一、原发性胆囊癌的早期诊断（论文文献综述）
臧秀娟,房欣,胡海彦,寇志伟[1]（2021）在《磁共振成像与CT对原发性胆囊癌的早期诊断价值比较》文中研究表明原发性胆囊癌是胆道系统的较为常见的恶性肿瘤,其发病率约占恶性肿瘤的5%左右[1]。近年来,随着人们生活方式的改变及影像检查方法的改进,原发性胆囊癌的发病率逐年上升。原发性胆囊癌在发病早期缺乏特异性体征和症状,因此诊断较为困难,待临床发现时多数患者已为晚期,此时治疗的预后较差[2]。故而,早期诊断对治疗原发性胆囊癌具有重要意义。基于此,文章对比研究了磁共振成像（MRI）与CT对原发性胆囊癌的早期诊断价值,现报告如下。
常毅刚[2]（2020）在《胆囊癌的病例特征、早期诊断、治疗措施及预后研究》文中研究表明目的:利用1145例患者的临床资料建立胆囊癌患者预后列线图并进行验证;分析肿瘤标志物联合检测在胆囊癌诊断中的应用价值;考察不同手术方式的选择对胆囊癌患者预后的影响;考察188例意外胆囊癌的诊断与治疗现状。方法:（1）采用回顾性病例对照研究方法。收集在2012.1.1至2019.1.1在天津医科大学附属肿瘤医院、山西省人民医院、山西医科大学第一医院及山西省肿瘤医院进行治疗的胆囊癌患者的临床病例资料。对治疗周期结束的患者进行电话方式的随访,随访内容为患者术后生存情况,随访结束事件为患者死亡或随访时间截止至2019.6.1,最后以有完整随访资料的1145例胆囊癌患者作为研究对象。Cox比例风险回归模型筛选影响预后的独立危险因素。列线图的绘制使用R语言（The R Project for Statistical Computing,Vienna,Austria）的survival包及rms包实现,变量得分使用nomogram Ex包计算。列线图的准确性通过一致性指数（C-index）及校正曲线判断。内部验证和外部验证的方法分别为Bootstrap法和验证集法,内部验证的重复取样次数为1000次。比较预后列线图与AJCC分期的预测能力。（2）资料来源为2012年1月1日至2019年1月1日在山西省人民医院进行治疗的胆囊癌、胆囊息肉和胆囊结石患者250例。分别进行CA199、CEA、CA125、和CA242检测及病理学诊断。诊断结果包括胆囊息肉、胆囊结石和胆囊癌。其中胆囊结石或胆囊息肉112例,胆囊癌患者138例。考察各肿瘤标志物的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。（3）具有手术记录,并有随访记录的患者为749例,统计患者的手术方式包括胆囊切除术（LC或开腹）、围胆囊床切除术、肝IVb+V段+肝十二指肠韧带清扫术、扩大根治术、短路手术或姑息切除术、经皮肝穿刺胆道引流术（PTCD等）。考察手术方式对患者预后生存期的影响。（4）选取2012.1.1至2019.1.1在天津医科大学附属肿瘤医院、山西省人民医院、山西医科大学第一医院及山西省肿瘤医院进行治疗的意外胆囊癌患者188例,分析并总结188例意外胆囊癌患者的临床资料。结果:（1）1145例患者临床资料分析显示,影响胆囊癌患者预后的独立危险因素包括:男性、年龄>79岁、中/低分化程度、存在淋巴结转移、发生癌旁浸润和发生远处转移（P<0.05）等,危险度分别为1.237,1.551,2.969,1.957,1.492以及1.446。（2）内部验证的C-index为0.76（95%CI 0.74～0.78）,术后5年DSS校正曲线提示在观察值与预测值之间有良好的一致性;AJCC分期的C-index为0.70（95%CI 0.67～0.73）,本列线图的预测能力优于AJCC分期,两组之间比较有统计学意义（P<0.001）。（3）验证集的中位DSS生存期为25.14个月,术后1、3、5年DSS相关生存率为71.0%、38.7%、30.5%。外部验证C-index为0.73（95%CI 0.68～0.78）,以5年生存率为例,外部验证与训练集的一致性较好。（4）观察组与对照组CA199、CEA的阳性率差异提示存在有统计学的意义（P<0.05）,此外差异无统计学意义的为CA242与CA125相比较的阳性率（P>0.05）。观察组CA199的阳性率显着高于对照组,CEA的阳性率显着低于对照组。（5）CA199用于胆囊癌诊断的灵敏度最高,可达到48.55%;CA199的特异度最高,可达到99.11%,同时其阳性预测值可达98.53%。（6）观察组和对照组患者,在CA242+CEA、CA199+CEA、CA199+CA125、CEA+CA125等方面差异有统计学意义（P<0.05）。对照组CA242+CEA阳性率、CA199+CEA阳性率、CEA+CA125阳性率显着高于观察组,观察组CA199+CA125阳性率显着高于对照组。（7）两种肿瘤标志物同时用于胆囊癌诊断时,CA242+CA199、CA199+CA125的灵敏度可超过50%,分别为53.75%和51.72%。同时,CA199+CA125的特异度为76.39%,阳性预测值和阴性预测值也分别可达到63.83%和66.27%。（8）观察组和对照组患者,在CA242+CA199+CEA、CA199+CEA+CA125等方面差异有统计学意义（P<0.05）。对照组CA242+CA199+CEA阳性率、CA199+CEA+CA125阳性率显着高于观察组。