一、NF-κB与泌尿系肿瘤（论文文献综述）
宋诗璋,陈世凯,梁鑫,翁博文,侯四川[1]（2022）在《TRIMs家族蛋白在泌尿系肿瘤中的研究进展》文中进行了进一步梳理三结构域蛋白（TRIMs）家族包含众多成员,参与多种恶性肿瘤细胞的增殖、分化等过程。TRIMs家族蛋白在泌尿系肿瘤中表达异常,与泌尿系肿瘤的发生、发展及不良预后均密切相关。同时,TRIMs家族蛋白异常表达也为晚期肾癌治疗方式的选择、前列腺癌出现的去势抵抗以及膀胱癌的高复发等疑难问题的解决提供了新思路。TRIMs家族蛋白在泌尿系肿瘤的发生发展中起促瘤或抑瘤作用,可能成为泌尿系肿瘤诊治的新型标志物,但其具体作用机制目前尚未明确,还需未来进一步研究验证。
程佳颖[2]（2021）在《EGF基因多态性与膀胱癌和肾癌关系的病例对照研究》文中研究指明(1)目的探讨表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）基因rs4444903、rs11568835、rs2237051、rs2302135四个位点单核苷酸多态性与中国人群膀胱癌和肾癌患病风险的相关性以及环境因素与四个位点多态性对膀胱癌和肾癌患病风险的交互作用。方法采用1:1配对的病例对照研究的方法,收集内蒙古自治区人民医院和内蒙古医科大学附属医院两家三甲医院泌尿外科新确诊的膀胱癌病人300例和肾癌病人152例作为病例组,对照组来源于这两家医院体检中心同期体检的健康个体,对照组与病例组按同性别、年龄（?）5岁1:1匹配。对研究对象进行面对面问卷调查,收集其基线资料,包括:一般情况、职业接触史、生活饮食习惯等,并收集研究对象血液样本、癌和癌旁组织样本及病理检查结果。采用多重高温连接酶检测反应技术（im LDR）检测EGF基因rs4444903、rs11568835、rs2237051、rs2302135四个位点的基因型。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清中EGF的蛋白表达量。采用实时荧光定量PCR的方法测定EGF基因中肾癌组织及癌旁组织中m RNA的相对表达量。所有数据全部录入Epidata3.1中,采用IBM SPSS25.0统计软件进行处理。定量资料如服从正态分布,采用（（?）s）表示,不服从正态分布采用“中位数（四分位数间距）”表示;两组间比较,如方差齐采用t检验,方差不齐则采用秩和检验;定性资料用率或者构成比表示,两组间的比较采用X2检验。以拟合优度X2检验分析基因型在对照组人群中的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡,分析EGF基因rs4444903、rs11568835、rs2237051、rs2302135四个位点的基因型频率及等位基因频率在两组间的分布。应用二元logistic回归分析计算共显性、显性、隐性三种遗传模型的比值比（odds ratios,OR）;采用多因素条件Logistic回归分析计算生活和饮食习惯与膀胱癌和肾癌发生风险OR及其相应的95%置信区间（confidence intervals,CI）;采用广义多因子降维法（generalized multifactor dimensionality reduction,GMDR）进行基因-环境交互作用分析。结果（1）单因素分析显示,膀胱癌病例组与对照组相比,在文化程度、农药接触史、工厂工作史、吸烟、饮食荤素、食用油种类、水果摄入、饮水类型、染发、劳动强度、憋尿频率、取暖做饭方面差异有统计学意义（P<0.05）;而在BMI、饮酒、乳制品摄入、油炸品摄入、饮水量、空气清新剂的使用方面差异无统计学意义（P>0.05）。肾癌病例组与对照组相比,在文化程度、农药接触史、饮食荤素、食用油种类、水果摄入、乳制品摄入、饮水类型、染发、劳动强度、取暖做饭方面差异有统计学意义（P<0.05）;而在BMI、工厂工作史、吸烟、饮酒、油炸品摄入、饮水量、憋尿情况、使用空气清新剂方面差异无统计学意义（P>0.05）。（2）多因素条件logistic回归结果显示,接触农药、工厂工作史、吸烟、劳动强度重是膀胱癌的危险因素（OR值分别为3.732、2.239、2.498、2.103）,文化程度高是膀胱癌的保护因素（OR=0.339）。接触农药、食用动物油为主、饮用深井水是肾癌的危险因素（OR值分别为3.194、3.212、8.606）,文化程度高、乳制品摄入多是肾癌的保护因素（OR值分别为0.129、0.386）。（3）EGF基因rs11568835、rs4444903、rs2237051、rs2302135四个位点的三种遗传模型与膀胱癌和肾癌的患病均未见有明显关联（P>0.05）。（4）EGF基因四个位点等位基因及基因型与膀胱癌病理分级及临床分期均未见有明显关联（P>0.05）。rs2237051位点的基因型与肾癌病理分级有关（P=0.029）。（5）EGF基因rs11568835、rs4444903、rs2237051、rs2302135四个位点基因型及等位基因频率在膀胱癌和肾癌病例组与对照组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。（6）GMDR分析结果显示:农药接触史与工厂工作史为膀胱癌交互作用的优势模型（P=0.001）;rs2302135位点与食用食用油种类、水果摄入情况为肾癌交互作用的优势模型（P=0.011）。（7）膀胱癌和肾癌血清中EGF蛋白表达量显着高于对照组（P<0.05）。（8）肾癌癌旁组织中m RNA的相对含量明显高于肾癌组织,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论（1）接触农药、在工厂工作、吸烟、劳动强度重是膀胱癌患病的危险因素;文化程度高为膀胱癌保护因素。接触农药、食用动物油为主、饮用深井水是肾癌的危险因素;文化程度高、乳制品摄入多是肾癌的保护因素。（2）EGF基因四个位点等位基因及基因型与膀胱癌病理分级及临床分期无关;rs2237051位点的基因型与肾癌病理分级有关。（3）本研究结果提示EGF基因rs11568835、rs4444903、rs2237051、rs2302135四个位点的三种遗传模型与膀胱癌和肾癌的患病均不相关。（4）农药接触史、工厂工作史在膀胱癌的发生中存在交互作用;rs2302135位点与食用食用油种类、水果摄入情况在肾癌的发生中存在交互作用。（5）膀胱癌和肾癌血清中EGF蛋白表达量显着高于对照组。（6）肾癌癌旁组织中m RNA的相对含量明显高于肾癌组织。
林芮锋[3]（2021）在《长链非编码RNA STYK1-2在膀胱癌发展中的功能及其机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景与目的膀胱癌（Bladder cancer,BC）是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率有逐年上升的趋势。目前的研究认为膀胱癌的发生、发展与环境及表观遗传等多方面的因素有关,其中的病理生理学机制尚未完全明确。对膀胱癌发生、发展机制的深入探索,有利于推动膀胱癌诊断技术、治疗方案、长期监测等方面的进展,从而改善膀胱癌患者的预后。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）是长度超过200个核苷酸,一般不编码蛋白质的分子。随着近年来测序技术的不断进步以及研究的不断深入,研究人员发现lnc RNA分子的表达水平异常可能与正常细胞的癌变、癌细胞的增殖、进展、耐药等密切相关。本课题组前期通过高通量测序筛选出在膀胱癌组织中显着下调的lnc RNA STYK1-2,MTS实验及Transwell实验发现抑制lnc-STYK1-2的表达可促进膀胱癌细胞的增殖、迁移侵袭能力。本研究通过进一步探究lnc-STYK1-2在膀胱癌发展中的作用及相关的分子调控机制,为寻找可能成为膀胱癌早期诊断及预后检测标志物、潜在的治疗靶点提供理论依据。