一、血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递（论文文献综述）
帅芝琴,陈家蒙,刘滔滔,胡安玲,李利生,余丽梅,徐尚福[1]（2022）在《干细胞及其来源外泌体防治血管再狭窄的研究现状与问题》文中进行了进一步梳理背景:血管再狭窄严重影响冠状动脉粥样硬化性心脏病介入治疗的远期疗效。干细胞的多向分化能力和分泌功能与再狭窄的发生发展和转归有密切关系,为血管再狭窄预防和治疗提供了新的思路,具有巨大的潜在优势。目的:对内皮祖细胞、间充质干细胞以及外泌体防治血管再狭窄的作用及机制作一综述。方法:检索CNKI和PubMed数据库,中文检索词为"干细胞""外泌体"和/或"再狭窄",英文检索词为"stem cell""exosomes"和/或"restenosis",筛选83篇文献进行分析总结。结果与结论:（1）再狭窄严重影响冠状动脉介入治疗的远期疗效,仍是临床上亟待解决的重要课题;（2）内皮祖细胞和间充质干细胞移植对血管再狭窄具有防治作用,其机制主要涉及直接分化修复血管内皮和旁分泌影响血管损伤微环境;（3）干细胞来源外泌体既可产生类似干细胞移植的作用,又可规避干细胞移植缺陷,在血管再狭窄防治中具有独特的潜在优势。
张悦,朱元正,SAEED Muhammad,吴安东,胡成钰,田小利[2]（2021）在《细胞衰老及通讯研究》文中研究表明细胞衰老是以不可逆转的细胞周期停滞为特征,是一个程序化且同时受环境因素影响的生理过程。大分子损伤与修复失衡,如DNA损伤和端粒功能障碍、原癌基因过度激活及其他外源刺激,可导致细胞衰老的发生。衰老细胞的特征之一是产生衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype,SASP）,并由此影响细胞间通讯,达到促进炎症反应、组织分化、创面愈合、抑制肿瘤及衰老细胞的清除等目的。本文以血管内皮细胞衰老为例,探讨SASP通过影响细胞通讯参与细胞损伤、修复,阐述其在心血管疾病中的作用,展望通过影响SASP干预衰老进程和衰老相关疾病发生的可能性。
杨乐[3]（2021）在《缝隙连接43参与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:迟发性脑缺血（DCI）是蛛网膜下腔出血（SAH）的后期并发症,常致多达30%的SAH患者预后不良或死亡。DCI被认为是由血管痉挛、脑血流（CBF）减少、微血管收缩及血栓形成等原因共同作用引起的,一直以来也都是学术研究的热点。为了更好地理解DCI的病理机制,动物实验方法已经提出了多种大鼠的SAH病理模型,但造模较高的致死率和操作难度也仍有改进的空间。另外,现已知有很多种方式能够进行细胞之间信息的传递,但缝隙连接通道（gap junction,GJ）作为介导相邻细胞间信息传递的方式是比较直接和快速的一种。其中,缝隙连接蛋白43（Cx43）是血管平滑肌中最丰富和主要的GJ蛋白亚型。所以,我们猜想Cx43参与了SAH后脑血管痉挛（CVS）和随后DCI的发生。然而,Cx43的具体作用和功能调控仍不清楚。近年来的研究中酶蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）一直被认为广泛参与着诸多重要细胞功能的维持,其中就包括了平滑肌的收缩功能,而CVS的发展过程主要依赖于PKC的激活。至此,本研究的目的是着重探讨Cx43在CVS发生发展中的重要性,并确定Cx43的改变是否通过PKC信号的转导途径进行调控。材料与方法:在本研究中,我们描述了一种简单有效的SAH大鼠模型。该改良模型有着诸多优点,其中包括切口小、手术并发症少及死亡率低等。在SAH模型诱导后的第7天,我们对基底动脉（BA）的直径和管腔横截面积（CSA）进行计算,并采用活体荧光显微镜和磁共振灌注加权成像（MRPWI）的方法评估DCI的发生,其中以正常组和假手术组作为实验对照。同时,我们对Cx43在体外和体内CVS模型中发生的时相变化进行了研究,并在体外实验中采用单细胞注射荧光染料的方法观察细胞间通讯功能（gap junction intercellular communication,GJIC）的变化情况。此外,我们还使用PKC广谱抑制剂（chelerythrine和GF 109203X）以及Cx43siRNA对CVS的体外及体内模型诱导Cx43的下调干预,从而进一步探究Cx43在该疾病发生发展中的作用。结果:我们成功构建了SAH的枕大池双次注血模型。该模型与假手术组相比,SAH组BA的直径和CSA指标值明显降低,CBF在SAH组的评估结果也下降到假手术组约一半的水平。此外,在SAH后第7天,采用灌注加权成像（PWI）和活体荧光显微镜也能明显观察到延迟性脑缺血（DCI）的发生,即微动脉收缩的数量比例和严重程度均显着增加。由此可见活体SAH模型构建成功。接下来我们还建立了氧合血红蛋白（Oxy Hb）诱导的体外CVS模型,即Oxy Hb(10-6M)能够诱导平滑肌细胞的收缩,且收缩的程度随着孵育时间的增加逐渐加剧,且在48h的时间点达到高峰。而在继续孵育后72h的时间点,细胞的平均长度开始逐渐恢复到正常的水平,并在92h小时的时间点基本与正常组持平。与此同时,我们发现在Oxy Hb预孵育开始后的不同时间节点,Cx43蛋白的表达量开始逐渐增加,并也在48h达到最大值。而随后的72h以及96h的时候蛋白水平也逐渐恢复到正常对照组的水平。Cx43蛋白变化的时相特点与SMC形态长度变化的结果一致。当加入PKC通路的广谱抑制剂后,单独暴露于CHE或GF的SMC中Cx43蛋白的表达水平相较于正常细胞并未受到太大影响,但SMC细胞在经过CHE或GF的预孵育后,Oxy Hb刺激SMC在48h时间点达到的Cx43蛋白峰值水平却明显降低。在荧光黄染料传输实验中,我们发现在正常情况下每个细胞的染料传输范围平均可偶联到9.88±2.59个细胞。而当Oxy Hb孵育SMC细胞的48h后,每个目的细胞的偶联细胞数显着增加到18.5±3.12个。相较于单纯Oxy Hb孵育组,当Oxy Hb分别与2种PKC抑制剂（CHE/GF）一同预孵育时单细胞的染料传输能力出现显着下降,程度达20%以上（分别为14.13±2.70和13.88±2.42,P<0.05）。然而与正常组相比,细胞仅孵育CHE或GF并不能影响荧光黄在细胞间的迁移能力。该结果与Cx43蛋白表达的结果一致,提示Cx43影响GJIC功能的机制很可能与PKC通路有关。在SAH的活体模型中,我们发现Cx43的表达在SAH后第1天开始显着升高,并在第7天持续升高至最高值。而在SAH诱导后第14天,Cx43的表达水平逐渐下降回归正常水平,并与假手术组无明显差异。结合BA的免疫组织荧光化学结果,我们能够明显观察到BA有着丰富的Cx43亮斑信号,并且主要集中于内弹力层外侧的SMC细胞层,而内皮层的Cx43表达信号较弱。与假手术组相比,SAH组BA中Cx43蛋白的免疫荧光强度在造模后的1-5天内逐渐增强,并也在第7天达到高峰。另外,用Cx43 siRNA或PKC抑制剂预处理后,Cx43的高表达被显着逆转,同时DCI相关的并发症也得到明显缓解。这些数据为Cx43在CVS的发展中发挥重要作用提供了强有力的证据,并表明SAH体内模型Cx43的高表达现象可能是由PKC途径介导的。结论:为了更好地研究蛛网膜下腔出血后的脑血管痉挛及其所致的并发症,我们成功构建了简易且有效的枕大池双注血模型,该造模方法手术创口小、动物存活率高且操作时间短,为迟发性脑缺血的研究提供了更好的模型基础。除了体内实验的造模,我们在体外实验中也成功建立了基于大鼠基底动脉平滑肌细胞的脑血管痉挛模型。在体内及体外实验中,Cx43的蛋白表达水平和脑血管痉挛发展的时相关联性也得到了充分的佐证。在脑血管痉挛最严重的时期,脑血管平滑肌Cx43的表达量也达到了高峰。此外我们通过在活体动物模型中建立Cx43siRNA的干预实验组对Cx43的表达特异性敲低,进一步地证明了当Cx43表达上升被阻遏后,动物大脑微循环的痉挛和脑血流量降低的现象也将受到逆转。由此可见在蛛网膜下腔出血及随后并发症的发生发展过程中,Cx43的高表达发挥着非常重要的作用。本研究同时还在体内及体外实验中,通过加入两种PKC通路的广谱抑制剂干预SAH模型,证明了蛛网膜下腔出血后平滑肌细胞Cx43的高表达及随后发生的迟发性脑缺血现象很可能是通过PKC通路介导的。而这也将蛛网膜下腔出血及并发症的治疗提供了新的研究思路和治疗方向。
陈芳芳[4]（2021）在《脂肪细胞来源外泌体在糖尿病动脉粥样硬化疾病中的作用及机制研究》文中研究说明研究背景糖尿病是21世纪全球最严重的公共卫生问题之一,我国已成为糖尿病患者总数最多的国家。与未患糖尿病的成年人相比,大约75%的2型糖尿病患者死于心血管并发症。研究表明,冠心病合并2型糖尿病患者的冠状动脉受累程度高且弥漫病变较多、狭窄程度较重,临床治疗困难明显增加。经皮冠状动脉介入治疗（Percutaneous coronary interventions,PCI）是目前用于治疗冠心病合并糖尿病的有效手段。但是在PCI日臻完善的今天,糖尿病一直是PCI术中并发症和术后近、远期预后不良的独立危险因素。糖尿病患者PCI术后支架内再狭窄发生率显着升高,是严重影响患者预后的主要因素。支架内再狭窄（Int-stentrestenosis,ISR）是涉及多种机制的复杂疾病过程,是恶化2型糖尿病心血管并发症患者预后的核心问题。现有观点认为以平滑肌细胞增殖为核心的血管内膜增生是支架内再狭窄的主要病理过程和关键环节。以此为靶点开发的雷帕霉素、紫杉醇药物洗脱支架可在一定程度上降低支架内再狭窄的发生率,但存在“晚期追赶现象”,且晚期支架内再狭窄发生率仍高达10%。由此推测平滑肌细胞增殖可能只是血管内膜增生的主要中间过程而非启动因素,而糖尿病导致PCI术后支架内再狭窄发生率显着增高的关键机制也尚未阐明。因此,探索糖尿病条件下血管内膜增生的启动环节,寻找以此为靶点的干预方法,才能从源头上阻断支架内再狭窄的发生发展。对于血管结构而言,内皮细胞作为管壁组织与血液中各种病理性刺激的天然屏障,是保护平滑肌细胞免受刺激因素干扰的关键,在血管内膜增生过程中可能是先于平滑肌细胞发挥作用的核心角色。支架的植入过程中存在内皮细胞受损,内皮细胞损伤是启动动脉粥样硬化的关键步骤。围手术期药物的规范应用已在最大程度上保护了内皮细胞的完整性,而平滑肌细胞仍能不断受到刺激而增殖。近期关于内皮细胞在刺激因素下向间质细胞转变即内皮间质转化（Endothelial-Mesenchymal Transition,EndMT）的研究给了我们一定的启示。EndMT 是指在某些特定的生理或病理条件下,内皮细胞失去其自身特异性抗原,而获得间质细胞抗原,同时其生物学特性明显改变,获得较强的增殖、迁移、收缩能力。EndMT在冠状动脉和肺动脉的发育过程中可使内皮细胞向平滑肌细胞进行转化,对心血管系统的正常发育有至关重要的作用。EndMT参与了诸多与血管内膜增生相关疾病的发生过程,促进动脉粥样硬化,但未涉及PCI术后再狭窄防治的研究。因此,EndMT可能是支架内再狭窄发生的关键步骤。近来研究证实,多种外界刺激因素在内皮细胞发生EndMT中起重要作用,包括高糖、炎症、低氧、脂代谢异常、氧化应激、机械牵张力、吸烟等,但是糖尿病、动脉粥样硬化及支架内再狭窄的发病机制复杂,涉及上述多种机制的协同作用。外泌体（Exosomes）能够携带大量蛋白质、核酸及脂质成分,整合来源细胞的有效刺激信息,有效实现信号的级联放大和远距离传输。Exosomes所携带、传递的信息成分多与其来源细胞/组织密切相关。糖尿病状态下,脂肪细胞来源外泌体（Adipocyte-derived exosomes,AdExos）含有脂肪组织炎症及胰岛素抵抗的相关蛋白及核酸成分,能够通过作用于靶细胞诱发多种生物学功能,可能是链接胰岛素抵抗的脂肪组织与糖尿病动脉血管之间的重要桥梁,是整合机体多种刺激因素,诱发EndMT的关键载体。Sonic hedgehog（Shh）作为Hedgehog蛋白三种同源形式之一,表达最广泛,活性最高,是参与胚胎发育的关键蛋白。在肿瘤领域的研究发现,Shh具有激活Snail信号通路促进上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用,而EndMT是EMT的一种特殊类型。进一步研究证实,Snail信号通路亦是调节EndMT形成的关键信号通路。