一、不同年龄大鼠血中二甲基精氨酸和降钙素基因相关肽浓度的变化（论文文献综述）
田军[1]（2021）在《降钙素基因相关肽（CGRP）通过调控Akt/mTOR信号通路介导的凋亡和自噬减轻创伤性颅脑损伤的实验研究》文中认为创伤性颅脑损伤（Traumatic Brain Injury TBI）的定义是由于外部机械力造成的脑损伤,并导致大量的死亡和残疾,许多受害者有功能障碍,如运动和感觉功能障碍,甚至认知功能缺陷。据估计,全世界每年约有5000万人被诊断为TBI。颅脑损伤根据发生的不同过程和阶段,可分为原发性和继发性脑损伤,都是由脑外伤引起的复杂疾病。组织丢失和细胞死亡是主要的损伤,TBI后由于原发性颅脑损伤导致的继发性脑损伤,导致激活的小胶质细胞、募集的中性粒细胞和巨噬细胞以及血液代谢物中引起的炎症反应均可导致继发性脑损伤,进而导致进一步的功能性和器质性的脑损伤。炎症反应被认为是TBI继发性损伤的重要机制。从理论上讲,减少炎症改善受损脑组织能量及代谢可以减轻TBI引起的继发性脑损伤。降钙素基因相关肽（Calcitonin gene-related peptide CGRP）是由37个氨基酸组成的多肽,广泛表达于中枢和外周神经系统。目前,CGRP被认为是最有效的血管舒张药。CGRP在脑组织中起保护作用。当脑组织受到损伤并出现缺血时,小鼠脑TBI后产生大量自我保护物质,CGRP是其中最重要的保护物质之一。研究表明,在TBI后的病理过程中,CGRP的分泌在TBI后增多。增加的目的是使脑血管扩张,尽快为损伤后缺血缺氧的脑组织提供血液供应。然而,当脑组织损伤缺血较严重时,脑组织产生的CGRP不能完全防御这种损伤。因此出现了严重的脑组织继发性和永久性损伤。考虑到CGRP具有保护脑损伤的潜力,而自噬和凋亡在TBI诱导的继发性损伤中发挥重要作用,我们检测了CGRP是否能抑制TBI小鼠的自噬和凋亡的表达。结果表明,CGRP通过减轻脑水肿、调节神经元自噬和凋亡,减低TBI后神经炎症反应来保护大脑。第一部分创伤性颅脑损伤患者血清CGRP水平及与预后的关系目的:临床工作中,观察不同TBI患者CGRP表达变化、判断伤情程度,进一步探讨CGRP与TBI患者病情程度及预后的关系,并探讨CGRP是否可以作为判断TBI预后的可靠指标。方法:选取138例TBI患者进行分组:健康体检者54例（对照组）,重度TBI组73例,轻度TBI组65例。采用酶联免疫分析试剂法（ELISA）,测定TBI患者特定时间的血清CGRP水平。采用格拉斯哥昏迷量表（GCS）判定TBI严重程度。统计分析:各组不同时间CGRP比较采用重复测量资料的方差分析,同一时间组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法。采用wilicoxon秩和检验分析患者血清CGRP水平与临床变量的关系。结果:1.TBI后患者血清CGRP的变化对照组随时间变化呈现平稳状态,TBI（轻度组）和TBI（重度组）先下降后逐渐上升。两组血清CGRP水平均低于对照组。入院时、1天、3天、7天和14天时间点,TBI（重度组）低于TBI（轻度组）,差异显着,有统计学意义;入院时、1天、3天时间点,TBI（轻度组）低于对照组,差异显着,有统计学意义;入院时间点7天和14天,TBI（轻度组）低于对照组,但差异不显着。2.入院时TBI患者血清CGRP水平与临床病理特征关系相对于GCS评分<5分的患者,GCS评分≥5分的患者血清CGRP水平较高（Z=-2.277,P=0.023）。存活患者的CGRP水平高于死亡患者（Z=-3.571,P<0.001）。3.入院血清CGRP预测TBI患者伤后死亡的价值评估血清CGRP水平预测TBI患者伤后死亡的特异度为88.24%,灵敏度为68.82%,CGRP预测最佳临界值为13.255pg/ml。