研究方法1.构建稳定转染敲减lnc-STYK1-2的慢病毒质粒并转染人膀胱癌细胞系5637、T24,应用q RT-PCR技术检测lnc-STYK1-2的表达量;2.利用稳定转染敲减lnc-STYK1-2的5637、T24细胞系进行裸鼠皮下成瘤实验;3.对稳定转染敲减lnc-STYK1-2的5637、T24细胞系进行高通量测序,并对其中差异表达的RNA进行生物信息学分析;4.双荧光素酶报告基因检测实验验证lnc-STYK1-2与mi R-146b-5p、ITGA2与miR-146b-5p之间的相互关系;5.功能挽救（rescue）实验验证lnc-STYK1-2通过靶向mi R-146b-5p调控膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力:（1）在稳定转染敲减lnc-STYK1-2的T24、5637细胞系中转染mi R-146b-5p inhibitors降低mi R-146b-5p的含量;（2）CCK-8实验检测细胞生长曲线的改变;（3）Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变;6.利用Western blot实验验证敲减lnc-STYK1-2、敲减lnc-STYK1-2同时转染mi R-146b-5p inhibitors后对下游蛋白ITGA2的表达以及Akt/NF-κB/STAT3通路的影响;7.对以上实验结果进行统计学分析。研究结果1.q RT-PCR结果显示T24、5637敲减组细胞的lnc-STYK1-2的相对表达量显着低于阴性对照组,成功构建5637-sh-NC,5637-sh-lnc-STYK1-2,T24-sh-NC,T24-sh-lnc-STYK1-2稳定转染细胞系;2.敲减lnc-STYK1-2能够显着增加裸鼠皮下成瘤的速度;3.敲减lnc-STYK1-2的表达后,高通量测序共发现126个差异表达mRNA,其中17个上调的mRNA,109个下调的mRNA;KEGG pathway分析发现,敲减lnc-STYK1-2后差异表达的基因主要集中在肿瘤相关通路和AKT通路;q RT-PCR实验提示lnc-STYK1-2-mi R-146b-5p-ITGA2可能存在相互作用;4.双荧光素酶报告基因检测实验证实lnc-STYK1-2与mi R-146b-5p、ITGA2与mi R-146b-5p之间能互相结合;5.功能挽救实验显示在膀胱癌中lnc-STYK1-2可通过吸附mi R-146b-5p促进膀胱癌的增殖、迁移和侵袭功能;6.Western blot实验发现敲减lnc-STYK1-2后ITGA2、Akt、STAT3、p65的表达量降低,p-Akt、p-STAT3、p-p65的表达量升高;而敲减lnc-STYK1-2并降低mi R-146b-5p的含量,ITGA2、Akt、STAT3、p65的表达量升高,p-Akt、p-STAT3、p-p65的表达量降低。研究结论1.lnc-STYK1-2表达减少可促进膀胱癌细胞的生长;2.lnc-STYK1-2与mi R-146b-5p、ITGA2与mi R-146b-5p之间存在竞争性结合关系;3.在膀胱癌中lnc-STYK1-2可通过调节mi R-146b-5p/ITGA2并间接调控Akt/NF-κB/STAT3通路,促进膀胱癌的增殖、迁移和侵袭功能;
卢友路[4]（2021）在《尼古丁通过激活NF-κB通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭》文中进行了进一步梳理目的膀胱癌（Bladder cancer,BC）是泌尿系常见的恶性肿瘤之一,在全球范围内发病率和致死率居高不下,目前的治疗方法虽然较多,但治疗效果仍不满意,给患者带来生活质量的急剧下降,给社会带来较重的负担。烟草的摄入在发达国家有下降趋势,但发展中国家仍然日益增多。烟草作为膀胱癌的主要危险因素,而尼古丁作为烟草的主要成分,研究尼古丁对膀胱癌作用的分子机制显得尤为重要。本课题主要通过用尼古丁处理膀胱癌细胞探讨它对膀胱癌细胞的影响。方法（1）两种膀胱癌细胞系（T-24,UMUC-3）的培养。（2）通过不同浓度的尼古丁处理两种膀胱癌细胞,采用CCK-8和Transwell的实验方法,观察它们的增殖、迁移和侵袭能力的变化,并筛选出具有较强作用的尼古丁浓度。（3）通过Western blot法检测不同浓度的尼古丁处理两种膀胱癌细胞系后增殖相关蛋白（如Cyclin D1）,上皮-间质转化（EMT）相关蛋白（如E-cadherin,N-cadherin,Vimentin）以及核因子κB（NF-κB）通路相关蛋白（如p-p65,p-IκBα）的表达情况。（4）通过免疫荧光检测NF-κB通路相关蛋白p65的入核情况。（5）在尼古丁处理这两种细胞系之前,用NF-κB通路特异性不可逆性抑制剂处理12小时,观察以上实验结果的变化情况。（7）应用Graph Pad Prism 8.0.1软件分析,多组之间使用方差分析进行实验结果数据分析。结果（1）尼古丁可促进两种膀胱癌细胞系的增殖、迁移和侵袭。（2）尼古丁可上调细胞增殖相关蛋白、间质标志蛋白和上皮-间质转化因子的表达,下调上皮标志蛋白的表达。（3）尼古丁可激活两种膀胱癌细胞系的NF-κB通路。（4）NF-κB通路特异性不可逆性抑制剂（-）-DHMEQ可逆转尼古丁导致的以上两种细胞系的生物学特性及分子变化。结论尼古丁可通过激活NF-κB通路促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
庞雪[5]（2020）在《消栓通脉汤介导microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成的机制研究》文中指出目的:基于NF-κB信号通路探讨中药消栓通脉汤干预深静脉血栓形成模型大鼠的作用效果,观察中药消栓通脉汤对深静脉血栓形成模型大鼠血管内皮中microRNA-181b的干预作用,探讨microRNA-181b对深静脉血栓形成的影响及其可能机制。方法:1.采用下腔静脉狭窄法构建深静脉血栓形成大鼠模型,设假手术组,以中药消栓通脉汤组为治疗组,以生理盐水组、复方丹参片组、模型对照组为对照组,采用免疫组化及实时定量PCR技术检测模型大鼠下腔静脉内皮中NF-κB、VCAM-1、E-selectin、ICAM-1、microRNA-181b的表达变化。2.构建microRNA-181b抑制和过表达模型大鼠,并设空白组和模型对照组,采用下腔静脉狭窄法构建深静脉血栓形成大鼠模型,观察大鼠血栓形成情况,采用实时定量PCR方法检测下腔静脉静脉内皮microRNA-181b表达情况,检测NF-κB（P65）表达情况,检测VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等黏附分子的表达变化情况。结果:1.实验研究显示,深静脉血栓形成模型大鼠血管内皮细胞中NF-κB以及VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等黏附分子的表达较假手术组明显增强,消栓通脉汤能降低NF-κB以及VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等黏附分子在血管内皮细胞中的表达水平,且效果明显优于复方丹参片组。2.microRNA-181b在深静脉血栓形成模型大鼠静脉内皮中的表达降低,消栓通脉汤和复方丹参片可上调深静脉血栓形成模型大鼠静脉内皮microRNA-181b的表达,且消栓通脉汤的效果明显优于复方丹参片。3.过表达microRNA-181b可以在一定程度上抑制深静脉血栓的形成,microRNA-181b对大鼠腔静脉深静脉血栓形成模型中NF-κB（P65）的表达有抑制作用,提示microRNA-181b可能对NF-κB信号通路有一定的抑制作用。结论:NF-κB信号通路在深静脉血栓形成的发生、发展过程中起重要作用,可以介导黏附分子与静脉内皮细胞的相互作用,诱导静脉内皮损伤;microRNA-181b可抑制NF-κB信号通路的激活干预静脉血栓形成;中药消栓通脉汤可以通过上调microRNA-181b的表达抑制NF-κB信号通路干预静脉血栓形成。