（9）三种肿瘤标志物同时用于胆囊癌的诊断时,CA242+CA199+CEA、CA199+CEA+CA12的灵敏度均超过了50%,达到59.49%和52.63%。但特异度、阳性预测值、阴性预测值等指标均表现不良。（10）LC或剖腹进行的手术患者有221例,占所有手术患者的比例为29.51%,所占比例最大,而晚期胆囊癌患者进行的姑息切除术或短路手术以及PTCD手术则所占比例较小,分别为7.61%、1.20%和14.69%。（11）对患者按照不同手术方式分为胆囊切除术组、围胆囊床切除术组、肝S4b+S5段切除+肝十二指肠韧带清扫术组和扩大根治术组,四组患者的临床资料在性别、是否是意外胆囊癌、胆道合并症、TNM分期等方面存在显着统计学差异（P<0.05）。其余临床资料之间比较无显着统计学意义（P>0.05）。（12）生存期存在显着差异（P<0.05）,具体表现为肝S4b+S5段+肝十二指肠韧带清扫术和单纯胆囊切除术的预后显着优于围胆囊床切除术和扩大根治术患者。1年生存率、3年生存率、5年生存率表现出了同样的趋势,单纯胆囊切除术和肝S4b+S5段+肝十二指肠韧带清扫术的预后显着优于围胆囊床和扩大根治术的患者（P<0.05）。（13）188例意外胆囊癌患者中,有181例有完整的预后生存时间记录,生存时间分布1.93～85.41月（中位生存时间为38.8月）。患者1年生存率为91.71%（166/181）,3年生存率为54.70%（99/181）,5年生存率为21.55%（39/181）。结论:（1）男性、年龄>79岁、中/低分化程度、发生淋巴结转移、癌旁浸润、发生远处转移等是影响胆囊癌患者预后的因素。基于影响胆囊肿瘤患者的7项预后因素建立预后列线图,具有准确、直观、个性化的预后患者术后生存率的优势。（2）CA199+CA125的灵敏度为诊断胆囊癌的最佳方法。（3）LC或剖腹进行的胆囊切除术所占比例最大,而晚期胆囊癌患者进行的姑息切除术或短路手术以及PTCD手术则所占比例较小。不同手术方式的临床资料在性别、意外胆囊癌、胆道合并症、TNM分期等方面存在差异。根治2和胆囊切除术的术后生存期和生存率显着优于根治1和根治3患者。（4）中老年女性患者意外性胆囊癌发病率较高,而且发病率胆囊癌的发病率随着腹腔镜胆囊切除术的广泛开展也呈上升趋势;（5）目前临床上建议行预防性胆囊切除的患者包括:胆囊单发结石直径超过3厘米及多发结石、先天性发育异常的胰胆管汇合、粘膜有钙化的胆囊炎以及直径在0.5-1.0cm之间的胆囊息肉（6）对于早期胆囊癌只要能够达到R0切除,单纯胆囊切除与根治性切除患者的预后生存期无明显差别。
田佳[3]（2018）在《原发性胆囊癌外科诊治与预后分析（附93例临床报告）》文中提出目的:分析探讨原发性胆囊癌（Primary gallbladder cancer,PGBC）的临床特点、诊断、外科治疗以及预后相关性因素。方法:回顾性分析我院普外科自2010年1月至2015年12月收治的93例原发性胆囊癌病人资料。分析患者人口特点、临床表现、影像学及实验室检查结果、病理学诊断结果、随访及生存情况。采用Kaplan-Meier法对人口学因素（年龄、性别、血型）及临床病理因素（肿瘤标志物、术前黄疸、胆囊结石、肿瘤病理学类型、肿瘤病理学分级、肝脏侵犯、淋巴结转移、T分期、N分期、M分期、TNM分期、手术方式、意外胆囊癌）进行生存分析,Cox法进行多因素分析,Student’s test法验证变量间的相互关系。结果:93例患者中,男30例,女63例,平均年龄为（65.0±11.3）岁。平均住院时间位（18.2±8.7）天。主要临床表现为右上腹不适或疼痛76例（81.7%）,乏力、纳差37例（39.8%）,黄疸26例（28.0%）,体重明显减轻25例（26.9%）,恶心、呕吐11例（11.8%）,腹胀9例（9.7%）,腹部包块5例（5.4%）,发热5例（5.4%）,无明显症状者9例（9.7%）;伴有胆囊结石者67例（72.0%）。实验室检验结果:AFP升高者6例,检出率6.5%;CEA升高者20例,检出率21.2%;CA125升高者26例,检出率28.0%;CA199升高者37例,检出率39.8%;两种及以上肿瘤标志物的联合检出率为55.9%。影像学检查结果:腹部彩B超检查,检出率为78.5%;腹部CT（平扫或增强）检查,检出率为87.0%;腹部MRI或MRCP（平扫或增强）检查,检出率为83.8%。手术结果:93例患者行R0根治性切除手术者有64例（68.8%）,姑息性手术者有29例（31.2%）,其中意外胆囊癌有16例（17.2%）。病理学类型以腺癌（90.3%）为主,其余为印戒细胞癌（4.3%）;肉瘤样癌（3.2%）;粘液腺癌（3.2%）;肝样腺癌（2.2%）;腺鳞癌（2.2%）;恶性纤维组织细胞癌（1.1%）;鳞癌（1.1%）;神经内分泌癌（1.1%）;透明细胞癌（1.1%）。病理学分级:高分化7例（7.5%）;中分化46例（49.5%）;中低分化28例（30.1%）;低分化12例（12.9%）。TNM分期:Ⅰ期22例（23.7%）,Ⅱ期15例（16.1%）,Ⅲ期29例（31.2%）,Ⅳ期27例（29.0%）。肝脏侵犯54例（58.1%）;淋巴结转移46例（49.5%）,大多转移至肝十二指肠韧带淋巴结、肝总动脉周围淋巴结、胰头后淋巴结。