综上,我们提出研究假说:糖尿病状态下,携带Shh的AdExos增多,被内皮细胞摄取,AdExos通过其表面携带的Shh激活Snail依赖的EndMT过程,导致内皮细胞发生表型转换,逐渐向间质细胞转化,促进血管内膜增生,最终导致支架内再狭窄的发生。鉴于以上假说,我们将进行体内及体外实验,在整体和细胞水平研究脂肪细胞来源外泌体在血管再狭窄中的作用及具体机制。研究目的1.在整体动物水平证实AdExos通过其携带的Shh促进内皮间质转化,加剧血管内膜增生,进而影响糖尿病血管再狭窄的发生;2.从细胞水平探索AdExos促内皮间质转化的特性,验证AdExos通过其携带的Shh激活内皮细胞Snail信号通路并促进EndMT,为2型糖尿病PCI术后支架内再狭窄防治提供新的靶点。研究方法1.培养、诱导分化3T3-L1前脂肪细胞并建立胰岛素抵抗模型首先,我们通过胰岛素、3-异丁基-1-甲基,黄嘌呤与地塞米松联合诱导的方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,再通过高糖联合高胰岛素的方法建立胰岛素抵抗的脂肪细胞模型,采用无exosomes血清培养并收集细胞上清,获取对照组（Control,Ctrl）及胰岛素抵抗组（Insulin resistance,IR）脂肪细胞上清。2.Shh腺病毒转染3T3-L1脂肪细胞在建立胰岛素抵抗模型的基础上,我们再将Shh干扰及过表达的腺病毒转染入成熟脂肪细胞中,采用无exosomes血清培养后,收集细胞上清,获取胰岛素抵抗组、Shh干扰的胰岛素抵抗组、Shh过表达的胰岛素抵抗组及空载体胰岛素抵抗组的脂肪细胞上清。3.AdExos的分离提取及特征鉴定将前文中获得的多种脂肪细胞上清通过超速差速离心法,分离提取上清中的外泌体,由此获得对照组外泌体（Ctrl-AdExos）、胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExos）、Shh干扰的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh-）、Shh过表达的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh+）及空载体胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosvector）;再采用透射电镜、动态光散射粒度仪、流式细胞仪及Western blot等方法进行AdExos的特征鉴定。4.2型糖尿病血管再狭窄ApoE-/-小鼠模型的构建4周龄的雄性ApoE-/-小鼠,适应性喂养1周后,禁食处理12～14小时,进行腹腔糖耐量试验（Intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT）后随机分为高脂饮食组和普通饮食组,高脂饮食组予以高脂饲料喂养,普通饮食组予以普通生长繁殖饲料喂养;6周后再次进行IPGTT试验,出现胰岛素抵抗的高脂饮食组小鼠给予一次性腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）（剂量标准为75mg/kg）,普通饮食组小鼠给予同等剂量的枸橼酸钠缓冲液进行腹腔注射;继续以原饲料喂养2周后,再次进行IPGTT试验和随机血糖检测,如果小鼠的随机血糖水平≥11.1mmol/L,且有多饮、多尿、多食等现象,则纳入2型糖尿病组。对2型糖尿病组小鼠和对照组小鼠通过植入股动脉袖套的方法构建血管再狭窄模型。分别给予生理盐水、IR-AdExos及IR-AdExosshh-经尾静脉注射,最后得到动物分组分别为普通饮食再狭窄组（Chow）、普通饮食+IR-AdExos再狭窄组（Chow+IR-AdExos）、普通饮食+IR-AdExosshh-再狭窄组（Chow+IR-AdExosshh）、糖尿病再狭窄组（DM）、糖尿病+IR-AdExos再狭窄组（DM+IR-AdExos）及糖尿病+IR-AdExosshh-再狭窄组（DM+IR-AdExosshh-）。5.小鼠体内血管对AdExos的摄取为了验证小鼠血管能够摄取AdExos,我们采用PKH26染料标记AdExos,经尾静脉注射入再狭窄模型小鼠,制作血管标本切片,通过免疫荧光染色观察AdExos在体内的摄取情况。6.病理组织学染色观察血管再狭窄情况对股动脉再狭窄部位组织标本切片进行Hematoxylin-eosin staining（HE）染色、Verhoeffs Van Gieson弹性纤维染色及免疫组化染色,观察血管再狭窄情况。7.免疫荧光染色检测再狭窄部位EndMT发生情况通过进行 CD31 和 SM22α、CD31 和 Vimentin、Ve-Cadherin 和 SM22α、Ve-Cadherin和Vimentin免疫荧光共定位染色的方法检测血管再狭窄部位EndMT的发生情况。8.分离提取小鼠主动脉内皮细胞,验证内皮细胞对AdExos的摄取为了进一步研究AdExos对内皮细胞发生内皮间质转化的影响,我们进行了体外细胞实验,通过酶消法提取小鼠主动脉内皮细胞,给予PKH26标记的AdExos,采用鬼笔环肽标记细胞骨架蛋白,显微镜下观察内皮细胞对AdExos的摄取。9.AdExos刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,检测细胞中EndMT发生情况再将所获取的Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及TGF-β、SHH重组蛋白用以刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,通过免疫荧光染色及Western blot的方法评价内皮标记物和间质标记物的表达变化及EndMT的发生情况。10.Western blot 检测分子机制方面,取AdExos及重组蛋白刺激孵育后的小鼠主动脉内皮细胞,提取蛋白质,采用Western blot方法检测Shh、内皮细胞及间质细胞标记物的表达及信号通路分子的表达情况。研究结果1.建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型3T3-L1前脂肪细胞诱导分化至成熟脂肪细胞后,细胞质内出现较多、较大的脂滴;高糖高胰岛素条件培养成熟脂肪细胞24h后,脂肪细胞总蛋白中总IRS1表达量显着减少,磷酸化Ser307位点的IRS1表达量显着增高,Akt的磷酸化水平降低;脂肪细胞细胞膜蛋白Glut4表达减少而细胞浆蛋白Glut4表达增加,提示胰岛素抵抗状态下Glut4细胞膜转位减少;胰岛素抵抗状态下,脂肪细胞脂质沉积增多。上述结果表明我们成功建立了 3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型。2.AdExos的分离提取及特征鉴定透射电镜观察下发现AdExos呈膜包被的囊泡状,直径在30～100nm范围内;动态光散射粒度仪结果表明AdExos直径范围分布于30～100nm;Western blot及流式细胞学结果表明AdExos阳性表达CD63、TSG101及CD81,而不表达GRP94和Calnexin。3.构建2型糖尿病血管再狭窄ApoE-/-小鼠模型ApoE-/-小鼠通过高脂饮食饲养联合链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）一次性注射的方法构建2型糖尿病模型,糖尿病小鼠随机血糖≥11.1 mmol/L,且有多饮、多尿、多食等现象。在此模型的基础上,通过股动脉袖套植入的方式构建再狭窄模型。4.糖尿病脂肪组织来源外泌体富集Shh分子通过Western blot方法检测对照组和糖尿病组小鼠脂肪组织来源外泌体蛋白中Shh分子的表达情况,结果表明糖尿病组小鼠脂肪组织来源外泌体中Shh含量显着高于对照组,证明糖尿病脂肪组织来源外泌体富集Shh分子。5.小鼠体内血管对AdExos的摄取在免疫荧光显微镜下进行观察,发现PKH26标记的AdExos呈红色荧光,分布于小鼠血管范围内,证明小鼠血管能够成功摄取AdExos。6.IR-AdExos通过携带的Shh分子促进血管再狭窄高分辨率显微超声技术检测股动脉收缩期最大流速（Peak systolic velocity,PSV）,HE染色分析血管再狭窄,综合二者结果确定血管再狭窄情况。结果表明,糖尿病组小鼠股动脉再狭窄情况与普通饮食组相比明显加重;与普通饮食组或糖尿病组相比,普通饮食+IR-AdExos组或糖尿病+IR-AdExos组的再狭窄情况进一步加重;而Shh蛋白敲减后的IR-AdExos,其促血管再狭窄的能力有所下降,即普通饮食+IR-AdExosshh-组小鼠股动脉再狭窄较普通饮食+IR-AdExos组小鼠更轻,糖尿病+IR-AdExosshh-组小鼠股动脉再狭窄程度比糖尿病+IR-AdExos组小鼠更轻。7.IR-AdExos通过携带的Shh分子促进股动脉再狭窄部位EndMT的发生通过免疫荧光共定位的方法检测血管再狭窄部位发生EndMT的情况,免疫荧光共定位时,如果内皮细胞同时表达内皮细胞特征性标志物（CD31、Ve-Cadherin）和间充质细胞特征性标志物（SM22α、Vimentin）则记为发生内皮细间质转化的细胞。结果表明糖尿病状态下,内皮细胞标志物减少,间质细胞标志物增加,提示发生EndMT;尾静脉注射IR-AdExos能够进一步促进EndMT的发生,而敲减Shh的IR-AdExos其促EndMT作用减弱,证明IR-AdExos表面的Shh分子是IR-AdExos发挥促EndMT作用的主要分子靶点。8.成功提取原代小鼠主动脉内皮细胞,小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos我们采用酶消法成功提取小鼠主动脉内皮细胞,经免疫荧光染色证明所提取的内皮细胞阳性表达内皮细胞标记物CD31,证明小鼠主动脉内皮细胞提取成功。将PKH26标记的AdExos与小鼠主动脉内皮细胞共同孵育,显微镜下观察可见细胞浆内有红色荧光,即为被小鼠主动脉内皮细胞摄取的AdExos,证明小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos。9.AdExos促进内皮细胞发生EndMT将 Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及TGF-β、SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞后,通过免疫荧光共定位的方法检测内皮细胞EndMT的发生。免疫荧光共定位时,如果内皮细胞同时表达内皮细胞特征性标志物（CD31、Ve-Cadherin）和间充质细胞特征性标志物（α-SMA、FAP、FSP-1）则记为发生内皮细间质转化的细胞。与Ctrl组相比,IR-AdExos组内皮细胞发生EndMT增多;与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组发生EndMT的内皮细胞数量并无显着增加,而IR-AdExosshh+组中发生EndMT的内皮细胞数量进一步增加;TGF-β作为阳性对照,在其刺激下,发生EndMT的内皮细胞数量显着增加;SHH重组蛋白刺激组中,发生EndMT的内皮细胞数量也有显着增加。上述结果表明,IR-AdExos能够促进内皮细胞发生EndMT,且该作用是经由其携带的Shh分子发挥的。另,TGF-β及SHH也具有促进内皮细胞发生EndMT的作用。10.IR-AdExos促进血管再狭窄EndMT的分子机制与Ctrl组相比,IR-AdExos组内皮细胞中Snail和Slug表达显着升高。证明IR-AdExos的促EndMT作用是通过其表面的Shh作用于下游的Snail和Slug分子发挥作用。研究结论1.胰岛素抵抗条件下,脂肪细胞中脂质含量增多,脂肪细胞来源外泌体富集Shh分子;2.IR-AdExos能够通过携带的Shh分子,经由Shh/Snail/Slug信号通路促进小鼠主动脉内皮细胞发生EndMT;3.富集Shh的IR-AdExos能够明显促进血管内皮细胞发生间质转化,进而加剧糖尿病小鼠血管再狭窄的发生,可能是糖尿病脂肪组织促进血管再狭窄的重要机制之一,IR-AdExos有望成为进一步防治糖尿病ISR的新靶点。研究背景糖尿病已成为21世纪威胁人类生命健康的重大慢性疾病之一。