4.TBI患者预后与血清CGRP的相关性CGRP高水平组患者生存情况优于低水平组患者,差异显着;单因素Cox分析发现,年龄,中线结构移位,GCS分数,CGRP水平与TBI患者预后相关;多因素Cox分析发现,中线结构移位,CGRP水平是TBI患者独立预后因素。小结:1.TBI后患者血清中的CGRP变化趋势为随伤后时间变化先降低,然后逐渐升高。约至24小时到达最低点,大约在14天前后达高峰。2.血清CGRP水平可以预测TBI患者的预后不良及死亡,而且该预测效能较高。第二部分降钙素基因相关肽（CGRP）对小鼠创伤性颅脑损伤神经功能的保护作用目的:通过重物打击法（Feeney重物下降挫伤法）,建立开放性创伤性颅脑损伤（Traumatic Brain Injury TBI）动物模型,并予以脑室注射联合尾静脉注射外源性降钙素基因相关肽（CGRP）干预TBI模型小鼠;通过旷场实验、水迷宫实验、巴恩斯迷宫实验、跳台实验对实验小鼠的行为学评分进行测量,验证（CGRP）对创伤性颅脑损伤神经功能的保护作用。通过测量CGRP干预前后小鼠脑挫伤面积比较、脑水肿比较、血脑屏障破坏程度等方面的比较,来探讨CGRP对TBI小鼠脑损伤的保护作用。方法:清洁级（SPF）雄性BALB/C小鼠390只,随机分为sham组、TBI组和TBI+CGRP组。用1%戊巴比妥钠（40 mg/kg,i.p.i.）麻醉小鼠,根据Feeney重物下降法,建立开放性颅脑创伤模型。TBI+CGRP两组分别用CGRP肽（脑室注射+尾静脉注射）,术后每日采用改良神经严重程度评分（m NSS）检测各组小鼠的神经功能缺损程度。各组小鼠分别于术后相应的时间点（1、3、5、7天）取材;苏木精伊红染色（HE染色法）和（TTC）染色法:测量小鼠脑组织损伤面积,并进行组间对比;通过干湿重法测量不同组别小鼠的脑组织含水量;通过测量Evans Blue（EB）渗透率的方法,来判定TBI后血脑屏障的破坏程度。通过蛋白质印迹法（Western blot）测量脑组织CGRP蛋白的表达量。通过行为学测试对小鼠神经行为学进行测量:术后第8、9天进行旷场实验;术后第10-15天行水迷宫实验;术后第16-22天行巴恩斯迷宫实验;术后第23、24天为跳台实验的训练和测试阶段。结果:1.创伤性颅脑损伤（TBI）（Feeney重物下降挫伤法）动物模型稳定:术后小鼠平均昏迷时间约为1.5-2h,生命体征较平稳,体温恢复,呼吸平稳,逐渐苏醒和爬行,可进食水。脑组织经解剖,均可见局部挫伤灶,局部坏死、淤血,伴部分脑组织的凹陷缺损;部分样本损伤灶同侧可见蛛网膜下腔出血。2.各组小鼠m NSS评分差异术后第1天,TBI+CGRP组和TBI组相对sham组,神经功能均受损明显。TBI+CGRP组和TBI组神经功能基本相同,差异无统计学意义;在TBI后第2-7天,TBI+CGRP组小鼠m NSS评分低于TBI组,差异显着;第2-7天TBI+CGRP组和TBI组神经功能逐渐有所好转,两组小鼠的分数逐渐下降。3.TBI小鼠神经功能行为学评分结果旷场实验（Open field test）评分结果:总活动距离测试:sham组总距离最长,TBI+CGRP组小鼠的总距离居中间水平,TBI组的总距离最短。TBI+CGRP组小鼠的总距离相比TBI组的总距离长,差异显着。静止次数和静止时间和测试方面:TBI组小鼠静止次数最多,sham组和TBI+CGRP组静止次数较低,和TBI组小鼠相比,差异不显着,无统计学意义。TBI组小鼠静止时间最长,sham组和TBI+CGRP组静止时间相对较最低,和TBI组小鼠相比,差异不显着,无统计学意义。水迷宫实验:定位航行实验阶段:水迷宫测试小鼠发现平台的潜伏期,TBI+CGRP组小鼠的潜伏期相比TBI组小鼠的潜伏期时间短,差异显着,有统计学意义。TBI组小鼠比sham组小鼠的潜伏期长,差异显着,有统计学意义。