曹张军[6]（2020）在《肾癌来源的间充质干细胞通过激活NF-kB 信号通路诱导巨噬细胞向M2型极化并促进肾癌侵袭与迁移》文中进行了进一步梳理目的 肾癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,对于肿瘤微环境而言,巨噬细胞（M0）是重要的组成部分,巨噬细胞由M0型向M2型极化是肿瘤进展的重要因素之一。间充质干细胞（MSC）是一种多功能成体干细胞,我们之前的研究发现进展期肾癌可以通过分泌高水平IL-8,诱导MSC归巢至肾癌促进肾癌进展,众所周知,MSC来源广泛,且取材方便,是理想的细胞治疗载体,如果我们能阐明肾癌微环境内MSC调节TAMs极化的分子机制,并针对MSC逆转巨噬细胞极化,则有望以MSC为靶点,通过逆转巨噬细胞功能,重塑肾癌微环境,这对目前肾癌的治疗将具有十分重要的意义;该文章的主要研究目的是为了进一步探讨肾癌微环境中MSC对肿瘤相关巨噬细胞的作用以及在此过程中NF-k B信号通路是否具有调控作用,以及MSC对肾癌侵袭与迁移能力的影响;方法 我们从肾癌组织中分离间充质干细胞,鉴定完成以后将该细胞传至第3代,以便用于后续实验;为了研究得到肿瘤相关巨噬细胞,我们用150n MPMA处理THP-1细胞24h,得到M0型TAMs,把M0型巨噬细胞培养在加入10pg/ml LPS的培养基中培养24h,得到的细胞为M1型巨噬细胞,然后将M0型巨噬细胞培养在加入20ng/ml IL-13的培养液中培养24h,得到的细胞为M2型巨噬细胞,对得到的两种细胞鉴定;通过6孔板小室,将M0型巨噬细胞种于下室,将RCC-MSC细胞置于上室,在镜下观察经过共培养后巨噬细胞形态变化;利用WB检测M0型巨噬细胞在共培养后标志物表达变化及NF-k B信号通路蛋白表达情况,并使用NF-k B信号通路特异性抑制剂PDTC进行反向验证,WB检测上述极化过程是否被抑制;为探究肾癌微环境中RCC-MSC对肾癌的作用,将肾癌细胞786-O与M0型巨噬细胞及RCC-MSC细胞分组进行共培养,细胞划痕实验检测肿瘤细胞在共培养后迁移能力变化,transwell实验检测肿瘤细胞在共培养后侵袭能力变化;为探究MSC细胞对M2型巨噬细胞作用,我们将B-MSC暴露在含有10pg/ml LPS的培养基中24h,得到MSC-1,并将M2型巨噬细胞与不同数量MSC-1细胞进行共培养,WB检测M2型巨噬细胞表面标志物变化;结果 流式细胞技术对提取的RCC-MSC细胞进行鉴定,结果提示:RCC-MSC细胞表面CD105、CD73表达较高,CD34、CD45表达较低;THP-1细胞被PMA刺激24h后,细胞形态发生改变,由原来的悬浮状变成贴壁状,其高表达CD36,CD68,低表达CD14;M0巨噬细胞被LPS刺激24h后,其高表达CD86,TNF-α,IL-1β;M0巨噬细胞被IL-13刺激24h后,其表达CD206,CD163,Arg-1;将M0型巨噬细胞与RCC-MSC共培养2天后WB实验提示:随着间充质干细胞数量的增加,M0巨噬细胞表面CD206,CD163,ARG-1,NF-k B信号通路特异性蛋白p50,p65表达量逐渐升高,通路抑制蛋白IKBa表达量逐渐降低;加入PFTC后,上述过程被明显抑制;我们将肾癌细胞,巨噬细胞M0,RCC-MSC细胞根据实验需要分组进行共培养48h,transwell实验提示:RCC-MSC+M0组较其他实验组相比穿过小室的肾癌数量更多,细胞划痕实验提示:RCC-MSC+M0组较其他实验组相比,穿过划痕区域的肾癌细胞数量更多。M2型巨噬细胞与不同数量MSC-1共培养后其表面CD206,CD163,Arg-1低表达,CD86,TNF-α,IL-1β高表达。 结论 肾癌微环境中的RCC-MSC细胞可以通过激活NF-k B信号通路诱导巨噬细胞向M2型极化,进而促进肾癌的侵袭与转移,且MSC1细胞能逆转M2型巨噬细胞的极化。
张佳润[7]（2020）在《circ0033506/miR-154/PRKCA轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究》文中研究表明目的:膀胱癌是最普遍的泌尿系肿瘤之一。近年来,由膀胱癌引起的死亡人数逐年增加,在所有肿瘤中排名第13位。膀胱癌的发病风险与一些遗传和环境因素有关,手术,放疗和化疗是目前膀胱癌患者的主要治疗方法。膀胱癌患者的5年生存率很低,因为复发的风险很高。此外,促进膀胱癌的发生、发展的遗传机制目前还没有得到很好的理解。因此,迫切需要寻找新的膀胱癌早期诊断的生物学标志物。近年来,许多研究发现PRKCA在肿瘤发生发展中扮演着重要角色,位于许多信号转导通路的交叉点,对肿瘤细胞的增殖、凋亡及迁徙等功能具有调节作用。环状RNA（circular RNA,circRNA）是一种新近被人们认知的一种内源性非编码RNA（non-coding RNA,ncRNA）,可通过调控微小RNA（micro RNA,miRNA）的表达进而影响肿瘤细胞的生物学功能。本文通过对circRNA/miRNA/PRKCA轴对膀胱癌发生发展中作用及具体机制的探索,为circRNA对膀胱癌的靶向治疗策略提供理论基础。方法:1.PRKCA在膀胱癌组织与细胞系中表达检测及上游miRNA的筛选在中国医科大学泌尿外科标本库中选取57例膀胱癌组织与26例癌旁组织。提取癌组织和癌旁组织总RNA与总蛋白,采用qRT-PCR检测PRKCA mRNA表达量,采用Western blot检测PRKCA蛋白表达量。在7种膀胱癌细胞系中提取总RNA,并通过qRT-PCR检测PRKCA mRNA的内源性表达,选取两种合适的细胞系做剩余实验。在生物信息学网站（Targetscan,miRWalk,Oncomi R等）中筛选与PRKCA mRNA 3’-UTR区具有结合位点的miRNA。2.miRNA对PRKCA的调控机制及对膀胱癌细胞系功能的影响采用qRT-PCR在选取的组织样本中检测预测出的miRNA的表达量,验证是否存在差异。在膀胱癌细胞系中转染miRNA的mimics及inhibitor,检测PRKCA mRNA及蛋白的表达量的变化。根据生物信息学网站预测出的miRNA与PRKCA的结合位点,构建PRKCA3’UTR区域结合位点野生型以及突变体质粒,克隆至荧光载体。通过双荧光素酶报告基因实验,验证miRNA与PRKCA 3’UTR区域是否结合。在膀胱癌细胞系中,转染miRNA的mimics及inhibitor,通过CCK8细胞活性检测,EDU细胞增殖检测,流式细胞仪检测细胞凋亡的方法,验证mi RNA对膀胱癌细胞生物学特性的影响。在稳转PRKCA膀胱癌细胞系中,过表达miRNA,通过检测PRKCA mRNA及蛋白表达量的变化及功能回复实验验证miRNA是否通过调控PRKCA对膀胱癌细胞生物学特性产生影响。3.miRNA上游circRNA的筛选及结合验证利用TargetScan,Miranda,RNAhybrid等生物信息学网站预测,挑选与所研究miRNA具有碱基互补且未被研究的circ RNA。根据生物信息学网站预测出的circRNA与miRNA的结合位点,构建结合位点野生型以及突变体质粒,克隆至荧光载体。通过双荧光素酶报告基因实验,验证miRNA与circRNA是否在结合位点处结合。通过RNA pulldown试验及RNA免疫沉淀试验,验证miRNA与预测出的circRNA相互结合。4.验证circRNA对膀胱癌细胞生物学特性的影响利用qRT-PCR在标本库中的膀胱癌组织与癌旁组织中检测circRNA的表达量,验证是否存在差异。