近年来,我国糖尿病患病率增长迅速,中国已成为全球糖尿病患者总数最多的国家。心血管疾病是糖尿病患者的主要死亡原因。粥样斑块破裂导致的急性冠脉综合征是糖尿病患者心血管事件的主要原因。但是糖尿病患者冠状动脉病变严重、易损斑块发生率高的机制尚未完全阐明。循证医学证据表明,积极控制血糖可以降低糖尿病患者微血管病变的发生率,但强化降糖治疗能否降低2型糖尿病患者心血管事件的发生率尚未得到证实。这提示血糖和胰岛素水平仅能反映代谢水平,而不是糖尿病患者冠状动脉病变严重、易损斑块发生率高的根本原因。因此,亟需深入探讨糖尿病患者大血管并发症增加的深层次机制。既往研究发现动脉粥样硬化斑块内常出现病理性新生血管,且在易损斑块和斑块易损部位尤为明显,与斑块稳定性密切相关。病理性新生血管是动脉粥样硬化易损斑块形成的关键环节。越来越多的证据表明,动脉损伤部位病理性新生血管形成与粥样硬化斑块引起的急性冠脉综合症有关,这些斑块脆性较大且易发生破裂,进而导致血管阻塞。除了斑块内出血机制以外,病理性新生血管还通过白细胞征募来促进动脉粥样硬化斑块的不稳定性。2型糖尿病和动脉粥样硬化同属慢性炎症性疾病,在2型糖尿病状态下,脂质在脂肪细胞中不断存储,随着脂肪细胞逐渐增大,导致脂肪细胞功能失调,脂肪因子分泌紊乱,大量促炎因子合成释放,引发全身代谢性炎症反应、胰岛素抵抗,从而加速斑块进展,促进易损斑块的形成。此外,有研究发现,脂肪细胞能够分泌内皮特异性丝裂原和促血管生长因子,参与新生血管的形成。但功能失调的脂肪组织如何促进斑块内新生血管的形成,从而促进斑块发生发展的确切机制至今尚未见报道。近期,有学者认为外泌体（Exosomes）是脂肪组织与血管间信息传递的重要载体。Exosomes是由多种细胞（如血小板、内皮细胞、单核细胞等）产生的,携带大量与其细胞/组织来源和功能密切相关的蛋白质、核酸和脂质成分。可实现信号的级联放大和远距离传输。在人体内所有exosomes中,脂肪细胞来源的exosomes（Adipocyte-derived exosomes,AdExos）与糖尿病动脉粥样硬化的发生发展及新生血管形成的关系日益引起人们的关注。Hulsmans等认为,AdExos是将脂肪组织产生的炎症及氧化应激信息传递到血管的重要使者,从而引起内皮损伤、诱发动脉粥样硬化。但是,AdExos对于斑块稳定性变化及斑块内病理性新生血管的形成有无影响尚未见报道。研究发现AdExos富含纤粘连蛋白、层粘连蛋白,有利于循环中的AdExos粘附、迁移、浸润于内皮细胞。糖尿病慢性低度炎症状态下,受损的内皮细胞通透性增加且炎症因子（IL-6、IL-8）、趋化因子（MCP-1）、粘附因子（VCAM-1、E-selectin）表达上调,为循环中的AdExos粘附、浸润创造了良好的条件。此外,AdExos携带丰富的促血管生成miRNA,如miR221、miR27b、miR21、miR17～92等。脂肪组织作为内分泌器官,是多器官间相互联系的纽带。Hedgehog 蛋白在哺乳动物中有 Sonichedgehog（Shh）、Indianhedgehog（Ihh）及Desert hedgehog（Dhh）三种同源形式,其中Shh表达最广泛,活性最高。Hedgehog在斑马鱼胚胎发育中通过VEGF促进主动脉生成。Shh缺失的小鼠发育中的肺缺乏正常血管化的能力。Hedgehog信号可通过控制众多促血管生成因子包括VEGF-a,VEGF-b,VEGF-c及AngII的表达而调控新生血管的生成。Hedgehog蛋白促血管生成功能的发挥是通过连接到一种12次跨膜受体蛋白--Patched实现的。在正常情况下,Patched受体与另一种7次跨膜受体蛋白——Smoothened（Smo）相结合且抑制Smo的作用。当Hedgehog蛋白与Patched受体结合后,解除了对Smo的抑制作用,进而启动信号转导。Smo是Hedgehog信号通路的信息转换器,把细胞外的Hedgehog蛋白信号向细胞内传递,激活胶质瘤相关原癌基因（Glioma-associated oncogene homolog,Gli）转录因子。综上所述,我们提出了如下假说:糖尿病状态下,功能失调的脂肪组织释放入循环血液中的AdExos数量增多,其通过其表面的Hedgehog蛋白与内皮细胞上的Patched受体结合,促进病理性新生血管的形成,加速斑块进展及易损斑块的形成。研究目的1.从细胞水平分析AdExos促血管生成的特性;2.体外验证AdExos是否通过启动Hedgehog信号通路,促进新生血管的形成。研究方法1.培养、诱导分化3T3-L1前脂肪细胞并建立胰岛素抵抗模型通过胰岛素、3-异丁基-1-甲基-黄嘌呤与地塞米松联合诱导的方法将3T3-LI前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞。再通过高糖+高胰岛素的方法建立胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。采用无exosomes血清培养并收集细胞上清,获取对照组（Control,Ctrl）及胰岛素抵抗组（Insulin resistance,IR）脂肪细胞上清。2.Shh腺病毒转染3T3-L1脂肪细胞在建立胰岛素抵抗模型的基础上,我们再将Shh干扰及过表达的腺病毒转染入成熟脂肪细胞中,采用无exosomes血清培养后,收集细胞上清,获取胰岛素抵抗组、Shh干扰的胰岛素抵抗组、Shh过表达的胰岛素抵抗组及空载体胰岛素抵抗组的脂肪细胞上清。3.AdExos的分离提取将前文中获得的多种脂肪细胞上清通过超速差速离心法,分离提取上清中的外泌体,由此获得对照组外泌体（Ctrl-AdExos）、胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExos）、Shh干扰的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh-）、Shh过表达的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh+）及空载体胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosvector）。4.分离提取小鼠主动脉内皮细胞,验证内皮细胞对AdExos的摄取为了进一步研究AdExos对内皮细胞血管新生能力的影响,我们进行了体外细胞实验,通过酶消法提取小鼠主动脉内皮细胞,给予PKH26标记的AdExos,显微镜下观察内皮细胞对AdExos的摄取。5.AdExos刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,检测内皮细胞功能的改变将所获取的 Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白用以刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,通过PCNA/KI67免疫荧光染色检测内皮细胞增殖功能,通过细胞划痕实验检测迁移功能。6.小管形成实验检测AdExos促血管新生的特性将 Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白用以刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,通过小管形成实验观察小管形成的数量及分支长度,评价AdExos的促血管新生的能力。7.Hedgehog信号通路在AdExos促血管新生中的作用分子机制方面,给予Hedgehog蛋白阻断剂——环巴胺阻断Hedgehog信号通路,通过小管形成实验观察小管形成的数量及分支长度,检测内皮细胞的小管形成功能。给予Hedgehog蛋白阻断剂——环巴胺和Gli抑制剂——Gant61刺激孵育,提取小鼠主动脉内皮细胞的蛋白质,通过Western blot方法检测信号通路分子的表达情况。研究结果1.成功提取原代小鼠主动脉内皮细胞,小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos我们采用酶消法成功提取小鼠主动脉内皮细胞,经免疫荧光染色证明所提取的内皮细胞阳性表达内皮细胞标记物CD31,证明小鼠主动脉内皮细胞提取成功。将PKH26标记的AdExos与小鼠主动脉内皮细胞共同孵育,显微镜下观察可见细胞浆内有红色荧光,即为被小鼠主动脉内皮细胞摄取的AdExos,证明小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos。2.IR-AdExos改变小鼠主动脉内皮细胞的增殖和迁移功能用Ctrl-AdExos、IR-AdExos、VEGF及SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。首先进行PCNA和KI67免疫荧光染色,结果显示:与对照组相比,Ctrl-AdExos刺激组的PCNA和KI67的表达量有所增加,IR-AdExos刺激组的PCNA和KI67的表达量显着增加,以VEGF作为促血管新生的阳性对照用以刺激内皮细胞,结果发现,与对照组相比,VEGF刺激组中内皮细胞的PCNA及KI67表达量均显着增加。表明IR-AdExos、VEGF能够显着增强内皮细胞的增殖功能。细胞划痕实验结果显示:与对照组相比,Ctrl-AdExos刺激组的细胞迁移率有增加,IR-AdExos细胞迁移率显着增加,VEGF刺激组细胞迁移率明显增加。表明IR-AdExos、VEGF能够显着增强内皮细胞的迁移功能。3.AdExos促进小鼠主动脉内皮细胞的小管形成功能用Ctrl-AdExos、IR-AdExos、VEGF及SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。进行小管形成实验,结果发现:与对照组相比,Ctrl-AdExos刺激组细胞小管形成数量、分支长度增加,IR-AdExos刺激组细胞小管形成数量、分支长度显着增加,VEGF阳性对照组内皮细胞小管形成数量、分支长度显着增加。表明IR-AdExos、VEGF能够明显增强内皮细胞的小管形成功能。4.Shh基因干预的IR-AdExos影响小鼠主动脉内皮细胞的增殖和迁移功能用 IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector 等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。进行PCNA和KI67免疫荧光染色,结果显示:与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组中内皮细胞PCNA、KI67的表达量有所降低,IR-AdExosshh+组内皮细胞中PCNA、KI67的表达量显着增加。表明Shh是IR-AdExos促进内皮细胞增殖功能的重要分子。细胞划痕实验结果显示:与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组中细胞迁移率降低,IR-AdExosshh+组内皮细胞细胞迁移率显着增加。表明Shh是IR-AdExos促进内皮细胞迁移功能的重要分子。5.Shh基因干预的IR-AdExos影响小鼠主动脉内皮细胞的小管形成功能用 IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector 等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。进行小管形成实验,结果显示:与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组中内皮细胞小管形成数量、分支长度降低,IR-AdExosshh+组内皮细胞小管形成数量、分支长度显着增加。表明Shh是IR-AdExos促进内皮细胞血管新生的重要分子。6.Hedgehog信号通路在AdExos促血管新生中的作用给予 Hedgehog 抑制剂环巴胺和 IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos以及VEGF重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞和人脐静脉内皮细胞,检测内皮细胞小管形成功能,结果表明IR-AdExos+环巴胺组的小管形成数量、分支长度显着降低,证明Hedgehog是AdExos促血管新生的关键分子。7.AdExos促血管新生信号通路分子的表达情况给予Hedgehog抑制剂环巴胺、Gli抑制剂Gant61及IR-AdExosshh+刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞和人脐静脉内皮细胞。Western blot结果显示:IR-AdExosshh+刺激条件下,小鼠主动脉内皮细胞中Gli表达量显着升高;给予环巴胺和Gant61（Gli抑制剂）后,Gli表达量显着降低,证明AdExos通过Patched/Gli信号通路促进血管新生。研究结论1.IR-AdExos能够增强小鼠主动脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成功能,促进血管新生;2.Shh是IR-AdExos促进内皮细胞功能改变的关键分子;3.IR-AdExos通过Patched/Gli信号通路促进血管新生。
