼠TBI后神经元的凋亡 |
| hADSC-ex治疗促进大鼠损伤周边区域星形胶质细胞的增殖 |
| hADSC-ex治疗促进大鼠海马DG区神经元的再生 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 人脂肪间充质干细胞来源的外泌体通过NF-κ B和p38 MAPK信号通路抑制小胶质细胞/巨噬细胞活化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| hADSC-ex侧脑室给药后的可视化和示踪 |
| hADSC-ex在体内主要被小胶质细胞/巨噬细胞摄取 |
| hADSC-ex在体外主要被小胶质细胞/巨噬细胞摄取 |
| hADSC-ex抑制小胶质细胞/巨噬细胞M0向M1的转变促进M0向M2的转变 |
| hADSC-ex通过NF-κB和p38 MAPK信号通路抑制小胶质细胞/巨噬细胞的活化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 表1. 中英文缩略词 |
| 表2. 格拉斯哥昏迷评分量表(GCS) |
| 表3. Marshall CT分级量表 |
| 表4. Rotterdam CT分级量表 |
| 表5. 改良大鼠神经功能缺损评分表 |
| 表6. 所用引物列表 |
| 论文综述 创伤性脑损伤的治疗以及外泌体在其中的诊疗作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）七氟醚后处理改善缺血缺氧脑损伤新生大鼠海马神经迁移异常的作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:缺血缺氧性脑损伤对新生大鼠海马齿状回区神经迁移和远期空间学习记忆能力的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 实验动物模型 |
| 2.2.1 实验动物分组 |
| 2.2.2 手术操作 |
| 2.2.3 免疫荧光 |
| 2.3 海马病理学检查 |
| 2.3.1 尼氏染色 |
| 2.4 旷场实验 |
| 2.5 Morris水迷宫实验 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 HIE新生大鼠海马齿状回神经迁移情况 |
| 3.2 HIE新生大鼠海马齿状回神经元生存及排布情况 |
| 3.3 HIE大鼠自主活动能力及焦虑样情绪的影响 |
| 3.4 水迷宫实验检测空间学习记忆 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:七氟醚后处理改善HIE后海马齿状回神经迁移异常及与Reelin蛋白的关系 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 实验动物及分组 |
| 2.3.1 模型建立及药物注射操作 |
| 2.4 免疫荧光 |
| 2.5 尼氏染色 |
| 2.6 旷场试验 |
| 2.7 Morris水迷宫实验 |
| 2.8 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 七氟醚后处理缓解HIE新生大鼠海马齿状回神经迁移阻滞 |
| 3.2 七氟醚后处理缓解HIE新生大鼠海马齿状回神经元排列及生存 |
| 3.3 七氟醚后处理缓解HIE大鼠远期空间学习记忆能力损伤 |
| 3.4 HIE以及七氟醚后处理对Reelin蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:七氟醚后处理通过调节Reelin/Dab1 改善HIE后海马齿状回神经迁移阻滞及远期学习记忆功能 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 实验动物及分组 |
| 2.4 模型建立及药物注射操作 |
| 2.5 Western blot蛋白免疫印迹检测 |
| 2.5.1 提取蛋白 |
| 2.5.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性 |
| 2.5.3 配胶及电泳 |
| 2.5.4 转膜、封闭及一抗孵育 |
| 2.5.5 二抗孵育及显影 |
| 2.6 神经行为学测试 |
| 2.6.1 旷场试验 |
| 2.6.2 Morris水迷宫实验 |
| 2.6.3 八臂迷宫实验 |
| 2.7 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 七氟醚后处理对HIE新生大鼠海马齿状回神经迁移阻滞紊乱的调节以及Piceatannol的逆转作用 |
| 3.2 七氟醚后处理对HIE后的新生大鼠海马齿状回神经排列结构的调节作用以及Piceatannol的逆转作用 |
| 3.3 七氟醚后处理缓解HIE大鼠远期空间记忆损伤以及Piceatannol的逆转作用 |
| 3.3.1 对自主活动能力及焦虑样情绪的影响 |
| 3.3.2 对空间学习记忆的影响 |
| 3.3.3 对海马齿状回依赖性模式分离的影响 |
| 3.4 七氟醚后处理通过抑制Reelin/ Dab1 下游通路改善HIE新生大鼠海马齿状回神经迁移阻滞和远期空间记忆功能 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）弥漫性脑损伤后Wnt/β-catenin信号通路在海马表达的实验性研究及法医学意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 前言 |
| 1.1 弥漫性脑损伤的研究现状 |
| 1.2 弥漫性脑损伤生物学标志物的研究进展 |
| 1.3 Wnt/β-catenin信号通路的发现 |
| 1.4 Wnt/β-catenin信号通路的机制 |
| 1.5 Wnt/β-catenin信号通路与海马的神经发生 |
| 1.6 本课题研究的目的和意义 |
| 材料和方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 主要实验器材及用品 |
| 2.4 主要实验仪器 |
| 2.5 实验动物分组 |
| 2.6 弥漫性脑损伤动物模型建立 |
| 2.7 标本获取及处理 |
| 2.8 统计学方法 |
| 结果 |
| 3.1 形态学观察 |
| 3.2 免疫组织化学染色观察 |
| 3.3 Western Blot检测结果分析 |
| 讨论 |
| 4.1 DBI模型建立成功 |
| 4.2 实验动物的选择 |
| 4.3 海马分区 |
| 4.4 Wnt/β-catenin信号在中枢神经损伤后再生修复中的作用 |
| 4.5 弥漫性脑损伤后Wnt/β-catenin信号的表达及意义 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 经典Wnt信号在成人海马神经发生中作用机制的研究进展 |
| 6 参考文献 |
| 致谢 |
（7）Wnt/β-catenin信号介导的海马神经元发生参与睡眠剥夺及脑创伤导致的认知功能下降（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 WNT/Β-CATENIN信号参与睡眠剥夺导致认知功能下降的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 WNT/Β-CATENIN信号参与创伤性脑损伤导致认知功能下降的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（8）大鼠脑缺血再灌后Wnt7b/β-catenin信号通路在海马的表达与定位（论文提纲范文）