术后随访时间为1.087.0个月,24例患者仍存活,69例死亡,中位随访时间为13.0个月,中位生存时间为13.0个月,平均生存时间为（30.0±3.4）个月,1、3、5年累计生存率分别为50.5%、31.4%、20.7%。结论:1.原发性胆囊癌老年人好发,女性多见,缺乏特异性临床表现,多种辅助检查方法相结合,可以提高胆囊癌诊断率,根治性手术切除能够有效地延长患者生命期限。2.单因素分析结果表示:术前血清CA125、CA199水平、术前黄疸、肿瘤病理学分级、肝脏侵犯、淋巴结转移、T分期、N分期、M分期、TNM分期、手术方式、意外胆囊癌均是影响原发性胆囊癌患者预后的危险因素。年龄、性别、血型、术前血清AFP、CEA水平、胆囊结石、肿瘤病理学类型与原发性胆囊癌预后无明显相关性。3.多因素分析结果表示:术前血清CA199、肿瘤病理学分级、淋巴结转移、TNM分期、意外胆囊癌是影响胆囊癌预后的独立危险因素,与原发性胆囊癌预后显着相关。4.对于晚期及高龄原发性胆囊癌患者,相比姑息性手术,根治性手术可取得更好的预后,且并未延长住院时间。
李国勤,刘礼健,白锡光,尹忠生,曾子娟,王明明[4]（2017）在《原发性胆囊癌的CT、MRI诊断价值分析》文中提出择取我院于2013年3月2016年6月收治的86例病理检查确诊为原发性胆囊癌患者参与研究,为本组患者分别行CT诊断以及MRI诊断,对比两种诊断方式的最终诊断结果。CT诊断结果显示出48例胆囊癌阳性患者,诊断准确率为（55.81%）,MRI诊断结果显示出71例胆囊癌阳性患者,诊断准确率为（82.56%）,组间数据经过统计学分析,差异有意义（P<0.05）。在原发性胆囊癌的早期诊断中MRI的诊断准确率显着高于CT诊断,在胆囊周边组织病变情况以及肿瘤浸润程度判断等方面具有更高的应用价值。
陈静[5]（2016）在《磁共振成像在原发性胆囊癌早期诊断中的应用价值探讨》文中提出目的对磁共振成像（MRI）在原发性胆囊癌早期诊断中的应用价值进行探析。方法随机选择成都市第六人民医院于2012-07—2015-10间收治的42例原发性胆囊癌患者,均实施B超与MRI检查,对比与观察两种诊断方式的诊断准确率。结果42例原发性胆囊癌患者根据患者影像资料,可分为三型,21例肿块型,13例厚壁型,8例腔内结节型。MRI诊断准确率是73.8%,B超诊断准确率是61.9%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 MRI在原发性胆囊癌早期诊断中的应用价值较高。
彭腊么,彭所明,朱洪[6]（2015）在《原发性胆囊癌的早期诊断进展》文中研究表明胆囊癌为最常见胆道恶性肿瘤之一,患者早期无特征性症状和表现。因而,提高早期诊断率为国内外学者们研究的重要课题。本文就胆囊癌的危险因素和影像学诊断、肿瘤标记物等的早期诊断研究新进展作一综述。
殷保兵[7]（2014）在《原发性胆囊癌的早期诊断》文中进行了进一步梳理原发性胆囊癌是胆道常见恶性肿瘤,恶性程度高,发现时往往伴有肝脏转移,预后极差。掌握原发性胆囊癌的高危因素,对胆囊癌高危人群进行密切随访和筛选,可提高原发性胆囊癌的早期诊断率,对改善胆囊癌的预后有重大意义。
魏东[8]（2014）在《Bmi-1调控人胆囊癌细胞增殖的效应及其WWOX信号通路的分子机制》文中研究说明[研究目的]1.探讨Bmi-1、WWOX及PUMA基因在胆囊癌组织和慢性胆囊炎伴轻-中度非典型增生组织及正常胆囊组织中的表达差异,分析Bmi-1/WWOX/PUMA表达与胆囊癌临床病理因素的关系,有望揭示其表达差异在胆囊癌发生、发展中的作用及其临床意义,为后续研究胆囊癌的发生机制奠定基础。2.通过体外RNAi干扰技术成功构建靶向shRNA-Bmi-1重组载体抑制原癌基因Bmi-1表达,观察其对胆囊癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的效应,探讨Bmi-1调控WWOX/P73/PUMA/Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路调节胆囊癌细胞生长的分子机制。3.通过体外成功构建pcDNA3.0-WWOX真核表达载体,探讨过表达WWOX基因对胆囊癌细胞增殖,凋亡及细胞周期的影响,进一步研究WWOX/P73/PUMA/Bax/Bcl-2通路调控胆囊癌细胞生长的分子机制,为研究Bmi-1/WWOX通路间是否存有反馈环路奠定基础。4.成功建立了人胆囊癌BALB/C裸鼠皮下移植瘤模型,通过体内试验评估靶向抑制Bmi-1对移植瘤的治疗效果,进一步探讨其对胆囊癌细胞生长的影响及调控Bmi-1/WWOX/P73/PUMA/Bax/Bcl-2通路的分子机制,验证体外实验结果。5.本课题通过临床相关研究,体外及裸鼠体内试验研究,全面系统阐述Bmi-1调控人胆囊癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的效应及其WWOX信号通路的分子机制,将有助于胆囊癌标志物的筛选及病情的预后和评估,为胆曩癌的早期诊断、分子靶向治疗提供理论依据和实验数据。[研究方法]1.临床相关研究：收集临床病理资料完整的原发性胆囊腺癌病人手术标本存档石蜡块55例,收集同期慢性胆囊炎伴轻-中度非典型增生组织标本30例及正常胆囊组织标本22例（均来自于肝内胆管结石或肝脏肿瘤行右半肝切除患者,胆囊内无结石及肿瘤侵袭）作对照,其中每组病例包括新鲜组织各5例。