王硕[5]（2021）在《心房颤动患者血浆外泌体miR-107对人血管内皮细胞的影响及其机制的研究》文中进行了进一步梳理目的:心房颤动是临床上常见的心律失常,尤其是老年人,严重影响人们的健康和生活。外泌体是由各种细胞分泌的一种脂质双层封闭的细胞外小囊泡,它被体内的多种类型的细胞分泌排出细胞进入体液,均可携带具有功能活性的囊泡内容物进行细胞间的生物信号传递,在机体生理和病理过程中都发挥着重要作用。外泌体参与了机体各种复杂的生物学效应,如调控细胞的分化、增殖、衰老、凋亡等。在心血管系统,外泌体参与了心肌细胞的存活、心室重构、血管新生等过程。外泌体miRNA在多种心血管疾病中发挥重要作用。本研究旨在体外研究持续性房颤患者来源的外泌体miRNA对人血管内皮细胞的影响。本研究从持续性心房颤动患者和健康人群的血浆中分离出外泌体,q-PCR检测外泌体中miR-103a-3p、miR-320d和miR-107的表达水平。探讨筛选的外泌体miRNA对人血管内皮细胞的影响及其相关机制,将有助于揭示心房颤动新的治疗靶点。方法:选取2019.4-2019.6就诊于石家庄市人民医院心内科并住院的非瓣膜病持续性心房颤动患者（n=5）以及同一时期健康查体的人群（n=3）,抽取晨起空腹静脉血标本。首先进行外泌体的分离和鉴定房颤患者和健康对照组的血标本,离心提取血浆,对血浆采用超速离心法去除细胞及细胞碎片后使用PBS洗涤以获取外泌体混悬液;通过以下方法鉴定所分离粒子是否符合外泌体特征:采用透射电子显微镜（TEM,JEOL LTD,Peabody,MA,USA）和Nano Sight NS300粒度分析仪（NTA,Malvern Pan alytical,Malvern,UK）来观察外泌体的形态及测量外泌体的粒度分布。采用Western blot检测外泌体的特异性标记物（CD81、CD9和CD63）。然后比较窦性心律外泌体和AF来源的外泌体之间miR-103a-3p、miR-320d和miR-107的表达水平。结果:我们发现miR-107在AF来源的外泌体中显着上调,并被选中进行后续实验。双荧光素酶报告基因检测显示USP14是miR-107的下游靶点。PKH67染色表明,共培养24小时和48小时后,外泌体可被HUV ECs吸收。随后,用过表达miR-107模拟物转染HUVECs及用AF衍生的外泌体处理HUVECs。可见,过表达外泌体miR-107抑制HUVECs细胞活力和迁移,促进细胞凋亡,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。最后,RT-q PCR结果显示外泌体miR-107过表达下调了Bcl2的表达,而上调了ERK2、FAK和Bax的表达。结论:Af来源的外泌体可能将miR-107传递给HUVECs,而外泌体miR-107可能通过介导miR-107/USP14通路调控细胞活力、迁移、凋亡和周期。外泌体miR-107的过表达可能通过调控ERK2、FAK、Bcl2和Bax的表达来影响HUVECs的生长。这些发现将为miR-107作为治疗Af的潜在靶点,以及miR-107/USP14通路作为Af的潜在治疗方法提供新的认识。
徐香山[6]（2021）在《低剪切力通过内皮细胞来源的外泌体miR-181b调控平滑肌细胞焦亡的实验研究》文中提出背景:冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞,造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病,简称为“冠心病”。近年来,药物治疗、介入治疗和外科手术极大的改善了冠心病病人的预后,但是仍有许多冠心病病人的预后不佳。此外,心血管疾病的患者对治疗的反应差异比较大,存在较大的个体差异性。因此深入了解这种疾病的分子机制,对于更加精准的诊断和治疗冠心病是非常重要的。冠状动脉血管管壁是由多种细胞组成的,其中内皮细胞和平滑肌细胞是动脉血管管壁中最重要的细胞成分,这些细胞的自身状态以及相互之间的作用对于维持血管壁的正常生理功能是非常重要的。研究显示,内皮细胞、平滑肌细胞之间存在着复杂的信号传递过程,它们之间的信号传递过程对于保持内皮细胞和平滑肌细胞的生理功能有着重要的作用。血管壁的各种细胞之间如何进行细胞间的信号通讯以及这种相互关系是如何被周围环境所影响的需要进一步的研究来证实。通过对体内及体外培养的多种细胞进行研究表明,细胞间的通讯与外泌体（exosomes）之间存在着重要的联系。外泌体可以将其携带的核酸、蛋白质、细胞因子等内容物转运到靶细胞内,进而参与调控受体细胞的各种生理行为（包括细胞增殖、死亡、迁移及表型转化等）。通过本课题组的前期研究表明,包含内皮细胞与平滑肌细胞的共培养系统能够明显抑制平滑肌细胞炎症因子IL-1β和IL-18的表达,所以我们想要进一步研究并证实外泌体在内皮细胞与平滑肌细胞共培养中的可能作用及隐藏在这个作用后面的相关机制。microRNA（miRNA）已经被证明具有非常广泛多样的生物学功能。大量基础研究表明,miR-181b可通过下调多种靶基因的方式参与到心血管系统的调控工作中。在冠状动脉粥样硬化性心脏病、心脏瓣膜疾病、心力衰竭、心肌病等各种心血管疾病的调控中发挥重要作用。大量研究表明miRNA可在不同细胞中通过调控不同的靶点影响细胞焦亡。miR-181b是一种机械敏感性miRNA,它的表达水平在主动脉瓣膜内皮细胞中受到血管剪切力的影响。但是其在内皮细胞源性外泌体中的表达水平以及与平滑肌细胞焦亡的关系尚不明确。方法:1.分别建立平滑肌细胞单独培养和内皮细胞、平滑肌细胞共培养系统,在低剪切力条件下观察单独培养和共培养对平滑肌细胞细胞焦亡的影响。Western blot方法检测Caspase-1、GSDMD-N、NLRP3的蛋白表达水平,qRT-PCR方法检测miR-181b、Caspase-1、GSDMD-N、NLRP3、IL-1β和IL-18的表达水平,ELISA方法检测IL-1β和IL-18的表达情况。2.用无外泌体的血清培养内皮细胞,分别收集低剪切力和静息状态处理的细胞上清液。采用超速差异离心方法收集外泌体。外泌体的表征采用透射电子显微镜（TEM）、纳米颗粒追踪技术（NTA）以及蛋白电泳技术。采用microarray技术检测不同处理条件下外泌体中miRNA的表达情况。选取目标miRNA进行qRT-PCR方法验证。3.观察低剪切力处理下,内皮细胞源性外泌体对平滑肌细胞细胞焦亡的影响。Western blot检测Caspase-1、NLRP3的蛋白表达水平,qRT-PCR方法检测miR-181b、Caspase-1、NLRP3、IL-1β和IL-18的表达水平,ELISA方法检测IL-1β和IL-18的表达情况。4.以miR-181b为检索关键词,通过常用miRNA靶基因预测网站Target Scan、Pic Tar和miRanda预测miR-181b的靶基因,根据各个网站的预测评分并参考既往文献得到预测的靶基因STAT3,靶基因验证采用双荧光素酶实验。5.使用miR-181b mimics上调平滑肌细胞中miR-181b的表达水平,观察miR-181b对STAT3的影响。同时检测Caspase-1、NLRP3、IL-1β和IL-18等焦亡指标的水平。通过共转染miR-181b inhibitor和siSTAT3来同时改变miR-181b和STAT3的表达,以便进一步确定miR-181b通过STAT3信号通路调控平滑肌细胞细胞焦亡的水平。6.数据分析:所有数据的表达形式采用均数±标准差形式,所有实验数据至少重复3次。两组间的比较用t检验,多个组间的比较采用ANOVA分析。数据录入和图形绘制使用Graph Pad Prism 7.0软件,p值小于0.05说明差异存在统计学显着性。芯片数据及生物信息学分析采用R 3.4软件。结果:1.利用Western blot方法检测平滑肌细胞中细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD-N的表达。结果显示:低剪切力可以显着促进血管平滑肌细胞中Caspase-1、GSDMD-N的表达（p<0.01）,RT-PCR也提示细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18的mRNA表达情况明显高于对照组。ELISA检测提示炎症因子IL-1β和IL-18的表达同样高于对照组,差异具有统计学意义。进一步分析表明共培养系统中内皮细胞可以抑制平滑肌细胞的细胞焦亡水平。在细胞共培养系统中,平滑肌细胞的细胞焦亡相关蛋白GSDMD-N、NLRP3的表达水平显着低于平滑肌细胞单独培养系统。同时RT-PCR检测也提示GSDMD-N、NLRP3、IL-1β和IL-18在mRNA水平也是显着低于平滑肌细胞单独培养系统的。ELISA检测提示IL-1β和IL-18的表达具有同样的趋势,差异具有统计学意义。2.对于内皮细胞单独培养系统收集上清液后采用超速差异离心方法分离外泌体并进行外泌体的表征研究。通过TEM结果提示提取的外泌体形状为茶杯状结构,符合外泌体的特征。NTA检测结果提示外泌体的直径范围在60-130nm之间,平均值为110nm,符合外泌体的特征。蛋白电泳结果表明外泌体表面蛋白CD63、CD9阳性表达,同时Calnexin表达阴性。根据以上结果提示成功提取出了外泌体。3.外泌体芯片数据结果提示共有16种miRNA差异表达（Fold change大于2同时p<0.05）,其中12种miRNA上调,4种miRNA下调。GO分析提示差异表达的miRNA的生理功能主要包括细胞间通讯、调控核酸代谢、信号转导等。根据表达量分析和前期文献检索的结果选择表达差异最大的miR-181b进行后续分析。RT-PCR结果分析提示低剪切力明显降低内皮细胞源性外泌体中miR-181b的表达。4.通过将外泌体作用于体外低剪切力单独处理的血管平滑肌细胞,RT-PCR方法检测miR-181b的表达,并将实验组和对照组结果进行比较,结果提示miR-181b在低剪切力作用下显着下调,给与内皮细胞源性外泌体处理后平滑肌细胞中的miR-181b的表达高于阴性对照组。通过共培养系统中施加外泌体抑制剂干预处理,研究发现,外泌体可抑制平滑肌细胞中GSDMD-N、NLRP3的表达。在共培养组中加入GW4869后,共培养系统对平滑肌细胞细胞焦亡的保护作用显着被抑制,表明内皮细胞源性外泌体参与了低剪切力条件下对平滑肌细胞焦亡的抑制作用。进一步研究证实转染miR-181b inhibitors可以抑制外泌体对平滑肌细胞的抗细胞焦亡作用,提示外泌体中的miR-181b参与了内皮细胞对平滑肌细胞焦亡抑制的过程。5.根据相关预测网站的结果推测STAT3为miR-181b的靶基因。首先构建含有STAT3mRNA 3’UTR中与miR-181b 5’端种子区域相结合的野生型与突变型的质粒并转染至平滑肌细胞,然后用双荧光素酶实验证实miR-181b与STAT3的靶向关系。结果显示miR-181b可显着抑制野生型STAT3质粒的荧光强度,但是对突变型的质粒荧光强度无影响。然后又检测了STAT3的mRNA表达情况,我们发现过表达miR-181b能够抑制STAT3的mRNA表达水平,这种效应在静息状态和低剪切力处理下都存在。这些结果提示STAT3是miR-181b的靶基因。6.STAT3可促进血管平滑肌细胞细胞焦亡的发生。首先通过转染siSTAT3到平滑肌细胞观察STAT3对平滑肌细胞细胞焦亡的影响。结果表明转染siSTAT3可以降低平滑肌细胞细胞焦亡的发生。Western Blot检测转染后平滑肌细胞中细胞焦亡相关蛋白Caspase-1和NLRP3的表达,结果表明通过转染siSTAT3可使平滑肌细胞中的Caspase-1和NLRP3的表达水平明显下调。同时RT-PCR检测也提示Caspase-1、NLRP3、IL-1β和IL-18在mRNA水平也是显着低于对照组。ELISA检测提示IL-1β和IL-18的表达具有同样的趋势,差异具有统计学意义。继续通过共转染miR-181b抑制物和siSTAT3确定miR-181b通过STAT3信号通路调控平滑肌细胞的细胞焦亡。结果提示下调STAT3的表达可以逆转miR-181b inhibitor对平滑肌细胞的细胞焦亡的促进作用。以上结果说明miR-181b通过STAT3信号通路调控平滑肌细胞的细胞焦亡。结论低血管剪切力能够促进血管平滑肌细胞焦亡的发生,共培养系统提示内皮细胞能够抑制平滑肌细胞焦亡的发生。内皮细胞可分泌外泌体,这些外泌体的直径在110nm左右,根据芯片数据分析结果提示低血管剪切力可以抑制内皮细胞来源外泌体中miR-181b的表达水平。生信分析提示外泌体中差异miRNA的生理功能集中在细胞间通讯、调控核酸代谢、信号转导等方面。内皮细胞来源的外泌体可通过增加平滑肌细胞中的miR-181b来抑制血管平滑肌细胞细胞焦亡的发生。进一步的分析表明STAT3是miR-181b的候选靶基因并经过双荧光素酶实验得到验证。通过改变miR-181b和STAT3的表达水平,进一步证实了低血管剪切力通过外泌体miR-181b/STAT3轴来调控平滑肌细胞焦亡的发生。