| 中文摘要 英文摘要 符号说明 前言 第一部分 材料与方法 结果 讨论 结论 附图 参考文献 第二部分 材料与方法 结果 结论 讨论 附图 参考文献 综述 参考文献 致谢 攻读学位期间发表的学术论文目录 学位论文评阅及答辩情况 |
（9）CREB信号通路调控宫内炎症后仔鼠海马神经发生及分子机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩写 |
| 目次 |
| 引言 |
| 第一部分 宫内炎症后仔鼠脑白质损伤与认知功能障碍及神经发生的相关性研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 宫内炎症后仔鼠海马神经发生及CREB信号通路相关性研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 CREB信号通路调节宫内炎症后仔鼠海马神经发生的分子机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（10）针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语（abbeviations） |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 针刺治疗高血脂的研究进展 |
| 1 中医对高脂血症认识 |
| 2 高血脂的病因病机 |
| 3 针刺治疗高血脂的临床研究 |
| 4 针刺治疗高血脂的实验研究 |
| 5 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医学对中风病的认识 |
| 1 病名 |
| 2 病位 |
| 3 病因 |
| 4 促发因素 |
| 5 临床症状 |
| 6 辨证施治 |
| 7 预后 |
| 8 针灸在治疗中风中的作用 |
| 参考文献 |
| 综述三 针刺对实验性脑缺血作用机制的研究进展 |
| 1 针刺对脑缺血合并症的实验研究 |
| 2 针刺抗脑缺血的作用机制研究 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 综述四 神经干细胞与脑缺血 |
| 1 神经干细胞的发现 |
| 2 神经干细胞的概念 |
| 3 神经干细胞的生物学特性 |
| 4 神经干细胞的定位和标记 |
| 5 脑缺血与NSC 的激活 |
| 6 脑缺血时影响NSC 增殖的因素 |
| 7 针灸与脑缺血后神经干细胞的研究现状 |
| 8 研究展望与科学意义 |
| 参考文献 |
| 综述五 神经营养因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 1 神经干细胞分化及其相关因子 |
| 2 NGF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 2.1 NGF |
| 2.2 BDNF |
| 3 GDNF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4 其他生长因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4.1 bFGF |
| 4.2 其他生长因子 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 电针对实验性高血脂大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 电针对高血脂合并脑缺血大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 针刺对实验性脑缺血神经行为及脑缺血病理改变的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| HE 染色图 |
| 实验五 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Nestin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Nestin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠PCNA 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| PCNA 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠vimentin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Vimentin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Tuj-1 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Tuj-1 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经营养因子NGF、BDNF、bFGF 的影响.. |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 实验结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖的NOS-NO通路机制研究（论文参考文献）
- [1]Ndrg2在癫痫海马神经发生中的变化及相关蛋白Hes1研究[D]. 刘霞. 湖北科技学院, 2020(08)
- [2]Notch信号途径对未成熟脑惊厥持续状态后海马神经发生和癫痫形成的调控作用[D]. 袁萍. 重庆医科大学, 2020(01)
- [3]膜联蛋白2在创伤性脑损伤中的神经发生作用及其机制研究[D]. 周超. 重庆医科大学, 2020(01)
- [4]人脂肪间充质干细胞来源的外泌体通过抑制小胶质细胞/巨噬细胞活化促进创伤性脑损伤大鼠神经功能的恢复[D]. 陈云飞. 北京协和医学院, 2020(05)
- [5]七氟醚后处理改善缺血缺氧脑损伤新生大鼠海马神经迁移异常的作用及其机制[D]. 张雅涵. 中国医科大学, 2020(01)
- [6]弥漫性脑损伤后Wnt/β-catenin信号通路在海马表达的实验性研究及法医学意义[D]. 陈嘉妮. 大理大学, 2019(01)
- [7]Wnt/β-catenin信号介导的海马神经元发生参与睡眠剥夺及脑创伤导致的认知功能下降[D]. 屈杜洁. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [8]大鼠脑缺血再灌后Wnt7b/β-catenin信号通路在海马的表达与定位[D]. 李慧. 山东大学, 2013(11)
- [9]CREB信号通路调控宫内炎症后仔鼠海马神经发生及分子机制研究[D]. 江佩芳. 浙江大学, 2012(09)
- [10]针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响[D]. 任秀君. 北京中医药大学, 2007(02)