空间探索实验阶段:在测试的第五天小鼠穿过平台次数,sham组最多,TBI组最少,TBI+CGRP组居中。TBI组穿过平台次数相比sham组少,差异显着,有统计学意义;TBI+CGRP组穿越平台次数多于TBI组,差异显着,有统计学意义。巴恩斯迷宫测试:训练阶段:TBI组小鼠的潜伏期相比较TBI+CGRP组小鼠的潜伏期长,差异显着,有统计学意义。第六天试验中,第一次探查目标洞（无暗箱）前的错误探查次数比较,TBI+CGRP组小鼠的探错次数相比TBI组小鼠多,差异显着,有统计学意义。跳台实验评分:在跳台试验测试阶段,TBI+CGRP组小鼠的潜伏期相比较TBI组小鼠的潜伏期长,差异显着,有统计学意义;错误次数:TBI+CGRP组小鼠的错误次数相比较于TBI组小鼠的错误次数少,差异显着,有统计学意义。4.不同组别小鼠脑组织标本创伤面积的测量和比较:三组小鼠脑组织切片相比较:TBI+CGRP组与TBI组相比较,均可见一定程度的脑组织损伤及局灶性神经细胞组织缺失,早期缺损范围的差异性较小。随着时间的推移,TBI小鼠脑组织切片可见更严重的脑损伤;定量计算脑损伤体积,TBI+CGRP组小鼠脑组织切片与TBI组小鼠脑组织切片相比较,损伤面积略小,但差异不显着,无统计学意义。5.脑水肿测定:外源性CGRP干预,将TBI术后脑水肿消退的时间点提前,减少了TBI诱导的脑水肿在TBI后持续时间,加速了TBI诱导的脑组织水肿的吸收,进而减轻脑损伤;另一方面,TBI+CGRP组小鼠的脑含水量在1天、3天、5天、7天这四个时间点,脑水肿程度均低于TBI组小鼠,差异显着,有统计学意义。6.血脑屏障损伤程度:TBI术后第1天,sham组未见明显依文思蓝（EB）渗出,TBI+CGRP组小鼠（EB）渗透率和TBI组相比无明显差异;TBI后第3、5、7天,TBI+CGRP组和TBI组小鼠依文思蓝（EB）渗透率仍较高,TBI+CGRP组小鼠依文思蓝（EB）渗透率低于TBI组,两者差异显着,有统计学意义。7.TBI后各组小鼠CGRP蛋白表达水平的差异:TBI组小鼠脑组织中CGRP表达水平显着降低,并随着时间的推移逐渐升高;TBI+CGRP组脑组织中CGRP蛋白表达水平明显高于TBI组,差异显着,有统计学意义。小结:1.根据Feeney重物下降法,可建立标准、可靠的开放性颅脑损伤动物模型,术后正常喂养及观察行为学变化,确认TBI模型建立。2.CGRP干预减低了创伤性颅脑损伤小鼠的神经功能损伤,减低了创伤性颅脑损伤挫伤灶的损伤面积;减低了创伤性颅脑损伤后脑水肿的程度,减少了TBI后脑水肿的持续时间;减轻了TBI后血脑屏障的破坏程度。3.通过蛋白印迹法可见TBI后小鼠脑组织中CGRP的表达水平显着降低,24h达最低,随时间推移逐渐回升。TBI+CGRP组小鼠脑组织中CGRP蛋白表达水平明显高于TBI组,提示本实验采用的脑室注射+尾静脉注射干预途径有效可靠。第三部分降钙素基因相关肽（CGRP）对创伤性颅脑损伤后神经元细胞自噬和凋亡的影响目的:通过对小鼠挫伤脑组织部位取材,对其进行自噬和凋亡相关标志性蛋白检测,观察对比CGRP干预前后自噬和凋亡标志性蛋白的变化情况,探讨CGRP在TBI环境下对自噬和凋亡的调控作用。方法:通过免疫荧光双染法:定位分析LC3和Neu N及GFAP蛋白;蛋白质印迹法,定量分析LC3、P62、Beclin-1、cleaved-caspase-3表达量;TUNEL和Neu N双染色法,分析TBI后神经元凋亡的表达变化情况。结果:1.CGRP对TBI小鼠神经元细胞自噬的影响免疫荧光双染法:脑皮层挫伤区LC3（+）蛋白定位于挫伤部位神经元的胞质中,Sham组可见少量阳性表达,随时间推移阳性表达程度无变化。