吴治[7]（2020）在《生物材料活性信号影响细胞行为及生物活性玻璃化学信号通过促进外泌体分泌增强细胞间相互作用的研究》文中进行了进一步梳理在组织工程领域,大量研究证实生物材料以及由其构成的组织工程支架不仅是组织构建过程中细胞生长的壁龛,其自身具有的多种活性信号,如结构信号、化学信号和力学信号,也会对细胞生长行为产生影响,继而调节组织修复过程。近年来,基于对组织发育及再生过程的进一步探究和了解,研究者逐渐认识到不同种类细胞-细胞间的相互交流在组织再生过程中也发挥重要作用。我们课题组前期研究显示,生物材料的各种活性信号对细胞-细胞间相互作用存在显着影响,从而进一步揭示了生物材料影响组织再生的潜在机制。然而,生物材料的各种活性信号在影响细胞生长行为和细胞-细胞间相互交流中扮演的具体角色以及其影响细胞-细胞间相互交流的作用机制尚不清楚。因此,本论文首先研究了两种典型的二维生物材料结构信号（电纺纳米纤维膜和二氧化钛纳米管（TNs）阵列）、一种典型的三维生物材料结构信号（多孔支架）和一种典型的生物材料化学信号（生物活性玻璃（BG）离子产物）对细胞生长行为的影响规律及扮演的不同角色。结果显示两种二维生物材料结构信号主要以表面牵引力等形式作用于细胞,影响细胞骨架结构继而调节细胞分化能力;多孔支架主要以贯通多孔结构容纳细胞持久快速增殖并维持细胞原有属性;而BG离子产物则主要以活性离子形式作用于细胞,影响细胞增殖并调节细胞分化功能。而且,研究结果还显示,TNs阵列和多孔支架的结构信号以及BG离子产物的化学信号均能影响人骨髓间充质干细胞（HBMSCs）与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的细胞-细胞间相互交流,继而调节两种细胞的分化行为。研究报道,旁分泌作用在细胞-细胞间相互交流中至关重要。在通过旁分泌方式进行交流时,细胞分泌信号物质经细胞外环境递送给受体细胞,并对其生长行为进行调控。外泌体是活细胞主动分泌的一类携带有丰富信号物质的纳米囊泡,是细胞-细胞间旁分泌交流的重要信号物质载体。因此,本论文验证了外泌体在HBMSCs-HUVECs相互交流中发挥的重要作用,并进一步探究了BG离子产物对这两种细胞分泌外泌体的影响。结果显示,当细胞外泌体分泌受阻后,HBMSCsHUVECs相互作用即被显着抑制,而且BG离子产物在HBMSCsHUVECs相互交流中所发挥促进作用也被明显减弱,导致这两种细胞的分化能力显着下降。进一步研究发现,BG离子产物能明显促进HBMSCs和HUVECs分泌外泌体,同时提升两种细胞作为受体细胞时捕获内化外泌体的能力。而且,BG离子产物在不影响细胞所分泌外泌体基本囊泡特征时,明显增强HBMSCs所分泌外泌体的促血管化能力及HUVECs所分泌外泌体的促成骨分化能力。基于以上发现,本论文进一步探索了BG离子产物影响细胞外泌体分泌及其生物功能的分子机理。结果显示,BG离子产物在促进HBMSCs分泌外泌体时,主要通过上调细胞内中性鞘磷脂酶2（n SMase2）及Rab27a的基因表达和蛋白分泌,分别增强细胞内源性n SMases和Rab GTPase信号通路,继而促进细胞内腔内囊泡体（ILVs）的形成,同时加速成熟多囊泡体向质膜运转、停靠及融合,最终向细胞外空间释放出更多外泌体。而且,BG离子产物在促进ILVs生成时,可选择性地调节ILVs所携带各种信号物质的水平,如下调其微小RNA（mi R）-342-5p和上调mi R-1290的水平,从而增强HBMSCs所分泌外泌体的促血管化能力。本论文研究结果表明,BG离子产物所提供化学活性信号可通过增强细胞内源性外泌体分泌调控信号通路而稳定、安全地促进细胞分泌数量更多、生物功能更强的外泌体,同时提高受体细胞捕获内化外泌体的能力,最终通过增强细胞旁分泌作用而促进细胞-细胞间相互交流。本论文研究结果进一步阐明了生物材料活性信号在影响细胞生长行为时扮演的重要角色,并从外泌体的角度揭示了BG离子产物影响细胞-细胞间相互作用的潜在机制,为研究生物材料活性信号影响细胞-细胞间相互作用提供了一个新思路,并为提高外泌体产生以及外泌体生物功能修饰提供了一种简单可行的工程化策略。
倪达[8]（2020）在《外泌体介导心肌损伤保护作用的机制研究》文中提出背景:近年来,外泌体在心肌保护的研究中逐渐受到越来越多的关注。心血管系统是外泌体进行细胞间信号传递的重要场所之一,外泌体介导的心肌细胞间信号传递广泛涉及心血管系统疾病的生理及病理过程。在心肌缺血后,不同细胞来源的外泌体介导的信号传递和组织修复可能发挥着重要作用,其含有的大量与其结构和功能密切相关的物质可通过自分泌或旁分泌的方式作用于自身或远隔的靶细胞,修复受损心肌,对心肌梗死以及心肌缺血再灌注损伤引发的心肌细胞凋亡具有一定保护作用,可能减少梗死面积、增加新生血管数量,从而改善心脏功能。但外泌体如何发挥心肌保护作用的具体机制仍有待进一步研究。本课题研究拟从两部分内容进行阐述:首先从探讨多种来源外泌体在体外循环围手术期的水平变化的角度阐述外泌体与心肌保护之间的关联与作用,然后选取来源广泛且具有多向分化功能的骨髓间充质干细胞来源外泌体,拟从细胞和整体动物两个层面,通过一系列实验,深入研究外泌体介导心肌损伤保护作用的具体机制。第一部分研究多种来源外泌体在体外循环围手术期的表达变化情况目的:探究外周血内皮细胞、树突状细胞、巨噬细胞和血小板等多种来源的外泌体在体外循环围手术期的变化情况。方法:选择2017年1月-2017年12月行体外循环下先天性心脏畸形矫治术患儿60例,于体外循环前、再灌注1h、6h、12h、24h、48h、72h分别采集桡动脉血,采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测患儿血浆中c Tn T的浓度水平,并提取桡动脉血内皮细胞、树突状细胞、巨噬细胞和血小板,分别采用超速离心法分离内皮细胞、树突状细胞和巨噬细胞来源的外泌体,采用离心法分离血小板来源的外泌体。结果:体外循环再灌注1h、6h、12h、24h、48h c Tn T浓度[（1.352±0.233、1.653±0.231、1.263±0.224、0.623±0.145、0.231±0.025）μg/l]均明显高于体外循环前[（0.013±0.001）μg/l]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h内皮细胞来源外泌体含量[（167.55±26.67、210.57±31.12、189.56±26.32、142.28±4.27、91.02±3.16）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（76.78±13.14）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h树突状细胞来源外泌体含量[（87.51±6.28、92.12±5.37、83.14±4.29、68.37±3.28、50.49±3.94）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（34.27±4.52）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h巨噬细胞来源外泌体含量[（92.16±2.73、101.26±3.47、88.19±3.20、65.45±2.76、43.28±1.97）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（28.78±2.64）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h血小板来源外泌体含量[（134.27±4.28、141.28±3.06、135.84±3.29、105.61±2.58、65.24±3.10）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（41.51±2.02）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注72h各指标和体外循环前比较无统计学意义（P>0.05）。结论:外周血内皮细胞、树突状细胞、巨噬细胞、血小板来源的外泌体浓度水平在体外循环围手术期明显增高,且与代表心肌损伤的c Tn T浓度变化一致,证明外泌体具有心肌保护作用。第二部分研究骨髓间充质干细胞来源外泌体调控自噬发挥心肌保护作用机制目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死的影响是否与自噬有关,以及外泌体在其中发挥的作用。方法:1.建立小鼠心肌梗死模型,将骨髓间充质干细胞注入梗死周围心肌（4处20μl,共2×105个细胞）,分别于术后1、3、7、14、28天检测心功能的变化;术后28天取心脏标本,经Masson染色后,比较梗死面积的差异;TUNNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况。2.在心肌梗死后1天采集心肌细胞,比较各组心肌组织自噬水平的变化。3.将骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养,在缺氧培养箱中模拟心肌梗死情况,检测心肌细胞自噬水平,并观察使用自噬抑制剂3-MA后的变化情况。4.提取骨髓间充质干细胞来源的外泌体,在缺氧条件下与心肌细胞共培养,检测心肌细胞自噬水平。结果:1.骨髓间充质干细胞移植组术后28天时心功能较心肌梗死组明显改善;骨髓间充质干细胞移植组小鼠心肌梗死面积较心肌梗死组明显减少;骨髓间充质干细胞移植组心肌细胞凋亡率低于心肌梗死组。2.骨髓间充质干细胞移植组LC3-I、LC3-II、p53和BNIP3的表达明显降低。3.缺氧组p53和BNIP3水平升高,骨髓间充质干细胞共培养组p53和BNIP水平降低,使用自噬抑制剂后,心肌细胞死亡率下降。4.骨髓间充质干细胞来源外泌体共培养组LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p53和BNIP3在蛋白和m RNA水平上均明显低于缺氧组。结论:骨髓间充质干细胞分泌的外泌体可通过P53/BNIP3信号通路下调心肌细胞自噬水平,减少心肌细胞自噬死亡,从而改善心功能,减少心肌重塑,发挥心肌保护作用。