在膀胱癌细胞系中,沉默circRNA,通过CCK8细胞活性检测,EDU细胞增殖检测,流式细胞仪检测细胞凋亡的方法,验证circRNA对膀胱癌细胞生物学特性的影响。通过裸鼠成瘤实验,在4-6周Balb/c裸鼠皮下注射过表达circRNA的UMUC3稳转细胞系,观察移植瘤生长情况。通过免疫组化检测移植瘤Ki67表达含量的变化,判断circRNA对肿瘤增殖能力的影响。5.circRNA通过对miRNA/PRKCA的调控对膀胱癌细胞生物学特性产生作用在膀胱癌细胞系中,转染circRNA-si,采用qRT-PCR及Western blot实验检测PRKCA mRNA及蛋白表达量的变化。在膀胱癌细胞系中,分别转染circRNA-si及共转染circRNA-si与miRNA inhibitor,采用qRT-PCR及Western blot实验检测PRKCA mRNA及蛋白表达量的变化,并通过功能回复实验验证circRNA是否通过调控miRNA/PRKCA对膀胱癌细胞生物学特性产生影响。6.circRNA对激活/抑制NF-κB通路的验证在稳转LV-circRNA及转染circRNA-si的膀胱癌细胞系中,采用Western blot实验检测NF-κB通路中相关蛋白表达量的变化。回复实验验证circRNA是通过对PRKCA的调控对NF-κB通路产生激活/抑制的影响。结果:1.与对应的癌旁组织及人膀胱上皮永生化细胞相比,PRKCA在膀胱癌组织和7种膀胱癌细胞系中呈现出高表达。通过生物信息学网站预测miR-154-5p可与PRKCA mRNA 3’UTR区结合。2.与对应的癌旁组织相比,miR-154-5p在膀胱癌组织中呈现出低表达。在膀胱癌细胞系中转染miRNA的mimics及inhibitor,检测PRKCA mRNA及蛋白的表达量分别降低与增高。双荧光素酶报告基因实验证明miR-154-5p与PRKCA 3’UTR区域结合。通过CCK8细胞活性检测,EDU细胞增殖检测,流式细胞仪检测细胞凋亡的方法,证明miR-154-5p可抑制膀胱癌细胞活性与增殖功能,同时促进细胞凋亡。回复实验证实miR-154-5p是通过靶向调控PRKCA的表达对膀胱癌细胞生物学特性产生影响。3.通过生物信息学网站预测出circ0033506与所研究miRNA具有碱基互补序列。双荧光素酶报告基因,RNA pulldown试验及RNA免疫沉淀试验证明miR-154-5p与circ0033506在结合位点处结合。4.与对应的癌旁组织相比,circ0033506在膀胱癌组织中呈现出高表达。在膀胱癌细胞系中,沉默circ0033506,通过CCK8细胞活性检测,EDU细胞增殖检测,流式细胞仪检测细胞凋亡的方法,验证circ0033506可增强膀胱癌细胞活性与增殖功能,同时可抑制细胞凋亡。通过裸鼠成瘤实验及免疫组化检测证明circ0033506可增强移植瘤增殖能力,促进Ki67表达含量的增加。5.在膀胱癌细胞系中,转染circ0033506-si,发现PRKCA mRNA及蛋白表达量的降低,回复实验证明circ0033506是通过竞争性结合miR-154-5p来调控PRKCA的表达,并对膀胱癌细胞生物学特性产生影响。6.在稳转LV-circ0033506及转染circ0033506-si的膀胱癌细胞系中,NF-κB通路分别被激活和抑制。回复实验证明了circ0033506是通过对PRKCA的调控对NF-κB通路产生激活与抑制的影响。结论:在本研究中,我们通过生物信息学分析,发现circ0033506可作为miR-154-5p的吸附海绵,作为竞争性内源性RNA调控PRKCA的表达,起到了促癌基因的作用。同时可激活NF-κB通路,进而在膀胱癌细胞中发挥促进细胞增殖和抑制凋亡的作用,为膀胱癌的诊断与治疗提供了新的视角。
张效通[8]（2019）在《circINTS4/miR-146b/CARMA3轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究》文中指出目的:膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤,也是世界第九大常见的恶性肿瘤。在对膀胱癌致病原因及致病机理的研究上,已经取得了很多突破性的进展,然而,现今对膀胱癌的治疗上主要仍局限于手术治疗及化学治疗,究其原因主要是因为膀胱癌的易复发及易转移特性,这导致现如今对膀胱癌的治疗手段有限。近期,有越来越多的证据表明CARMA3对炎症及肿瘤的发生发展上,起到了至关重要的作用。CARMA3在诸如乳腺癌、肾癌、肺癌及结直肠癌等一系列肿瘤中均呈现高表达。并且,CARMA3被认为是一种癌基因参与调节肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移以及凋亡等各种肿瘤细胞特性。环状RNA（circRNA）对基因表达的调控作用可通过对微小RNA（microRNA）的海绵吸附作用进而影响肿瘤的发生发展。然而,在膀胱癌中,circRNA的作用及对miRNA的海绵吸附作用罕有报道。因此,本文通过探索circRNA/microRNA/CARMA3通路在膀胱癌中的促癌/抑癌作用以及其详细机制,寻找关键分子标志物,为膀胱癌的有效诊断及治疗奠定理论基础。方法:1.CARMA3上游microRNA的筛选及检测通过对Targetscan,miRWalk,miRBase及Starbase等生物信息学网站分析,筛选与CARMA3 mRNA 3’-UTR区具有碱基互补且高度保守的miRNA,挑选表达丰度低且在膀胱癌中未被研究过的miRNA。从标本库中随机选取40对病理诊断明确的膀胱癌病例,提取癌组织及癌旁组织的总RNA及蛋白;培养7种膀胱癌细胞系及上皮永生化细胞系,提取各自总RNA及蛋白,利用qRT-PCR技术检测CARMA3 mRNA及miRNA表达丰度,利用Western blot实验检测CARMA3蛋白表达情况。分析CARMA3及miRNA在组织中表达相关性。2.miRNA对CARMA3的调控机制及在膀胱癌细胞系中的功能实验对膀胱癌细胞系分别检测转染miRNA模拟物/抑制物后CARMA3 mRNA/蛋白水平变化。根据生物信息学的预测位点,构建野生及突变型双荧光素酶报告基因质粒,判定miRNA与CARMA3 mRNA 3’-UTR区特异性结合。对膀胱癌T24及UMUC3细胞转染miRNA的模拟物/抑制物及对应的阴性对照,利用RTCA实验检测转染后细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力;利用流式细胞仪技术检测膀胱癌细胞周期及凋亡水平。回复实验检测miRNA对CARMA3的调控及miRNA通过CARMA3对膀胱癌细胞功能实验的影响。3.miRNA上游circRNA的筛选及结合验证利用RNAhybrid等生物信息学网站预测,挑选与所研究miRNA具有碱基互补且未被研究的circRNA。通过双荧光素酶报告基因实验,RNA pulldown试验及RNA免疫沉淀试验,验证预测的circRNA与所研究miRNA具有相同的靶点并且可以与之结合。通过荧光原位杂交试验对预测的circRNA与所研究miRNA进行细胞共定位。4.上游circRNA在膀胱癌中的功能在膀胱癌组织与相应癌旁组织及7种膀胱癌细胞系与上皮永生化细胞中,对所研究circRNA的表达丰度进行检测,并分析circRNA及miRNA在组织中相关性。在膀胱癌细胞系中沉默circRNA,利用RTCA实验检测转染后细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力;利用流式细胞仪技术检测膀胱癌细胞周期及凋亡水平。进行裸鼠皮下成瘤实验,在4-6周Balb/c裸鼠皮下注射稳转后的UMUC3细胞,观察移植瘤模型的生长情况,并对比不同组别生长情况。取移植瘤进行免疫组化,检测Ki-67变化以判断circRNA对增殖能力的影响;Western blot实验检测不同组别瘤细胞中Bcl-2表达以判断细胞凋亡情况。