应用IHC-Max Vision法、RT-PCR及Real-time PCR等技术检测上述标本中Bmi-1/WWOX/PUMA mRNA及蛋白的表达差异,分析三者表达与胆囊癌临床病理因素的关系及意义。2.体外研究,以原癌基因Bmi-1mRNA为靶点：通过体外RNAi干扰技术成功构建shRNA-Bmi-1重组载体转染胆囊癌GBC-SD细胞,应用倒置荧光显微镜及流式细胞技术评价其转染效率,以RT-PCR及Westernblot检测转染后胆囊癌细胞转录和翻译水平的变化,筛选出最佳干扰作用的Bmi-1靶序列重组质粒为后续实验组。通过倒置显微镜观察、Brdu实验、Annexin V/7-AAD单染和双染实验、透射电镜及细胞周期检测技术分析靶向shRNA抑制Bmi-1对胆囊癌细胞增殖活性、凋亡进程及细胞周期的影响机制及其生物学效应与时间梯度的关系,进一步通过Real-time PCR, Western Blot,免疫荧光染色及流式细胞检测等技术探讨靶向shRNA抑制Bmi-1表达对WWOX/P73/PUMA/Bax/Bcl-2/Caspase-3通路影响的分子机制。3.体外研究,以抑癌基因WWOXmRNA为靶点：提取GBC-SD细胞总RNA,采用RT-PCR扩增WWOX全序列,将其克隆到真核表达载体pCDNA3.0中,通过限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定,成功构建pcDNA3.0-WWOX重组真核表达载体。按脂质体介导转染GBC-SD细胞,同时转染空载体、脂质体为阴性对照及GBC-SD细胞为空白对照。以RT-PCR、Westemblot及免疫荧光技术检测转染后胆囊癌细胞转录和翻译水平的变化,以MTT法、AnnexinV/7-AAD双染、TUNNEL法、细胞周期检测技术、透射电镜技术、线粒体跨膜电位检测技术分析过表达WWOX对胆囊癌细胞增殖活性、凋亡及细胞周期的影响机制及其生物学效应与时间梯度的关系,进一步通过Real-time PCR, Western Blot,免疫荧光染色及流式细胞检测等技术探讨pcDNA3.0-WWOX真核表达载体对WWOX/P73/PUMA/Bax/Bcl-2通路调控的分子机制。4.体内试验研究：以体外实验结果为基础,通过建立人胆囊癌BALB/C裸鼠皮下移植瘤模型,应用shRNA-Bmi-1重组质粒在移植瘤周围及瘤内多点注射,实验终止绘制移植瘤生长曲线,计算瘤体抑制率,通过标本解剖和组织病理检测手段探讨靶向shRNA抑制Bmi-1表达对裸鼠皮F移植瘤的抗瘤效果,通过Max Vision去、TUNEL法、透射电镜、RT-PCR及Western Blot等检测技术进一步探讨Bmi-1对胆囊癌细胞生长的影响及调控WWOX通路关键基因表达的分子机制。[研究结果11.临床相关研究结果（1）IHC-MaxVision检测结果显示：Bmi-1、WWOX及PUMA蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达分别为83.6%（46/55）、38.2%（21/55）和34.5%（19/55）,其中Bmi-1蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达明显高于慢性胆囊炎伴非典型增生组织及正常胆囊组织,而WWOX及PUMA蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达明显低于慢性胆囊炎伴非典型增生组织及正常胆囊组织（P<0.05）。（2）Bmi-1、WWOX及PUMA表达差异与临床病理因素的关系结果：Bmi-1、WWOX蛋白表达水平与胆囊癌的病理分期、分化程度及淋巴结转移有关（P<0.05）,与胆囊癌患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、是否伴有肝硬化及胆囊结石无相关性（p>0.05）。PUMA蛋白表达水平与胆囊癌分化程度及淋巴结转移有关（P<0.05）,而与患者性别、年龄、肿瘤大小、临床病理分期、肿瘤部位、是否伴有肝硬化及胆囊结石均无相关性（p>0.05）。（3） Realtime PCR和RT-PCR检测结果：Bmi-1mRNA表达为胆囊癌组织>慢性胆囊炎伴非典型增生组织>正常胆囊组织；而WWOX及PUMAmRNA表达为胆囊癌组织<慢性胆囊炎伴非典型增生组织<正常胆囊组织（P<0.05）。实验表明Bmi-1、WWOX及PUMA基因可能参与胆囊癌发生、发展过程,慢性胆囊炎伴非典型增生组织中Bmi-1持续高表达或WWOX/PUMA持续低表达警示胆囊癌发生的可能。2.以原癌基因Bmi-1mRNA为靶点的体外研究结果（1） shRNA-Bmi-1重组载体的构建及筛选结果：shRNA-Bmi-1重组载体构建后经基因测序证明所获得的4组Bmi-1基因扩增序列正确。应用倒置荧光显微镜及流式细胞技术检测细胞转染效率70%左右；将4组质粒分别转染胆囊癌GBC-SD细胞48h后,通过RT-PCR及Westernblot检测筛选出第四组序列在转录和翻译水平抑制显着,为后续实验组（即为shRNA-Bmi-1组）。（2）靶向shRNA干扰Bmi-1表达对胆囊癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响结果：通过RT-PCR及Westernblot检测显示靶向抑制Bmi-1,其mRNA及蛋白表达水平均明显低于对照组（p<0.05）；而对照组间表达量无显着差异（p>0.05）。