金圣博[9]（2020）在《基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制》文中研究说明目的:本实验以自发性高血压大鼠为动物模型,在“从脾论治”高血压病的理论指导下,探寻温针灸足三里穴对自发性高血压大鼠降压机制,同时通过Toll受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）介导下游炎症反应,从而探讨温针灸对自发性高血压大鼠抗炎机制及内皮细胞保护作用机制,为高血压病中医药临床防治提供可靠的基础理论依据。材料与方法:将10只雄性京都种大鼠（WKY）纳入空白组,依照随机数字表格法将40只雄性自发性高血压大鼠（SHR）随机分至模型组、温针灸组、针刺组、艾灸组,每组10只。常规饲料适应性喂养一周,采用智能无创血压计测量各组大鼠尾动脉血压,测量3次取平均值。开始实验,予正常组和模型组大鼠单纯固定20min,日一次,不予针灸干预;予温针灸组大鼠温针灸双侧足三里穴20min;予针刺组大鼠针刺双侧足三里穴20min;予艾灸组大鼠艾灸双侧足三里穴20min,日一次,连续治疗15天,同时测量实验开始后的第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天上午9点～11点的各组大鼠血压,连续测量3次取平均值,录入Excel并待统计。治疗结束,予各组大鼠水合氯醛（10%）腹腔麻醉,固定、脱毛、消毒,沿腹中线开腹,暴露腹主动脉并迅速采血,将血液离心后取上清液放入无菌EP管中冻存备用,采用ELISA法检测血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量;血清免疫指标Ig A、Ig M、Ig G含量;血管收缩因子Ang-Ⅱ、ET-1、VEGF含量。取一段完整的腹主动脉1cm,漂洗后用4%多聚甲醛溶液固定,HE染色法进行修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察腹主动脉壁病理形态学变化。探查腹部,迅速取脾脏组织50mg放入EP管中冻存备用,HE染色法将固定好的大鼠脾脏组织修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察脾脏组织病理学改变及炎性细胞浸润状态;采用Western Blot法,取脾脏组织50mg,研磨、离心,吸取上清液,提取脾脏组织蛋白质,使用BCA检测法测定蛋白质浓度,通过Image J软件计算灰带条图片灰度值,定量分析出各组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达量及NF-κB p65蛋白磷酸化水平;取脾脏组织100mg,提取大鼠脾脏组织m RNA,采用q PCR法,通过逆转录反应、PCR扩增反应,导出q PCR数据并计算分析出TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA的表达水平。实验相关数据使用SPSS 22.0软件进行统计学分析。实验结果以均数±标准差（x±s）表示;组间数据差异比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,以P<0.05表示具有统计学差异。结果:1.各组大鼠治疗前后血压变化:实验第2天温针灸组、针刺组血压开始逐渐下降,实验第7天血压开始显着下降,温针灸组下降幅度大于针刺组;实验第15天实验干预结束,血压降幅明显程度依次为温针灸组、针刺组、艾灸组;实验干预结束后继续测量血压至第21天发现,温针灸组与艾灸组血压较为平稳,无明显浮动,而针刺组、模型组、正常组血压均有不同程度上浮,其中针刺组血压上升幅度较为明显。2.各组大鼠脾脏动脉周围淋巴鞘及淋巴细胞分布情况:正常组与温针灸组白髓面积相对较大,动脉周围淋巴鞘组织较厚,可清晰观察到鞘内侧淋巴小结,鞘外侧分布大量且密集的淋巴细胞;而模型组、针刺组和艾灸组白髓和脾小结所占面积均有不同程度缩小,动脉周围淋巴鞘显着缩小,鞘周围淋巴细胞分布也较为稀少,其中以模型组缩小程度最为明显。3.各组大鼠血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量分析:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低;温针灸组TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与模型组比较,温针灸组IL-6、TNF-α含量显着降低、IFN-β含量显着升高;针刺组TNF-α含量显着降低,艾灸组IFN-β含量显着升高。与温针灸组比较,针刺组与艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与针刺组比较,艾灸组TNF-α含量显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。4.血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响:大鼠收缩压、舒张压与IL-6、TNF-α含量之间呈正相关,与IFN-β含量之间呈负相关,说明随着大鼠血压值的升高,血清内IL-6、TNF-α含量也随之增加,加快血清炎症因子的表达,而IFN-β含量随之降低。5.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平:与正常组比较,模型组、针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,温针灸组只有TLR4蛋白表达和NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高;与模型组相比,温针灸组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着降低;与温针灸组比较,针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。6.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子基因表达情况:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高,温针灸组TLR4、My D88表达水平显着升高;与模型组比较,温针灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着降低,针刺组TLR4表达水平有所降低,而艾灸组TLR4、My D88 m RNA表达水平下降;与温针灸组比较,针刺组和艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。7.各组腹主动脉壁HE染色结果分析:正常组主动脉壁内膜光滑完整,各层细胞排列有序,内皮细胞未见脱落、增生,中膜平滑肌细胞及弹性纤维紧密排列有序;模型组腹主动脉壁内膜明显增生、增厚、凸起,内皮细胞存在脱落情况,中膜平滑肌层排列混乱,有增生、肥大,部分区域出现变形、萎缩,弹性纤维间隔参差不齐,偶有断裂、皱褶现象,外膜细胞欠平整,偶有脱落情况;温针灸组腹主动脉壁内膜略粗糙,少许内皮细胞脱落,中膜平滑肌细胞排列偶有弯曲、褶皱,弹性纤维间隙大致均匀,部分出现缩小现象;针刺组大鼠腹主动脉壁内膜粗糙、欠平整,内皮细胞存在脱落现象,中膜平滑肌细胞增生、肥大、排列紊乱,弹性纤维出现褶皱、变形,间隙欠均匀,部分外膜出现突起、变形及细胞脱落现象;艾灸组大鼠腹主动脉壁内膜褶皱、变形,内皮细胞有脱落现象,中膜平滑肌细胞部分萎缩、减少,排列欠整齐,弹性纤维间隙不均匀,外膜欠光滑,偶有增生现象。8.各组血清免疫学指标比较:与正常组比较,模型组和艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低,血清Ig M含量显着升高,而针刺组血清Ig A含量显着降低;与模型组比较,温针灸组血清Ig A、Ig G含量显着升高,艾灸组血清Ig G含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组血清Ig A含量显着降低,艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低;与针刺组比较,艾灸组血清Ig G含量显着降低。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。9.各组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量比较:与正常组比较,模型组、艾灸组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着升高,温针灸组血清ET-1含量显着升高,针刺组血清AngⅡ、ET-1含量显着升高;与模型组比较,温针灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着降低,针刺组ET-1、VEGF含量显着降低,艾灸组ET-1含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组ET-1含量显着增高,艾灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着增高,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:1温针灸足三里可显着降低自发性高血压大鼠血压,疗效平稳、持久。2血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响;温针灸足三里穴可显着改善自发性高血压大鼠体内存在的炎症状态。3温针灸足三里穴可通过抑制大鼠脾组织Toll样受体信号通路中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白及m RNA表达调控信号传导。4温针灸足三里穴可通过调控TLR4/My D88/NF-κB信号通路,减轻血清炎症状态,提高血清抗炎能力,良性调控血管舒缩功能,从而降低炎性损伤程度,发挥对内皮细胞的保护作用。
张紫森[10]（2019）在《周细胞对脓毒症大鼠血管舒缩和屏障功能的协同保护作用及机制》文中研究指明脓毒症是ICU中常见的危重病症,其发生率和死亡率均很高。据统计,我国每年有300万脓毒症患者,约100万人死于脓毒症。脓毒症和脓毒性休克的后期会出现血管功能障碍,即血管低反应性和血管渗漏,最终导致多器官功能衰竭,ICU中30%-40%的病人死亡与血管低反应性和血管渗漏有关。针对脓毒症血管低反应性和血管渗漏的发生机制,提出了一系列的治疗措施,但这些措施在纠正血管低反应性和血管渗漏过程中存在矛盾现象,如用缩血管药物增加血管反应性的同时,会导致血管内皮细胞骨架蛋白收缩,加重血管渗漏。目前临床上缺乏协同治疗血管低反应性和血管渗漏的措施。周细胞（Pericyte,PC）是位于小血管、微血管和毛细血管内皮细胞周围、基底膜内的一群具有收缩、分泌和多项分化潜能的细胞。近年来研究发现,周细胞参与炎症、免疫紊乱、血管异常增生等病理生理过程,在多种疾病如癫痫、阿尔兹海默症、糖尿病、心肌缺血、肺纤维化的发生发展过程中发挥重要作用。而周细胞能否协同调控和保护脓毒症后血管舒缩和屏障功能,及其主要作用机制是什么,目前尚不清楚。据此,本研究利用盲肠结扎穿孔（Cecal Ligation and Puncture,CLP）及静脉注射LPS复制SD大鼠和转基因小鼠脓毒症模型,以及LPS刺激血管平滑肌细胞（VSMC）和血管内皮细胞（VEC）,分别从整体及离体水平研究了周细胞对脓毒症血管反应性和血管通透性的协同保护作用及机制。研究内容:第一部分脓毒症周细胞结构和功能的变化及与血管反应性和血管通透性的关系利用CLP及静脉注射LPS复制脓毒症大鼠及小鼠（周细胞荧光标记）模型,观察脓毒症后不同时相点（6h、12h、24h）肠系膜血管周细胞数量和结构的变化;观察肠系膜血管舒缩反应性和血管通透性的变化,及其相关调节蛋白表达的变化,分析脓毒症后周细胞结构和功能的变化与血管反应性和血管通透性间的关系。第二部分输注外源性周细胞对脓毒症大鼠血管低反应性和血管渗漏的协同保护作用利用脓毒症大鼠模型,输注外源性周细胞和功能增强的周细胞（poly（i:C）预刺激）,观察周细胞在肠系膜微静脉上的定植情况,以及输注周细胞后对脓毒症大鼠肠系膜血管舒缩反应性、血管通透性及存活率的影响,以明确周细胞对脓毒症大鼠血管舒缩功能和屏障功能的协同保护作用。