5.上游circRNA对miRNA的调控作用及机制qRT-PCR及Western blot实验检测内源性过表达/沉默circRNA对CARMA3表达影响。回复实验检测circRNA对miRNA的调控及circRNA通过miRNA调控CARMA3的表达及对膀胱癌细胞功能的影响。6.circRNA对通路激活/抑制的验证Western blot实验检测内源性过表达/沉默circRNA对相应NF-κB通路及P38 MAPK通路变化的影响。结果:1.相较于对应的癌旁组织及上皮永生化细胞,CARMA3在膀胱癌组织中及7种膀胱癌细胞系中呈现高表达。通过生物信息学方法分析预测及双荧光素酶报告基因实验验证发现,miR-146b与CARMA3 mRNA 3’-UTR区特异性结合并且负向调控CARMA3 mRNA及蛋白水平表达。并且miR-146b在膀胱癌组织中及7种膀胱癌细胞系中较相应的癌旁组织及上皮永生化细胞呈现低表达。2.体外实验验证发现,miR-146b具有负向调控膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移,促进膀胱癌细胞凋亡及诱导细胞G1/S期阻滞的功能。并且,miR-146b影响膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移及凋亡的作用是通过靶向调控CARMA3的方式进而实现的。3.生物信息学方法分析预测发现,circINTS4可能作为内源性竞争RNA吸附miR-146b。通过双荧光素酶报告基因实验,RNA pulldown试验及RNA免疫沉淀试验,证实了circINTS4包含了一个与miR-146b相同的靶点并且可以与之结合。通过荧光原位杂交试验揭示circINTS4与miR-146b共同定位于胞质。内源性抑制/激活circINTS4可负向调控miR-146b表达量升高/降低。4.相较于对应的癌旁组织及上皮永生化细胞,circINTS4在膀胱癌组织中及7种膀胱癌细胞系中呈现高表达,并且circINTS4及miR-146b在组织中表达呈负相关。体外实验验证发现,下调circINTS4可抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移,促进膀胱癌细胞凋亡及诱导细胞G1/S期阻滞的功能。在裸鼠体内实验中同样证实了上调circINTS4可以促进移植瘤生长,抑制凋亡。5.内源性过表达/沉默circINTS4可正向调控CARMA3的表达,并且circINTS4调控CARMA3的作用是通过竞争性结合miR-146b的方式实现。体外功能实验研究同样发现,circINTS4影响膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移、周期及凋亡的作用是对miR-146b的海绵吸附作用方式进而实现的。6.内源性过表达/沉默circINTS4可激活/抑制NF-κB通路及抑制/激活P38 MAPK通路。并且这种激活或抑制作用是通过CARMA3介导进而实现的。结论:circINTS4能够作为内源性竞争RNA对miR-146b起到海绵吸附作用,进而解除miR-146b对CARMA3表达的抑制作用。circINTS4在膀胱癌中呈现高表达并且通过circINTS4/miR-146b/CARMA3轴充当促癌基因的作用,而且circINTS4还能够调节NF-κB及P38 MAPK通路进而影响膀胱癌的发生发展。这些都为膀胱的有效诊断及治疗奠定理论基础。
张先云[9]（2018）在《B7-H3与Tie2在肾透明细胞癌血管中的表达及其在肿瘤血管生成中的作用》文中提出肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系最常见的恶性肿瘤之一,肾癌最常见的组织学类型是透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,cc RCC）,约占75-85%。肾透明细胞癌是典型的富含血管肿瘤,血管生成与肾透明细胞癌的预后和进展密切相关,针对肿瘤新生血管的靶向治疗逐渐成为晚期肾癌重要治疗方法。但目前以靶向血管内皮生长因子（VEGF）的抗血管生成治疗因其固有的缺陷仍不能完全令人满意,所以寻找新的靶标已成为下一步的研究热点。肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的前提,它受多种血管因子调节,而血管生成素/酪氨酸激酶受体2（Ang/Tie2）在血管生成中发挥重要作用。Tie2主要表达于内皮细胞,某些巨噬细胞和单核细胞也表达Tie2,即Tie2表达阳性单核巨噬细胞（Tie2 expressing monocytes,TEMs）,越来越多的研究发现TEMs在肿瘤的血管新生中发挥独特的作用。B7-H3为新近发现的协同共刺激分子家族成员,在T细胞介导的肿瘤免疫应答中发挥重要作用,既往研究发现B7-H3可在多种实体瘤肿瘤血管组织上表达且与临床预后密切相关,提示B7-H3在肿瘤血管生成中发挥重要作用。目前B7-H3与肾透明细胞癌的血管生成关系尚不明确。本研究旨在探讨B7-H3与Tie2在肾透明细胞癌组织血管中表达意义及其在肾透明细胞癌血管生成中的作用。第一部分B7-H3和Tie2在肾透明细胞癌血管内皮中表达及意义目的:检测B7-H3与Tie2在肾透明细胞癌组织血管中表达情况,分析其与肾透明细胞癌临床病理特征的关系及其临床预后意义,初步探讨其在肾透明细胞癌血管生成中的作用。方法:1.应用免疫组织化学方法检测82例肾透明细胞癌及20例癌旁正常组织芯片标本B7-H3和Tie2血管内皮表达,并分析其与肾透明细胞癌病理特征、微血管密度之间的关系及其相关性。2.应用免疫荧光和激光共聚焦扫描显微镜技术研究B7-H3和Tie2在肾透明细胞癌肿瘤血管内皮中表达定位情况。结果:1.B7-H3在肾透明细胞癌血管中表达显着高于正常组织血管表达（P<0.001）;B7-H3血管表达与肾透明细胞癌组织分级（P=0.008）、原发肿瘤分期（P=0.012）、淋巴结转移（P=0.018）、远处转移（P=0.048）及TNM分期（P=0.021）相关。2.Tie2在肾透明细胞癌血管中表达显着高于正常组织血管表达（P=0.007）;Tie2血管表达与肾透明细胞癌组织分级（P=0.249）、远处转移（P=0.459）无关,而与原发肿瘤分期（P=0.001）、淋巴结转移（P=0.010）以及TNM分期（P=0.005）密切相关;B7-H3与Tie2表达呈正相关（r=0.306,P=0.005）。3.CD34标记的微血管密度（microvessel density,MVD）与肾透明细胞癌肿瘤分级（P=0.032）、原发肿瘤分期（P=0.004）、淋巴结转移（P=0.007）、远处转移（P=0.002）及TNM分期（P<0.001）密切相关;B7-H3与Tie2血管表达均与微血管密度正相关（P<0.05）。4.免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜扫描结果显示B7-H3与Tie2均表达于肿瘤血管内皮,且在肾透明细胞癌血管内皮中存在共表达。结论:1.肾透明细胞癌组织B7-H3、Tie2血管表达与肾透明细胞癌进展和预后密切相关,二者可作为肾透明细胞癌预后判断有效的内皮标志物;2.B7-H3、Tie2在肾透明细胞癌血管生成中可能具有协同作用,有望成为肾透明细胞癌抗血管生成联合靶向治疗有效的靶标。第二部分B7-H3+TEMs介导肾透明细胞癌血管生成的实验研究目的:探讨B7-H3+TEMs在肾透明细胞癌血管生成中的作用。方法:1.采用流式细胞术检测肾透明细胞癌组织及正常肾组织中TEMs上B7-H3表达情况;2.免疫组化方法检测CD34水平,分析肾透明细胞癌组织B7-H3+TEMs高表达组和B7-H3+TEMs低表达组之间微血管密度的差异;3.