倒置显微镜观察发现shRNA-Bmi-1对胆囊癌细胞的影响随时间的推移,增殖抑制率较对照组明显,其中以转染后72h抑制效果最显着,细胞死亡最多。Brdu检测显示shRNA-Bmi-1组细胞增殖活性较对照组降低,细胞增殖力呈时间依存性,随时间推移增殖力明显减弱,于转染72h细胞增殖抑制最强（p<0.05）。AnnexinV/7-AAD单染和双染检测显示转染shRNA-Bmi-1重组质粒24h-48h-72h后,shRNA-Bmi-1组细胞凋亡率均随时间推移明显增加（24h<48h<72h）,且与晚期凋亡增加为主（p<0.05）。透射电镜检测发现shRNA-Bmi-1转染组胆囊癌细胞浓缩、核固缩形成凋亡小体。细胞周期检测显示shRNA-Bmi-1转染组G0/G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少,细胞阻滞于G0/G1,细胞凋亡率明显增高,增殖指数降低（p<0.05）。（3）靶向shRNA干扰Bmi-1表达调控WWOX通路的分子机制研究结果：通过Real-time PCR、Western Blot及免疫荧光染色技术检测显示shRNA-Bmi-1转染组胆囊癌细胞Bmi-1mRNA及蛋白表达量及蛋白荧光强度较对照组减少,而WWOX、P73、PUMAmRNA及蛋白表达量较对照组均明显增加,蛋白荧光表达强度明显增强（p<0.05）；流式细胞仪技术检测显示shRNA-Bmi-1转染组胆囊癌细胞Bax及Caspase-3蛋白表达较对照组增加,而Bcl-2蛋白表达较对照组减少（p<0.05）。3.以抑癌基因WWOX mRNA为靶点的体外实验研究结果（1）WWOX基因真核表达载体的构建：pcDNA3.0-WWOX重组质粒经双酶切鉴定及基因测序证明所获得的WWOX基因扩增序列正确。（2）pcDNA3.0-WWOX重组质粒对胆囊癌细胞增殖、凋亡及细胞周期影响结果：RT-PCR及Westernblot检测显示pcDNA3.0-WWOX转染48小时后WWOXmRNA及蛋白表达水平均明显高于对照组（p<0.05）；对照组间mRNA及蛋白表达量无显着差异（p>0.05）。免疫荧光检测结果显示pcDNA3.0-WWOX组细胞WWOX蛋白荧光强度在细胞核周围明显强于各对照组,而对照组间细胞WWOX蛋白荧光强度变化不明显。倒置显微镜观察发现pcDNA3.0-WWOX组贴壁的GBC-SD细胞数量明显减少,悬浮细胞及细胞碎片增加,而对照组细胞呈正常增殖状态,贴壁生长良好。MTT法检测显示pcDNA3.0-WWOX组细胞增殖活性明显降低,且随时间推移细胞增殖抑制效果更为显着,对照组细胞增殖抑制不明显（P<0.05）。BrdU检测显示pcDNA3.0-WWOX组细胞增殖率较对照组降低（P<0.05）。Annexin V/7-AAD双染检测发现pcDNA3.0-WWOX组胆囊癌细胞早、晚期凋亡率较对照组增高（p<0.05）；而对照组间早、晚期凋亡率未见显着差异（P>0.05）。TUNNEL法检测显示转染pcDNA3.0-WWOX重组质粒24h/48h/72h后,胆囊癌细胞凋亡比率较对照组增加,以转染48h后更为明显（p<0.05）。细胞周期检测发现pcDNA3.0-WWOX组G0/G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少,细胞凋亡率增高,增殖指数降低（p<0.05）；而对照组间未见显着性差异（p>0.05）。JC-1染色检测细胞线粒体跨膜电位（△Ψm）显示过表达WWOX基因胆囊癌细胞线粒体内绿色荧光信号显着高于空载体、脂质体及空白对照组,提示WWOX诱导胆囊癌细胞早期凋亡为主（p<0.05）。透射电镜观察pcDNA3.0-WWOX组细胞典型的凋亡形态学改变,出现核固缩、碎裂形成凋亡小体。（3）pcDNA-WWOX重组质粒对WWOX通路关键基因的影响结果：通过Real-time PCR,Western Blot及免疫荧光染色检测显示特异性上调WWOX表达,胆囊癌细胞中P73、PUMA在转录及翻译水平的表达量均较对照组增加（p<0.05）；流式细胞仪检测发现特异性上调WWOX表达,胆囊癌细胞中Bax蛋白表达水平较对照组明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平较对照组减少（p<0.05）。4.移植瘤体内试验研究结果裸鼠皮下接种GBC-SD细胞株5-7天后成瘤率为100%。shRNA-Bmi-1组移植瘤生长速度较对照组减慢,治疗6周实验终止时各实验组体积较治疗前增大,但shRNA-Bmi-1组移植瘤体积明显小于各对照组（shRNA-Scramble组、Lipofectamine组、GBC-SD组）,其瘤体抑制率为60.6%（p<0.05）,对照组间体积无明显差异（P>0.05）。HE染色显示shRNA-Bmi-1组细胞坏死明显,细胞形态模糊,见炎性细胞浸润,组织结构不清晰,而各对照组细胞异型性明显,炎性细胞较少,组织结构清晰。MaxVision染色发现shRNA-Bmi-1组移植瘤组织中Ki67及VEGF蛋白表达较对照组减弱,提示shRNA-Bmi-1组肿瘤新生血管生成减少、细胞增殖抑制明显。