第三部分周细胞敲减大鼠血管反应性和血管通透性的变化及输注外源性周细胞对血管舒缩功能和屏障功能的回复作用用CP-673451（PDGFR-β抑制剂）建立周细胞敲减大鼠模型（药物敲减模型）,观察周细胞敲减大鼠在脓毒症后血管反应性和血管通透性的变化情况,以及输注外源性周细胞对血管反应性和血管通透性的回复作用,以进一步明确周细胞对脓毒症大鼠血管反应性和血管通透性的协同保护作用。第四部分周细胞协同调节血管反应性和血管通透性的作用及机制1.周细胞调节血管平滑肌细胞舒缩功能和血管内皮细胞屏障功能的直接作用利用培养的VSMC和VEC,观察正常和LPS刺激下周细胞与VSMC和VEC间直接接触的情况,以及对VSMC舒缩功能和VEC屏障功能的直接调节作用。2.周细胞微囊泡（PCMV）协同调节血管反应性和血管通透性的作用及机制利用培养的周细胞:（1）观察周细胞和功能增强周细胞分泌微囊泡数量的变化;（2）观察PCMV在VSMC和VEC中的吸收情况;（3）观察PCMV对整体动物和离体细胞血管反应性和血管通透性的影响;（4）观察PCMV及Poly（i:C）PCMV所含生长因子、microRNA的数量、种类的变化,观察这些活性物质对VSMC收缩功能和VEC屏障功能的影响。主要研究结果:第一部分脓毒症周细胞结构和功能的变化及与血管反应性和血管通透性的关系1.大鼠CLP和LPS致脓毒症后,肠系膜微血管周细胞数量明显减少、脱落;肠系膜微动脉舒缩反应性降低、血流速度逐渐减慢、肠系膜上动脉p-MLC20表达降低,肠系膜微静脉血管通透性增加、血管内皮细胞明显肿胀、内皮连续性结构破坏、紧密连接明显开放同时伴有红细胞渗出、肠系膜上静脉ZO-1和VE-cadherin表达降低。结果提示脓毒症后周细胞的脱落与血管低反应性和血管渗漏密切相关。2.周细胞荧光标记的小鼠脓毒症后,肠系膜微静脉及毛细血管PDGFR-β荧光表达降低,微血管周细胞脱落;肠系膜微动脉舒缩反应性降低,血管渗漏增加、血管内皮细胞明显肿胀、血管内皮结构破坏。上述结果进一步证实脓毒症后周细胞的脱落与血管低反应性和血管渗漏密切相关。第二部分输注外源性周细胞对脓毒症大鼠血管低反应性和血管渗漏的协同保护作用输注周细胞可定植于肠系膜微静脉上,在输注后24h定植最多。周细胞输注后可明显提升脓毒症大鼠72h的存活率和存活时间,明显改善脓毒症大鼠血管反应性、血管流速及肠系膜上动脉p-MLC20的表达;改善肠系膜血管屏障功能、改善血管内皮细胞结构和增加连接蛋白表达,功能增强（Poly（i:c）预处理）的周细胞效果更好。提示外源性周细胞对脓毒症血管反应性和血管通透性具有协同保护作用。第三部分周细胞敲减大鼠血管反应性和血管通透性的变化及输注外源性周细胞对血管舒缩功能和屏障功能的回复作用周细胞敲减大鼠肠系膜微血管周细胞数量减少、覆盖率明显降低,血管舒缩反应性明显降低,血管通透性明显增加、血管内皮紧密连接明显开放、血管内皮连接蛋白表达明显降低,周细胞输注后可恢复周细胞减少导致的血管舒缩功能和屏障功能的破坏。脓毒症会加重周细胞敲减大鼠的血管低反应性和血管渗漏,输注外源性周细胞可明显改善周细胞敲减大鼠脓毒症后血管反应性、血流速度和肠系膜上动脉p-MLC20表达,改善血管通透性,增加连接蛋白的表达;功能增强（Poly（i:c）预处理）的周细胞效果更好。提示输注外源性周细胞对周细胞敲减大鼠的血管反应性和血管通透性具有回复作用。第四部分周细胞协同调节血管反应性和血管通透性的作用及机制1.周细胞调节血管平滑肌细胞舒缩功能和血管内皮细胞屏障功能的直接作用周细胞与VSMC和VEC可直接接触形成连接,直接调节VSMC的收缩功能和VEC的屏障功能。2.周细胞微囊泡协同调节血管反应性和血管通透性的作用及机制周细胞可通过产生微囊泡（PCMV）协同改善VSMC舒缩功能和VEC屏障功能。机制研究发现,PCMV可通过携带Ang-1、miR-145和miR-132来发挥对VSMC收缩功能和VEC屏障功能的协同保护作用。miR-145主要作用于VSMC,抑制Sphk2和S1PR1表达,增加S1PR2和p-MLC20的表达,改善血管平滑肌细胞舒缩功能;miR-132主要作用于VEC,抑制Sphk2和S1PR2的表达,增加S1PR1、ZO-1和VE-cadherin的表达,改善血管内皮细胞屏障功能。提示周细胞主要通过分泌微囊泡携带Ang-1、miR-145和miR-132作用于血管平滑肌细胞和血管内皮细胞,实现对脓毒症血管反应性和血管通透性的协同调控和保护作用。结论:1.脓毒症后肠系膜微血管周细胞结构破坏、数量减少、覆盖率降低,在血管低反应性和血管渗漏中发挥重要作用。2.输注外源性周细胞可协同改善脓毒症血管低反应性和血管渗漏。3.周细胞敲减大鼠肠系膜微动脉收缩和舒张反应性明显下降,血管通透性明显增加,输注周细胞后可明显恢复周细胞减少导致的血管舒缩功能和内皮屏障功能损伤。4.周细胞可通过直接接触和分泌微囊泡协同保护脓毒症血管反应性和血管通透性。直接作用主要是周细胞与VSMC和VEC直接接触形成紧密和缝隙连接,产生物理覆盖和调节作用。旁分泌作用主要是周细胞分泌内含多种活性物质的微囊泡来发挥作用,如Ang-1、miR-145和miR-132。一方面周细胞分泌携带Ang-1的微囊泡,传递至VSMC和VEC,增加血管平滑肌细胞舒缩功能和血管内皮细胞屏障功能。另一方面,周细胞通过分泌携带miR-145和miR-132的微囊泡来发挥协同保护作用,其中miR-145主要在血管平滑肌细胞中起作用,它主要是通过降低Sphk2和S1PR1的表达,增加S1PR2和p-MLC20的表达来发挥作用;miR-132主要在血管内皮细胞中起作用,它主要是通过降低Sphk2和S1PR2的表达,增加S1PR1、ZO-1和VE-cadherin的表达来发挥作用。
二、血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递（论文提纲范文）
（1）干细胞及其来源外泌体防治血管再狭窄的研究现状与问题（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 资料筛选 |
| 1.3 资料提取与文献质量评价 |
| 2 结果Results |
| 2.1 血管再狭窄形成 |
| 2.2 干细胞移植防治血管再狭窄 |
| 2.2.1内皮祖细胞防治血管再狭窄的研究 |
| 2.2.2 间充质干细胞防治血管再狭窄的研究 |
| 2.3 干细胞来源外泌体防治血管再狭窄的研究 |
| 2.3.1 内皮祖细胞来源外泌体及其对血管再狭窄的作用 |
| 2.3.2 间充质干细胞来源外泌体及其对血管再狭窄的作用 |
| 3 展望Prospects |
（2）细胞衰老及通讯研究（论文提纲范文）
| 1 血管结构和功能 |
| 2 细胞通讯与血管稳态维持 |
| 2.1 血管稳态 |
| 2.2 血管内皮细胞接触通讯 |
| 2.2.1 紧密连接 |
| 2.2.2 缝隙连接 |
| 2.3 血管内皮细胞化学通讯 |
| 3 细胞衰老与细胞通讯 |
| 3.1 细胞衰老与接触通讯 |
| 3.2 细胞衰老与化学通讯 |
| 3.2.1 炎症反应 |
| 3.2.2 血管新生 |
| 3.2.3 组织再生和创面愈合 |
| 4 细胞通讯改变与血管病理学 |
| 4.1 血管张力异常 |
| 4.2 动脉粥样硬化 |
| 4.3 微血管及毛细血管屏障功能异常 |
| 4.4 肿瘤的生长与抑制 |
| 5 细胞通讯改变与临床转化的探讨 |
| 6 总结 |
（3）缝隙连接43参与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 器材与仪器 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验耗材及仪器 |
| 2.2.1 主要的购置试剂 |
| 2.2.2 实验仪器与器材 |
| 第3章 OxyHb体外诱导脑血管痉挛的细胞模型 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.1.1 基底动脉平滑肌细胞原代培养与鉴定 |
| 3.1.2 传代和培养 |
| 3.1.3 OxyHb诱导的脑血管痉挛细胞模型的建立 |
| 3.1.4 数据处理及统计学方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 蛛网膜下腔出血活体模型的构建与鉴定 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.1.1 SD大鼠枕大池双注SAH模型的构建 |
| 4.1.2 脑血管痉挛模型的形态学观察 |
| 4.1.3 SAH模型海马区神经元损伤及脑血流灌注下降的观察 |
| 4.1.4 活体荧光显微镜对微循环障碍模型的评估 |
| 4.1.5 数据处理及统计学方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 SAH活体造模效果的观察 |
| 4.2.2 各组基底动脉样本痉挛的程度 |
| 4.2.3 各组海马区H&E染色及神经元损伤情况 |
| 4.2.4 MRPWI观察海马区脑血流量的结果 |
| 4.2.5 活体荧光显微镜观察大鼠微循环痉挛的结果 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 体外SAH模型Cx43 蛋白表达及GJIC功能的变化 |
| 5.1 实验方法 |
| 5.1.1 实验分组及PKC抑制剂的给药 |
| 5.1.2 平滑肌细胞样本总蛋白的制备及含量测定 |
| 5.1.3 Western blot检测样品Cx43 蛋白的表达 |
| 5.1.4 单细胞显微注射技术评估GJIC功能 |
| 5.1.5 数据处理及统计学方法 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 CVS体外模型Cx43 蛋白的表达量以及与PKC通路的关系 |
| 5.2.2 CVS体外模型GJIC功能与PKC通路的关系 |
| 5.3 讨论 |
| 第6章 体内SAH模型Cx43 蛋白表达及DCI的观察 |
| 6.1 实验方法 |
| 6.1.1 基底动脉Cx43 蛋白的表达 |
| 6.1.2 免疫荧光观察Cx43 在基底动脉上的空间表达 |
| 6.1.3 Cx43 siRNA干扰模型的构建及PKC抑制剂的给药 |
| 6.1.4 磁共振弥散加权成像(MRPWI)和活体荧光显微镜对DCI的观察 |
| 6.1.5 数据处理及统计学方法 |
| 6.2 实验结果 |
| 6.2.1 SAH模型中基底动脉Cx43 蛋白表达的时相变化及位置分布 |
| 6.2.2 Cx43 siRNA及 PKC抑制剂对Cx43 蛋白水平上升的抑制作用 |
| 6.2.3 Cx43 siRNA及 PKC抑制剂能够提升SAH后7 天的DCI预后 |
| 6.3 讨论 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 参考文献 |
| 综述 肌内皮缝隙连接的分子调控 |
| 参考文献 |
（4）脂肪细胞来源外泌体在糖尿病动脉粥样硬化疾病中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 论文Ⅰ 脂肪细胞来源外泌体介导的内皮间质转化在糖尿病血管再狭窄中的作用及机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 创新点 |
| 限制性 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅱ 脂肪细胞来源外泌体在血管新生中的作用及机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 创新点 |
| 限制性 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| SCI论文Ⅰ |
| SCI论文Ⅱ |