将786-O肾癌细胞株与B7-H3+TEMs或B7-H3-TEMs共培养,分别收集B7-H3+TEMs和B7-H3-TEMs培养上清液作为条件培养基,通过小管形成实验观察B7-H3+TEMs对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）小管形成的影响;4.将条件培养基作用于小鼠主动脉环,通过小鼠主动脉环实验观察B7-H3+TEMs对小鼠主动脉环的新生血管形成的影响。结果:1.流式细胞分析显示肾透明细胞癌组织中TEMs表面B7-H3分子表达率为45.10±17.78%,正常肾组织表达率为10.28±4.28%;肾透明细胞癌组织TEMs上B7-H3分子表达率高于正常肾组织表达率,差异具有统计学意义（P<0.001）。2.B7-H3+TEMs低表达组微血管密度为76.55±20.80,B7-H3+TEMs高表达组微血管密度为103.81±29.28;B7-H3+TEMs高表达组MVD显着高于B7-H3+TEMs低表达组MVD（P=0.027）。3.小管形成实验结果显示B7-H3+TEMs组HUVECs的小管形成能力显着强于B7-H3-TEMs和空白对照组（P<0.001）。4.小鼠主动脉环实验显示B7-H3+TEMs组主动脉环新生血管形成能力显着高于B7-H3-TEMs和空白对照组（P<0.001）。结论:B7-H3+TEMs可促进肾透明细胞癌的血管生成,B7-H3+TEMs可作为肾透明细胞癌抗血管生成治疗有效靶标。
代宇,丁辉,田跃军,尚攀峰,洪梅[10]（2016）在《TRAIL与泌尿系肿瘤研究进展》文中认为肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是选择性诱导肿瘤细胞凋亡的重要代表。TRAIL通过与其配体相互作用,并且通过各种信号通路从而诱导肿瘤细胞凋亡。TRAIL具有特异性靶向癌细胞的能力,而对正常细胞没有影响。近年来,越来越多的临床试验证明TRAIL联合各种增敏剂在抗肿瘤方面具有独特的优势。本文就其结构功能、信号通路及诱导泌尿系肿瘤凋亡研究中的最新进展做如下综述。
二、NF-κB与泌尿系肿瘤（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、NF-κB与泌尿系肿瘤（论文提纲范文）
（1）TRIMs家族蛋白在泌尿系肿瘤中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 TRIMs家族概述 |
| 1.1 TRIMs家族蛋白的结构 |
| 1.2 TRIMs家族蛋白在肿瘤中的相关作用机制 |
| 1.2.1 TRIMs家族蛋白参与泛素化 |
| 1.2.2 TRIMs家族蛋白参与调控NF-κB |
| 1.2.3 TRIMs家族蛋白参与EMT |
| 2 TRIMs家族蛋白与泌尿系肿瘤 |
| 2.1 TRIMs家族蛋白与肾肿瘤 |
| 2.2 TRIMs家族蛋白与膀胱肿瘤 |
| 2.3 TRIMs家族蛋白与前列腺肿瘤 |
| 3 小 结 |
（2）EGF基因多态性与膀胱癌和肾癌关系的病例对照研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究对象纳入及排除标准 |
| 1.3 样本量的估计 |
| 1.4 基线资料的收集 |
| 1.5 调查指标界定及变量定义 |
| 1.6 EGF基因多态位点选择 |
| 1.7 实验仪器与试剂 |
| 1.8 实验方法 |
| 1.9 统计学处理 |
| 1.10 质量控制 |
| 2 结果 |
| 2.1 EGF基因多态性与膀胱癌关系的病例对照研究 |
| 2.2 EGF基因多态性与肾癌关系的病例对照研究 |
| 3 讨论 |
| 3.1 生活行为习惯与膀胱癌和肾癌的关系 |
| 3.2 EGF基因多态性与膀胱癌和肾癌的关系 |
| 3.3 膀胱癌和肾癌基因型与临床特征的关系 |
| 3.4 基因-环境交互作用与膀胱癌肾癌的关系 |
| 3.5 血清中EGF蛋白浓度与膀胱癌和肾癌的关系 |
| 3.6 癌和癌旁组织中EGFmRNA相对含量 |
| 3.7 展望与不足 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 表皮生长因子基因与膀胱癌和肾癌关系研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 生活状况与健康调查表 |
（3）长链非编码RNA STYK1-2在膀胱癌发展中的功能及其机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 lnc-STYK1-2在膀胱癌中进一步的功能验证及其机制的探索 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 第二章 lnc-STYK1-2在膀胱癌中的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 长链非编码RNA与膀胱癌 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士研究生期间发表的文章 |
| 致谢 |
（4）尼古丁通过激活NF-κB通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 尼古丁在膀胱癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
（5）消栓通脉汤介导microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成的机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 实验研究 |
| 实验一 DVT大鼠血管内皮细胞中NF-κB、ICAM-1、E-selectin、VCAM-1 的表达和中药干预作用 |
| 一、技术路线 |
| 二、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验主要试剂 |
| (三)实验主要仪器 |
| (四)实验主要器械和材料 |
| (五)实验药物 |
| 三、实验方法 |
| (一)实验动物及分组 |
| (二)用药剂量及给药方式 |
| (三)模型制备 |
| (四)标本取材 |
| (五)标本石蜡切片制备 |
| (六)血管标本HE染色 |
| (七)免疫组化实验步骤 |
| (八)免疫组化染色切片结果定量分析 |
| (九)统计分析 |
| 四、实验结果 |
| (一)大鼠模型成功建立 |
| (二)各组大鼠血管内皮细胞NF-κB(P65)、VCAM-1、E-selectin、ICAM-1 的表达水平以及中药对各项指标的影响 |
| 实验二 DVT大鼠血管壁中microRNA-181b的表达和中药干预作用 |
| 一、技术路线 |
| 二、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验主要试剂 |
| (三)实验主要仪器 |
| (四)实验主要器械和材料 |
| (五)实验药物 |
| 三、实验方法 |
| (一)实验分组 |
| (二)用药剂量及给药方式 |
| (三)模型制备 |
| (四)标本取材 |
| (五)实验步骤 |
| (六)统计方法 |
| 四、实验结果 |
| (一)大鼠模型成功建立 |
| (二)各组大鼠静脉内皮细胞microRNA-181b表达水平变化 |
| 实验三 microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成 |
| 一、技术路线 |
| 二、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)动物分组 |