TUNEL及透射电镜检测显示靶向shRNA抑制Bmi-1体内可诱导胆囊癌细胞凋亡,与体外实验相符合。通过Real-time PCR、Western Blot及免疫组织化学检测发现靶向shRNA干扰Bmi-1表达可特异性促进Bmi-1mRNA的降解及抑制其蛋白的表达,同时促进下游通路中关键基因WWOX/P73/PUMA/Bax表达,抑制Bcl-2的表达水平。[研究结论]1. Bmi-1、WWOX及PUMA的表达参与胆囊癌的发生发展过程,Bmi-1阳性表达率越高,或WWOX、PUMA阳性表达越低或表达缺失,提示肿瘤恶性程度增加、转移增快,Bmi-1、WWOX及PUMA的表达差异可能参与肿瘤的侵袭及演进。应用免疫组化联合检测胆囊癌组织中的Bmi-1、WWOX及PUMA的表达将有利于协助胆囊癌的早期诊断,有助于对其预后进行合理评估。2.体外成功构建了shRNA-Bmi-1重组载体。靶向沉默Bmi-1表达能有效促进胆囊癌细胞Bmi-1mRNA降解及抑制其蛋白表达,能特异性抑制胆囊癌细胞增殖,诱导其凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而引起细胞DNA合成受阻,研究提示Bmi-1参与调控胆囊癌细胞的增殖和凋亡,维持细胞周期的运行,是抑制细胞凋亡和促进细胞异常增殖的重要因素。同时靶向沉默Bmi-1表达能有效促进WWOX通路中的关键基因WWOX/P73/PUMA/Bax/Caspase-3的表达,抑制Bcl-2蛋白表达,其作用可能与调控胆囊癌细胞生长效应的机制相关,Bmi-1及其Bmi-1/WWOX通路参与线粒体依赖的凋亡途径调控胆囊癌细胞的生长。3.体外成功构建了pcDNA3.0-WWOX真核表达载体。过表达WWOX可有效抑制胆囊癌细胞WWOXmRNA降解、促进其蛋白表达,能有效抑制胆囊癌细胞的增殖活性、诱导其凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期。同时上调并促进P73蛋白在胆囊癌细胞质中螯合积累,促进PUMA、Bax及抑制Bcl-2的转录和翻译过程,其作用可能是调控胆囊癌细胞生长的重要机制之一。WWOX/P73/PUMA通路通过调控线粒体依赖的凋亡途径来调节胆囊癌细胞的增殖、凋亡及细胞周期的变化,进一步证实了WWOX通路调控胆囊癌细胞的分子机制。4.成功建立胆囊癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。靶向沉默Bmi-1表达能诱导胆囊癌移植瘤细胞凋亡,显着抑制肿瘤的生长及新生血管的形成,影响裸鼠皮下移植瘤Bmi-1/WWOX/P73/PUMA/Bax/Bcl-2通路关键基因的表达,与体外实验相符合。体内实验进一步验证了Bmi-1/WWOX通路参与线粒体依赖的凋亡途径调控胆囊癌细胞的生长。5.Bmi-1及WWOX可能为胆囊癌基因靶向治疗提供潜在的分子靶标,通过靶向沉默Bmi-1表达和特异性性上调WWOX的表达可能是胆囊癌联合基因治疗的潜在治疗手段之一,阻断Bmi-1/WWOX通路对胆囊癌靶向性治疗策略具有重要意义,同时也为探索胆囊癌早期诊断及多分子联合靶向治疗提供了新的实验依据。
刘志强,孙岩[9]（2013）在《原发性胆囊癌的诊断及治疗进展》文中认为原发性胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤,其发生率在胆道系统中居首位,且发病隐蔽,发现时多属晚期,根治机会少,预后极差。原发性胆囊癌的确切病因目前尚不清楚,通过流行病学及临床研究资料的分析,对其发病的高危因素已基本达成共识[1]:胆囊结石病程大于5年;50岁以上的女性胆囊结石患者;超声提示胆囊壁有局限性增厚;胆囊颈部嵌顿结石;结石直径大于2.0 cm;胆囊萎缩或胆囊壁明显增厚;瓷器样胆囊;合并有胆囊息肉样病变;合并异常胆胰管连接;继往曾行胆囊造瘘术者。临床上如遇以上具有高危因素的患者,应采取积极的诊治措施,以期提高原发性胆囊癌的早期诊治率。
黄年开[10]（2013）在《原发性胆囊癌的治疗及预后影响因素分析》文中进行了进一步梳理目的探讨原发性胆囊癌的治疗以及影响预后的因素。方法回顾性分析41例原发性胆囊癌患者的临床资料。结果胆囊癌组影像学检查结果与对照组比较差异显着;随着患者Nevin分期的增加,中位生存时间缩短、1及3年生存率下降;经Logistic多因素回归分析,Nevin分期、淋巴结转移、肿瘤浸润程度是影响原发性胆囊癌患者预后的因素。结论对原发性胆囊癌应早发现、早诊断、早治疗,以根治性切除术为主的综合治疗。
二、原发性胆囊癌的早期诊断（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、原发性胆囊癌的早期诊断（论文提纲范文）
（1）磁共振成像与CT对原发性胆囊癌的早期诊断价值比较（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 CT扫描： |
| 1.2.2 MRI扫描： |
| 1.3 评价指标 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 所有患者手术病理学检查结果 |
| 2.2 CT及MRI诊断结果 |
| 2.3 病理学诊断结果与CT、MRI诊断结果比较 |