TBI组于伤后1天可见LC3（+）细胞显着增多,随时间推移表达程度逐渐增强,高于Sham组,差异显着;TBI+CGRP组与TBI组比较,LC3（+）细胞数量较少,表达程度明显减弱,TBI后第1天,差异不显着,无统计学意义;而TBI后第3、5、7天,两组差异性逐渐增强,差异显着,有统计学意义。蛋白质印迹法:部分自噬标志物LC3、P62、Beclin-1蛋白表达与双染结果一致。TBI+CGRP组的LC3II/LC3I比值和Beclin-1水平较TBI组明显降低,差异显着,有统计学意义。P62水平的变化则相反,与sham组相比,TBI导致小鼠P62表达降低,TBI+CGRP组的P62较TBI组明显升高,差异显着,有统计学意义。CGRP的干预导致P62蛋白表达逐渐增强并维持在一个相对较高的阶段。2.CGRP对TBI小鼠神经元细胞凋亡的影响:TUNEL和Neu N双染色显示:TBI导致神经元凋亡增加,挫伤灶周围TUNEL（+）细胞明显增加;TBI+CGRP组的TUNEL（+）较TBI组明显降低,差异显着,有统计学意义;蛋白质印迹法:（Western blot法）:TBI导致神经元凋亡,小鼠挫伤灶脑组织凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3表达升高,皮层组织细胞凋亡增加。TBI+CGRP组的cleaved-caspase-3较TBI组明显降低,差异显着,有统计学意义。3.CGRP对TBI小鼠神经元细胞神经胶质纤维酸性蛋白GFAP的影响:与sham组相比,TBI导致小鼠神经元细胞GFAP数量明显增加,Neu N数量明显减低,而CGRP的干预降低了神经元细胞损伤。脑皮层挫伤区GFAP（+）表达:Sham组可见少量阳性细胞表达,表达不明显。TBI组和TBI+CGRP组伤后1、3、5、7天均可见阳性细胞显着增多。TBI组GFAP（+）计数率高于Sham组,差异显着;TBI+CGRP组GFAP（+）计数率低于TBI组第1、3天差异无显着性,第5、7天差异显着,有统计学意义。脑皮层挫伤区Neu N（+）表达:Sham组可见适量Neu N（+）表达。TBI组和TBI+CGRP组伤后1、3、5、7天均可见Neu N（+）细胞显着减少。TBI组Neu N（+）计数率低于Sham组,差异显着,有统计学意义;TBI+CGRP组Neu N（+）计数率高于TBI组差异显着,有统计学意义。小结:1.TBI后小鼠神经细胞自噬和凋亡水平增加,予以外源性CGRP干预,有效抑制了TBI所致小鼠神经元细胞的自噬和凋亡;2.TBI后小鼠神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在显着增加,CGRP干预后,减少了TBI小鼠颅脑损伤部位的胶质纤维酸性蛋白的出现,保护神经细胞功能。第四部分AKT/m TOR信号通路参与了外源性CGRP对神经元细胞自噬和凋亡的调控目的:通过利用CGRP干预TBI小鼠模型,在信号通路层面探讨CGRP对自噬和凋亡相关通路蛋白的调控情况,进一步探讨CGRP对自噬和凋亡的调控机制。方法:通过CGRP干预TBI小鼠模型,采用蛋白质印迹法（Western Blot法）,测定CGRP干预前后挫伤灶局部脑组织的AKT/m TOR、Fox O3a通路相关标志蛋白的变化情况,并对比CGRP干预前后的蛋白表达变化差异。结果:1.CGRP对AKT/m TOR通路的影响TBI术后导致了小鼠脑神经元细胞内p-Akt/Akt和p-m TOR/m TOR水平降低,TBI+CGRP组和TBI组均低于sham组,差异显着,有统计学意义。CGRP使这两者比值均升高。其中,CGRP对p-Akt/Akt激活作用较明显,术后1、3、5、7天四个时间点,TBI+CGRP组的p-Akt/Akt相比TBI组表达升高,差异显着,有统计学意义;CGRP对p-m TOR/m TOR激活作用较弱,术后第1、3天TBI+CGRP组p-m TOR/m TOR相比TBI组,差异显着,有统计学意义;术后第5、7天TBI+CGRP组p-m TOR/m TOR相比TBI组,差异不显着,无统计学意义;同时,Akt/m TOR信号的激活也在TBI后逐渐增强。