| (三)实验试剂 |
| (四)实验仪器 |
| (五)实验器械和材料 |
| 三、实验方法 |
| (一)动物模型建立 |
| (二)各组大鼠成栓效应检测 |
| (三)各组大鼠静脉壁NF-κB(P65)表达情况及VCAM-1、E-selectin、ICAM-1 等黏附分子的表达情况检测 |
| (四)统计学处理 |
| 四、实验结果 |
| (一)静脉给药影响静脉内皮miR-181b的表达 |
| (二)miR-181b抑制大鼠静脉血栓模型的成栓效应 |
| (三)miR-181b抑制DVT模型中静脉内皮黏附分子的表达 |
| (四)miR-181b抑制腔静脉DVT模型中NF-κB信号通路的激活 |
| 讨论 |
| 一、祖国医学对DVT认知与研究 |
| (一)祖国医学对DVT病因病机的认识 |
| (二)祖国医学对DVT的治疗 |
| 二、现代医学对DVT的认识和研究 |
| (一)现代医学对DVT发病机制的认识 |
| (二)现代医学对DVT的预防 |
| (三)现代医学对DVT的诊断 |
| (四)现代医学对DVT的治疗 |
| 三、炎性反应与DVT |
| 四、microRNA与 DVT |
| 五、消栓通脉汤方解 |
| 六、消栓通脉汤对DVT的干预机制研究 |
| (一)消栓通脉汤抑制了大鼠静脉血管内皮中NF-κB(P65)及黏附分子的表达 |
| (二)消栓通脉汤可上调miR-181b的表达治疗DVT |
| (三)miR-181b可以抑制NF-κB信号通路的激活干预DVT发病 |
| 七、本研究创新点及不足之处 |
| (一)创新点 |
| (二)不足之处 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 炎性反应与静脉血栓栓塞症的相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、附图 |
| 二、附表 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 发表论文 |
| 科研课题 |
（6）肾癌来源的间充质干细胞通过激活NF-kB 信号通路诱导巨噬细胞向M2型极化并促进肾癌侵袭与迁移（论文提纲范文）
| 英文缩略词表(Abbreviation) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 外泌体生物学特性及在常见泌尿系肿瘤中的研究现况 |
| 参考文献 |
（7）circ0033506/miR-154/PRKCA轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文略缩语 |
| 第一部分:miR-154 介导PRKCA对膀胱癌细胞生物学功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 临床组织样本 |
| 2.1.2 细胞系 |
| 2.1.3 质粒 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学预测 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 细胞转染 |
| 2.2.4 RNA提取 |
| 2.2.5 Reverse Transcription PCR |
| 2.2.6 Quantitative Real-Time PCR |
| 2.2.7 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.2.8 双萤光素酶报告基因检测 |
| 2.2.9 EdU细胞增殖实验 |
| 2.2.10 CCK-8细胞增殖活性实验 |
| 2.2.11 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2.2.12 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 PRKCA在膀胱癌中高表达 |
| 3.2 miR-154-5p是 PRKCA上游的调控因子 |
| 3.3 miR-154在膀胱癌中低表达且影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 3.4 miR-154 通过靶向调节PRKCA的表达对膀胱癌细胞生物学功能产生影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:circ0033506 通过调控miR-154/PRKCA轴对膀胱癌细胞生物学功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 临床组织样本 |
| 2.1.2 细胞系 |
| 2.1.3 病毒 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.1.5 实验仪器 |
| 2.1.6 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学预测 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 细胞转染 |
| 2.2.4 RNA提取 |
| 2.2.5 Reverse Transcription PCR |
| 2.2.6 Quantitative Real-Time PCR |
| 2.2.7 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.2.8 双萤光素酶报告基因检测 |
| 2.2.9 RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP) |
| 2.2.10 circRNA pull-down |
| 2.2.11 EdU细胞增殖实验 |
| 2.2.12 CCK-8细胞增殖活性实验 |
| 2.2.13 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2.2.14 免疫组织化学 |
| 2.2.15 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 circ0033506 在膀胱癌中内源性吸附miR-154 |
| 3.2 circ0033506在膀胱癌中高表达且影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 3.3 circ0033506 通过调节miR-154/PRKCA轴对膀胱癌细胞生物学功能产生影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:膀胱癌中circ0033506 通过介导PRKCA激活NF-κB信号通路 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 病毒 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学预测 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 细胞转染 |
| 2.2.4 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 circ0033506可以调控P65核转位 |
| 3.2 circ0033506 通过介导PRKCA调控P65 核转位 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）circINTS4/miR-146b/CARMA3轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文略缩语 |