| 3 讨论 |
（2）胆囊癌的病例特征、早期诊断、治疗措施及预后研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 1 胆囊癌 |
| 2 胆囊癌治疗研究 |
| 3 胆囊癌诊断方法 |
| 4 胆囊癌预后研究 |
| 研究目的、方法 |
| 一、1145例胆囊癌患者的临床病例资料分析及预后列线图的建立与验证 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 研究方法 |
| 1.1.3 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 纳入资料的临床病例情况 |
| 1.2.2 训练集与验证集基线资料比较 |
| 1.2.3 训练集患者的Cox预后结果 |
| 1.2.4 预后列线图 |
| 1.2.5 列线图预测准确性的外部验证 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 影响胆囊癌患者DSS生存率的危险因素 |
| 1.3.2 列线图进行胆囊癌患者预后预测 |
| 1.3.3 列线图与TNM分期应用价值比较 |
| 1.3.4 局限性 |
| 1.4 小结 |
| 二、肿瘤标志物联合检测在胆囊癌诊断中的应用价值分析 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 研究方法 |
| 2.1.3 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 肿瘤标志物单独检测对胆囊癌的诊断价值 |
| 2.2.2 两种肿瘤标志物联合检测对胆囊癌的诊断价值 |
| 2.2.3 三种肿瘤标志物联合检测对胆囊癌的诊断价值 |
| 2.2.4 四种肿瘤标志物联合检测对胆囊癌的诊断价值 |
| 2.2.5 肿瘤标志物在胆囊癌诊断中的应用价值分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、不同手术方式对胆囊癌预后的影响 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 研究方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 手术治疗方式统计 |
| 3.2.2 胆囊切除术与根治术患者临床资料比较 |
| 3.2.3 不同手术方式对患者生存期的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 胆囊癌患者的手术治疗 |
| 3.3.2 不同手术方式临床资料差异分析 |
| 3.3.3 不同手术方式对患者预后影响 |
| 3.3.4 本研究的局限性 |
| 3.4 小结 |
| 四、188例意外胆囊癌的诊断与治疗 |
| 4.1 对象与方法 |
| 4.1.1 研究对象 |
| 4.1.2 研究方法 |
| 4.1.3 统计学方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 患者基本资料 |
| 4.2.2 患者临床表现 |
| 4.2.3 意外胆囊癌患者预后影响因素分析 |
| 4.2.4 患者预后分析 |
| 4.2.5 单纯胆囊切除与根治性切除 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 意外胆囊癌的诊断和鉴别 |
| 4.3.2 意外胆囊癌的手术治疗探讨 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 原发性胆囊癌流行病学特点及临床与基础研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）原发性胆囊癌外科诊治与预后分析（附93例临床报告）（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 临床资料及预后分析结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）原发性胆囊癌的CT、MRI诊断价值分析（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2检查方法 |
| 1.3 临床观察指标 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两种扫描方式诊断结果 |
| 2.2 诊断表现 |
| 3 讨论 |
（5）磁共振成像在原发性胆囊癌早期诊断中的应用价值探讨（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 原发性胆囊癌的影像表现 |
| 2.1.1 B超表现: |
| 2.1.2 MRI表现: |
| 2.2 对比两种影像诊断结果 |
| 3 讨论 |
（6）原发性胆囊癌的早期诊断进展（论文提纲范文）
| 1 胆囊癌的危险因素 |
| 1.1 胆囊炎和胆囊结石 |
| 1.2 胆道良性病变 |
| 1.3 特殊的工作环境和生活习惯 |
| 1.4 性别和年龄因素 |