2.CGRP对Fox O3a表达的影响TBI术后细胞核中Fox O3a蛋白水平显着升高,而细胞浆中Fox O3a蛋白水平显着降低,证实TBI导致了小鼠脑神经元细胞内Fox O3a蛋白分布的变化。CGRP使细胞核内Fox O3a增加逐渐减弱,而胞浆中Fox O3a逐渐升高。细胞核中Fox O3a蛋白表达情况可见,TBI+CGRP组的Fox O3a蛋白表达低于TBI组,差异显着,有统计学意义;而细胞浆中Fox O3a表达情况可见,TBI术后1、3、5、7天四个时间点,TBI+CGRP组的Fox O3a蛋白表达高于TBI组,差异显着,有统计学意义。小结:1.TBI抑制了Akt/m TOR信号通路的激活,对神经元细胞有损伤作用;外源性CGRP干预促进了Akt/m TOR信号通路的激活,导致了神经元细胞自噬和凋亡的降低,起到了脑保护作用。2.TBI促进了Fox O3a蛋白向神经元细胞核内转移,对神经元细胞有损伤作用;外源性CGRP干预可缓解细胞核内的Fox O3a升高趋势,保护神经元细胞。结论:1.临床TBI患者血清样本中CGRP变化趋势为先迅速降低然后逐渐升高,约24小时到达最低点,大约在14天前后达高峰,与动物模型变化趋势相同。2.血清CGRP水平可以预测TBI患者的预后不良及死亡情况,而且该预测的效能较高。CGRP高水平组远期预后、存活率优于CGRP低水平组;存活患者血清CGRP水平高于因TBI死亡的患者。CGRP可以作为TBI预后不良及死亡评估的参考指标。3.根据Feeney重物下降法,可建立标准、可靠的颅脑挫伤动物模型,术后正常喂养及观察行为学变化,确认TBI模型建立。4.CGRP干预,减低了创伤性颅脑损伤鼠的神经功能损伤,减低了创伤性颅脑损伤挫伤灶的损伤面积;减低了创伤性颅脑损伤后脑水肿的程度,减少了TBI后脑水肿的持续时间;减轻了TBI后血脑屏障的破坏程度;通过蛋白印迹法,可见TBI+CGRP组脑组织中CGRP蛋白表达水平明显高于TBI组,提示脑室注射联合尾静脉注射的外源性干预途径有效可靠。5.TBI后小鼠神经细胞自噬和凋亡水平增加,神经胶质纤维酸性蛋白GFAP增加;CGRP的干预有效抑制了TBI所致小鼠神经元细胞的自噬和凋亡,减少了TBI小鼠颅脑损伤部位GFAP的表达。6.TBI抑制了Akt/m TOR信号通路的激活,导致了神经元细胞自噬和凋亡水平升高,同时促进了Fox O3a蛋白向细胞核内转移,对神经元细胞有损伤作用;相反,外源性CGRP干预可促进Akt/m TOR信号通路的激活,抑制了神经元细胞自噬和凋亡,缓解了细胞核内的Fox O3a升高趋势,起到了脑保护作用。
李军[2]（2020）在《不同经期偏头痛患者血清雌激素及CGRP含量的变化》文中研究指明目的:观察不同经期偏头痛患者血清中雌激素水平和CGRP含量的变化,明确雌激素和CGRP对女性偏头痛患者发作的影响。方法:选取2016年8月至2017年12月84例经临床确诊的女性偏头痛患者作为研究对象,同时选择82例年龄相匹配的无偏头痛疾病及家族史的健康女性做为对照组:女性偏头痛患者分为单纯月经性偏头痛、相关月经性偏头痛和绝经期偏头痛三组;采取各组患者偏头痛发作期与健康女性对照组不同时间的静脉血,应用酶联免疫法测定各组血清雌激素和CGRP含量,对各组数据进行统计学处理,P<0.05为差异有统计学意义。结果:（1）三组患者的CGRP含量与对照组比较,具有显着性差异（t=-6.354,P<0.05）。（2）84例女性偏头痛患者的雌激素水平与CGRP含量呈负相关（Pearson相关性系数=-.946**）,具有统计学意义。