| 第一部分 :miR-146b/CARMA3 轴对膀胱癌细胞生物学功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 临床资料及实验材料 |
| 2.1.1 临床资料来源 |
| 2.2 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂 |
| 2.2.1 实验用细胞系 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 生物信息学预测 |
| 2.3.3 脂质体转染 |
| 2.3.4 实时定量PCR |
| 2.3.5 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.3.6 双萤光素报告基因检测 |
| 2.3.7 RTCA实验 |
| 2.3.8 侵袭转移实验 |
| 2.3.9 流式检测细胞周期 |
| 2.3.10 流式检测细胞凋亡 |
| 2.3.11 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 CARMA3 在膀胱癌中高表达 |
| 3.2 miR-146b在膀胱癌中低表达 |
| 3.3 miR-146b介导CARMA3 的表达 |
| 3.4 miR-146b影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 3.5 miR-146b通过调控CARMA3 进而影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :circINTS4 通过调控miR-146b/CARMA3 轴影响膀胱癌生物学功能 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 临床资料及实验材料 |
| 2.1.1 临床资料来源 |
| 2.2 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂 |
| 2.2.1 实验用细胞系 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 生物信息学预测 |
| 2.3.3 脂质体转染 |
| 2.3.4 实时定量PCR |
| 2.3.5 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.3.6 双萤光素报告基因检测 |
| 2.3.7 CircRNA pull-down实验 |
| 2.3.8 FISH实验(荧光原位杂交) |
| 2.3.9 RIP实验 |
| 2.3.10 RTCA实验 |
| 2.3.11 侵袭转移实验 |
| 2.3.12 流式检测细胞周期 |
| 2.3.13 流式检测细胞凋亡 |
| 2.3.14 免疫组织化学 |
| 2.3.15 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 circINTS4 在膀胱癌中内源性吸附miR-146b |
| 3.2 .circINTS4 在膀胱癌中高表达 |
| 3.3 .circINTS4 影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 3.4 .circINTS4 通过调控miR-146b/CARMA3 轴而影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :circINTS4 在膀胱癌中可通过CARMA3 介导的方式激活NF-kB信号通路及抑制P38 MAPK信号通路 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂 |
| 2.1.1 实验用细胞系 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 脂质体转染 |
| 2.2.3 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 .circINTS4 在膀胱癌中可通过CARMA3 介导的方式激活NF-kB信号通路 |
| 3.2 .circINTS4 在膀胱癌中可通过CARMA3 介导的方式抑制P38 MAPK信号通路 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）B7-H3与Tie2在肾透明细胞癌血管中的表达及其在肿瘤血管生成中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 B7-H3和TIE2在肾透明细胞癌组织血管中表达及意义 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 B7-H3~+TEMS介导肾透明细胞癌血管生成的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文对照及缩略词表 |
| 攻读学位期间完成的论文和成果 |
| 致谢 |
（10）TRAIL与泌尿系肿瘤研究进展（论文提纲范文）
| 1 TRAIL的作用机制 |
| 1.1 TRAIL及其受体 |
| 1.2 TRAIL功能 |
| 1.3 TRAIL诱导凋亡及TRAIL抵抗 |
| 2 TRAIL信号通路 |
| 2.1 NF-κB信号通路 |
| 2.2 STAT3信号通路 |
| 2.3 MAPKs信号通路 |
| 2.4 PI3K/Akt信号通路 |
| 3 TRAIL诱导泌尿系肿瘤凋亡 |
| 3.1 TRAIL与前列腺癌 |
| 3.2 TRAIL与膀胱癌 |
| 3.3 TRAIL与肾癌 |
| 4 结语与展望 |
四、NF-κB与泌尿系肿瘤（论文参考文献）
- [1]TRIMs家族蛋白在泌尿系肿瘤中的研究进展[J]. 宋诗璋,陈世凯,梁鑫,翁博文,侯四川. 医学综述, 2022(04)
- [2]EGF基因多态性与膀胱癌和肾癌关系的病例对照研究[D]. 程佳颖. 内蒙古医科大学, 2021(02)
- [3]长链非编码RNA STYK1-2在膀胱癌发展中的功能及其机制研究[D]. 林芮锋. 广州医科大学, 2021(02)
- [4]尼古丁通过激活NF-κB通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭[D]. 卢友路. 安徽医科大学, 2021(01)
- [5]消栓通脉汤介导microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成的机制研究[D]. 庞雪. 山东中医药大学, 2020(01)
- [6]肾癌来源的间充质干细胞通过激活NF-kB 信号通路诱导巨噬细胞向M2型极化并促进肾癌侵袭与迁移[D]. 曹张军. 安徽医科大学, 2020(02)
- [7]circ0033506/miR-154/PRKCA轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究[D]. 张佳润. 中国医科大学, 2020(01)
- [8]circINTS4/miR-146b/CARMA3轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究[D]. 张效通. 中国医科大学, 2019(01)
- [9]B7-H3与Tie2在肾透明细胞癌血管中的表达及其在肿瘤血管生成中的作用[D]. 张先云. 苏州大学, 2018(12)
- [10]TRAIL与泌尿系肿瘤研究进展[J]. 代宇,丁辉,田跃军,尚攀峰,洪梅. 现代肿瘤医学, 2016(20)