| 1.5 其他危险因素 |
| 2 胆囊癌的影像学早期诊断进展 |
| 2.1 超声诊断 |
| 2.2 CT诊断 |
| 2.3 MRI诊断 |
| 3 胆囊癌的其他诊断手段 |
| 4 胆囊癌的早期诊断标记物 |
（7）原发性胆囊癌的早期诊断（论文提纲范文）
| 1 胆囊癌的高危因素 |
| 1.1 种族和性别 |
| 1.2 年龄 |
| 1.3 胆道结石和慢性感染 |
| 1.4 胆囊息肉 |
| 1.5 先天性胰胆管合流异常 |
| 2 高危人群筛查 |
| 3 辅助检查 |
| 3.1 B超检查 |
| 3.2 超声造影 |
| 3.3 CT检查 |
| 3.4 磁共振成像(MRI) |
| 3.5 正电子发射计算机断层扫描(PET-CT) |
| 3.6 腹腔镜探查 |
（8）Bmi-1调控人胆囊癌细胞增殖的效应及其WWOX信号通路的分子机制（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 技术路线 |
| 参考文献 |
| 第一部分：Bmi-1、WWOX、PUMA在人胆囊癌组织中的表达状态、相关性及临床意义研究 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 实验结果及分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分：靶向shRNA干扰Bmi-1表达对GBC-SD细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其调控WWOX通路的分子机制 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 实验结果及分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分：WWOX真核表达载体的构建及对人胆囊癌细胞生长的影响及其下游通路调控机制的研究 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 实验结果及分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分：靶向沉默Bmi-1表达对胆囊癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的研究 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 实验结果及分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 本课题的创新点 |
| 附录 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 博士研究生期间主要发表论文 |
| 博士研究生期间的主要研究课题 |
| 傅士研究生期间主要获奖情况 |
| 博士研究生期间主要学习经历 |
| 博士研究生期间主要学术活动 |
| 基金资助项目 |
| 致谢 |
| 查新咨询报告书 |
（10）原发性胆囊癌的治疗及预后影响因素分析（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 辅助检查 |
| 1.3 治疗方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 影像学检查结果 |
| 2.2 胆囊癌患者生存情况 |
| 2.3 单因素分析 |
| 2.4 影响因素统计学赋值 |
| 2.5 Logistic回归分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 原发性胆囊癌现状 |
| 3.2 原发性胆囊癌影像学特点 |
| 3.3 原发性胆囊癌的治疗 |
| 3.4 影像生存期的因素 |
四、原发性胆囊癌的早期诊断（论文参考文献）
- [1]磁共振成像与CT对原发性胆囊癌的早期诊断价值比较[J]. 臧秀娟,房欣,胡海彦,寇志伟. 实用医学影像杂志, 2021(03)
- [2]胆囊癌的病例特征、早期诊断、治疗措施及预后研究[D]. 常毅刚. 天津医科大学, 2020(06)
- [3]原发性胆囊癌外科诊治与预后分析（附93例临床报告）[D]. 田佳. 南京医科大学, 2018(01)
- [4]原发性胆囊癌的CT、MRI诊断价值分析[J]. 李国勤,刘礼健,白锡光,尹忠生,曾子娟,王明明. 现代诊断与治疗, 2017(07)
- [5]磁共振成像在原发性胆囊癌早期诊断中的应用价值探讨[J]. 陈静. 黑龙江医学, 2016(08)
- [6]原发性胆囊癌的早期诊断进展[J]. 彭腊么,彭所明,朱洪. 分子影像学杂志, 2015(02)
- [7]原发性胆囊癌的早期诊断[J]. 殷保兵. 上海医药, 2014(14)
- [8]Bmi-1调控人胆囊癌细胞增殖的效应及其WWOX信号通路的分子机制[D]. 魏东. 昆明医科大学, 2014(11)
- [9]原发性胆囊癌的诊断及治疗进展[J]. 刘志强,孙岩. 中国医师进修杂志, 2013(32)
- [10]原发性胆囊癌的治疗及预后影响因素分析[J]. 黄年开. 实用癌症杂志, 2013(05)