（3）女性单纯月经性偏头痛组雌激素含量与对照组比较有统计学意义（t=-5.922,P=0.000、P<0.05）;女性月经相关性偏头痛组雌激素含量与对照组比较无统计学意义（t=-1.444,P=0.154、P>0.05）;女性绝经期偏头痛组雌激素含量与对照组比较无统计学意义（t=2.375,P=0.121、p>0.05）;女性偏头痛亚组CGRP含量与对照亚组比较均有统计学意义（t=-11.882,P<0.05）。结论:（1）偏头痛组和对照组的雌激素含量比较有显着差异,（t=-6.274,P<0.05）,证明雌激素与女性偏头痛的发作有密切关系。（2）偏头痛组的雌激素含量和CGRP含量具有负相关关系（t=4.525,P<0.05）,证明雌激素与女性偏头痛的发作有密切关系,可能通过升高CGRP含量而发挥致头痛作用。（3）雌激素含量对于单纯月经性偏头痛有影响,对月经相关性偏头痛和绝经后偏头痛患者的影响不明确,CGRP含量对于所有偏头痛患者均有影响,说明偏头痛的头痛发作与CGRP含量增高有直接关系。
王萌萌[3]（2019）在《基于蛋白质/代谢组学的耳穴综合疗法治疗偏头痛的机制研究》文中提出目的:探讨耳穴综合疗法治疗偏头痛的临床疗效,同时采用蛋白质组学和代谢组学技术,研究耳穴综合疗法治疗偏头痛的分子生物学机制,进一步完善耳穴综合疗法对偏头痛的干预机制。方法:对耳穴综合疗法治疗偏头痛进行临床疗效评价。分别应用蛋白质组学TMT（Tandem Mass Tag）技术和代谢组学UPLC-Q-Exactive MS/MS技术对偏头痛受试者治疗前、后的血浆进行对比检测,并应用酶联免疫吸附测定技术（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）进行蛋白验证。结果:（1）耳穴综合疗法可显着降低偏头痛患者头痛积分和VAS得分,有效缓解偏头痛,临床总有效率达93.33%,8周后随访,疗效稳定,复发率低。（2）蛋白质组学发现偏头痛患者较正常人有IL-6R、PF4、SOD1等14个显着上调蛋白,有SASH1、IGKV2-29、SELL等11个显着下调蛋白,富集到KEGG通路有趋化因子信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用通路;耳穴综合疗法治疗后SASH1、ZBED1显着上调,有IL-6R、YWHAE、NME2等12个显着下调蛋白,富集到KEGG通路有人巨细胞病毒感染通路、PI3K-AKT信号通路。（3）代谢组学发现偏头痛患者较正常人有L-赖氨酸、7-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤等37个显着上调代谢物,多巴胺、酪胺、戊二酸盐等19个显着下调代谢物,富集到亚油酸代谢、咖啡因代谢等11条通路;耳穴综合疗法治疗后有L-天冬氨酸、L-酪氨酸、庚二酸盐等10个显着上调代谢物,L-赖氨酸、7-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤等16个显着下调代谢物,富集到赖氨酸降解、苯丙氨酸代谢等8条代谢通路。结论:耳穴综合疗法治疗偏头痛的临床疗效确切,远期疗效稳定,值得推广应用;其作用机制可能与SASH1、IL-6R、YWHAE等多个蛋白和L-酪氨酸、L-赖氨酸等代谢产物的参与相关,涉及到人巨细胞病毒感染通路、PI3K-AKT信号通路、花生四烯酸代谢、咖啡因代谢等多条信号传导通路的改变,为今后深入探究耳穴综合疗法治疗偏头痛的作用机制提供了参考依据。