| SCI论文Ⅲ |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（5）心房颤动患者血浆外泌体miR-107对人血管内皮细胞的影响及其机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 外周血中外泌体提取、鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 血浆外泌体miRNA的提取、分析及对人血管皮细胞的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 外泌体miRNAs在心血管疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）低剪切力通过内皮细胞来源的外泌体miR-181b调控平滑肌细胞焦亡的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:低血管剪切力促进血管平滑肌细胞焦亡 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 低血管剪切力促进平滑肌细胞焦亡 |
| 3.2 低剪切力下内皮细胞及平滑肌细胞共培养抑制平滑肌细胞焦亡 |
| 4 讨论 |
| 第二部分:内皮细胞来源的外泌体miR-181b抑制平滑肌细胞焦亡 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 数据统计 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 内皮细胞源性外泌体研究 |
| 3.2 内皮细胞源性外泌体调控平滑肌细胞焦亡 |
| 3.3 外泌体miR-181b调控平滑肌细胞焦亡 |
| 4 讨论 |
| 第三部分:外泌体miR-181b通过STAT3 信号通路抑制平滑肌细胞焦亡 |
| 1 前言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 miR-181b靶基因预测及验证 |
| 2.4 数据统计 |
| 3 结果部分 |
| 3.1 miR-181b靶向STAT3 信号通路 |
| 3.2 miR-181b通过STAT3 调节平滑肌细胞焦亡 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 血管剪切力与动脉粥样硬化的相互关系 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）生物材料活性信号影响细胞行为及生物活性玻璃化学信号通过促进外泌体分泌增强细胞间相互作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 组织工程与生物材料 |
| 1.1.1 组织工程介绍 |
| 1.1.2 生物材料介绍 |
| 1.1.3 生物材料活性信号 |
| 1.2 细胞-细胞间相互交流 |
| 1.2.1 细胞-细胞间相互交流模式 |
| 1.2.2 细胞外囊泡及外泌体介绍 |
| 1.2.3 外泌体分泌与内化 |
| 1.2.4 外泌体在细胞-细胞间相互交流的作用 |
| 1.3 细胞-生物材料相互作用 |
| 1.3.1 生物材料影响细胞生长行为 |
| 1.3.2 生物材料影响细胞-细胞间相互作用 |
| 1.3.3 生物材料影响细胞外泌体分泌 |
| 1.4 本论文课题的提出及主要研究内容 |
| 1.4.1 本论文课题的提出 |
| 1.4.2 本论文课题的主要研究内容 |
| 第二章 生物材料活性信号影响细胞生长行为及细胞-细胞间相互作用的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试剂与设备 |
| 2.2.1 主要实验试剂 |
| 2.2.2 主要实验设备 |
| 2.2.3 基因及引物序列 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 细胞获取、培养与分离 |
| 2.3.2 生物支架材料的制备与表征 |
| 2.3.3 生物材料活性信号对细胞生长行为及细胞-细胞间相互作用的影响 |
| 2.3.4 细胞活性与增殖 |
| 2.3.5 细胞形貌与骨架结构 |
| 2.3.6 细胞分化 |
| 2.3.7 统计分析 |
| 2.4 研究结果 |
| 2.4.1 PDLLA/PCL电纺纳米纤维膜结构信号影响细胞生长形态与分化 |
| 2.4.2 TNs阵列结构信号影响细胞增殖、形态、分化及细胞-细胞间相互作用 |
| 2.4.3 PCL多孔支架结构信号影响细胞增殖、形态、分化及细胞-细胞间相互作用 |
| 2.4.4 BG离子产物化学信号影响细胞增殖、分化及细胞-细胞间相互作用 |
| 2.5 分析讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 BG离子产物影响细胞外泌体分泌的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试剂与设备 |
| 3.2.1 主要实验试剂 |
| 3.2.2 主要实验设备 |
| 3.2.3 基因引物序列 |
| 3.3 研究方法 |
| 3.3.1 细胞共培养 |
| 3.3.2 细胞分化表征 |
| 3.3.3 细胞外泌体分离与纯化 |
| 3.3.4 细胞外泌体鉴定 |
| 3.3.5 外泌体量化表征 |
| 3.3.6 外泌体内化能力评价 |
| 3.3.7 HBMSCs来源的外泌体体外功能表征 |
| 3.3.8 HBMSCs来源的外泌体体内功能表征 |
| 3.3.9 HUVECs来源的外泌体体外功能表征 |
| 3.3.11 统计分析 |
| 3.4 研究结果 |
| 3.4.1 BG离子产物影响细胞旁分泌作用 |
| 3.4.2 BG离子产物活性化学信号促进细胞外泌体的产生与内化 |
| 3.4.3 BG离子产物增强HBMSCs来源BG~+-exo的促成血管能力 |
| 3.4.4 BG离子产物增强HUVECs来源BG~+-exo的促成骨分化能力 |
| 3.5 分析讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 BG离子产物影响细胞外泌体分泌及功能的机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试剂与材料 |
| 4.2.1 主要实验试剂 |
| 4.2.2 主要实验设备 |
| 4.2.3 基因及引物序列 |
| 4.3 研究方法 |
| 4.3.1 细胞外泌体分泌通路探究 |
| 4.3.2 HBMSCs来源外泌体内含物分析 |
| 4.3.3 MiRNA功能验证 |
| 4.3.4 统计分析 |
| 4.4 研究结果 |
| 4.4.1 nSMase2与Rab27a影响HBMSCs外泌体的形成与释放 |
| 4.4.2 HBMSCs来源外泌体内含物分析 |
| 4.4.3 差异表达mi RNA功能验证 |
| 4.5 分析讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第五章 全文总结 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 本论文课题的创新点 |
| 5.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 |
（8）外泌体介导心肌损伤保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 2 总体设计思路 |
| 参考文献 |
| 第一部分 研究多种来源外泌体在体外循环围手术期的改变情况 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 研究骨髓间充质干细胞来源外泌体调控自噬发挥心肌保护作用机制 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 外泌体的研究进展及在心血管疾病中的临床应用价值 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
（9）基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 温针灸对自发性高血压大鼠血压及炎症状态的调控作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 温针灸对自发性高血压大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路调控机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 温针灸通过调控炎症反应发挥对自发性高血压大鼠内皮细胞保护作用的机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附图1 Toll样受体家族及其信号传导通路 |
| 附图2 Toll受体信号通路影响血压机制 |
| 附图3 动物实验技术路线图 |
| 附图4 qPCR实验过程中部分扩增曲线 |
| 附图 5qPCR实验过程中部分熔解曲线 |
| 综述 |
| 综述一 TLRs通路各层级在高血压病及免疫功能调节中的作用机理分析 |
| 综述二 针灸调节血压及免疫功能机制的研究进展 |
| 综述三 高血压病与炎症因子之间的相关性分析 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）周细胞对脓毒症大鼠血管舒缩和屏障功能的协同保护作用及机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 周细胞对脓毒症大鼠血管舒缩和屏障功能的协同保护作用及机制 |
| 2.1 材料和实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 白藜芦醇对脓毒症大鼠血管舒张功能的保护作用及机制 |
| 3.1 材料和实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 周细胞在血管相关疾病中的作用及调控研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递（论文参考文献）
- [1]干细胞及其来源外泌体防治血管再狭窄的研究现状与问题[J]. 帅芝琴,陈家蒙,刘滔滔,胡安玲,李利生,余丽梅,徐尚福. 中国组织工程研究, 2022(01)
- [2]细胞衰老及通讯研究[J]. 张悦,朱元正,SAEED Muhammad,吴安东,胡成钰,田小利. 中国基础科学, 2021(05)
- [3]缝隙连接43参与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的机制研究[D]. 杨乐. 南昌大学, 2021(01)
- [4]脂肪细胞来源外泌体在糖尿病动脉粥样硬化疾病中的作用及机制研究[D]. 陈芳芳. 山东大学, 2021(10)
- [5]心房颤动患者血浆外泌体miR-107对人血管内皮细胞的影响及其机制的研究[D]. 王硕. 河北医科大学, 2021(02)
- [6]低剪切力通过内皮细胞来源的外泌体miR-181b调控平滑肌细胞焦亡的实验研究[D]. 徐香山. 中国医科大学, 2021(02)
- [7]生物材料活性信号影响细胞行为及生物活性玻璃化学信号通过促进外泌体分泌增强细胞间相互作用的研究[D]. 吴治. 上海交通大学, 2020(01)
- [8]外泌体介导心肌损伤保护作用的机制研究[D]. 倪达. 苏州大学, 2020(06)
- [9]基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制[D]. 金圣博. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [10]周细胞对脓毒症大鼠血管舒缩和屏障功能的协同保护作用及机制[D]. 张紫森. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)