张翔飞[4]（2019）在《阴离子盐及钙添加对围产期奶牛血钙稳衡与脂肪代谢的影响》文中研究表明奶牛围产期是其生产周期中的关键阶段。奶牛由于围产期胎儿发育、分娩以及泌乳启动等一系列生理变化影响,养分摄入不足以满足机体需求,易诱发能量负平衡（NEB）。NEB条件下奶牛需要动员体储尤其是脂肪组织氧化分解提供能量,但其过度动员可引起肝脏损伤,酮体积累等,导致酮病、脂肪肝成为围产期奶牛的高发疾病。Ca在机体内肌肉收缩、细胞信号传导等过程中发挥重要作用,奶牛产后低血钙可进一步影响产后采食恢复、失重与其他疾病如酮病发生率,提示围产期奶牛血Ca与体储动员间的潜在关系。阴离子盐添加对奶牛产后血钙水平具有一定提升作用,但阴离子盐及其搭配高Ca如何作用于机体血钙稳衡以调控钙代谢,并影响奶牛围产期脂肪代谢有待进一步研究。因此,本研究以围产期荷斯坦奶牛为研究对象,比较产后不同血Ca水平奶牛在生产性能、血液代谢物以及钙调激素的差异,进一步考察围产前期日粮添加阴离子盐与Ca通过钙稳衡机制对围产期奶牛钙代谢的影响,及其对奶牛脂肪代谢途径的调控作用,促进围产期健康过渡。试验一不同产后血钙水平奶牛生产性能、血液生化及钙调激素比较研究本试验以30头预产期相近、3胎次,体重为811.7±72.1 kg的围产期荷斯坦奶牛为试验对象,产前及产后饲喂相同围产前期日粮与泌乳日粮,以产后24 h血清Ca水平作为分组依据,在30头试验牛中选取8头亚临床低血钙症奶牛（血Ca处于1.38～2.0mmol/L范围）,被分入低血钙组（LC,n=8）,按相近初始体重和体况评分（BCS）,选取8头正常血钙水平奶牛作为正常血钙组（2.0～2.5 mmol/L,NC,n=8）。每头牛试验期为从产前28 d至产后28 d结束,研究结果显示:（1）在试验牛中,奶牛产后低血钙的发生率为26.67%。LC奶牛围产后期体重与NC组相比多损失24.76 kg,且泌乳量显着低于NC组（P<0.05）。（2）LC奶牛产后24h血清钙调激素中1,25（OH）2D3显着低于NC组（P<0.05）,而强离子差（SID）显着高于NC组（P<0.05）。（3）LC奶牛在产后血清胆固醇（CHOL）、总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）水平上显着低于NC组（P<0.05）,非酯化脂肪酸（NEFA）与β羟丁酸（BHBA）浓度显着高于NC组（P<0.05）;相关分析发现,奶牛围产期血Ca水平与血清NEFA、BHBA水平呈显着负相关（r=-0.49,P<0.01;r=-0.26,P<0.05）;以上结果表明,产后低血钙奶牛围产期生产性能降低,钙调激素中1,25（OH）2D3水平较低,血清强离子差较高。产后血Ca水平与机体脂肪代谢物NEFA、BHBA存在显着负相关,低血钙奶牛的表现出更高的脂肪动员和酮体生成。试验二围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛生产性能、血钙稳衡与脂肪代谢的影响本试验选取84头2-5胎次、体重为771.70±94.08 kg的妊娠后期荷斯坦奶牛,根据随机区组设计,按上一胎泌乳量、胎次、体况评分、预计产犊时间分为28个区组,每个区组3头,随机分入3个不同围产前期日粮组:对照组（CON,基础日粮）:DCAD+10.11 m Eq/100 g、Ca 0.4%,阴离子盐添加组（ND,添加阴离子盐）:DCAD-24.40 m Eq/100 g、Ca 0.4%,阴离子盐高Ca添加组（NDCA,添加阴离子盐与Ca）:DCAD-24.44 m Eq/100 g、Ca 1.95%;每个处理组28头,分娩后饲喂同一泌乳日粮。每头牛试验期从产前28 d至产后28 d结束,分析结果显示:（1）NDCA组奶牛产前DMI显着高于ND组（P<0.05）。产后阶段,与CON相比,ND组奶牛平均DMI增加了5.64%,NDCA组奶牛产后DMI显着增加了7.65%（P<0.05）,泌乳净能（NEL）、CP、NDF、ADF、Ca、P养分摄入量以及总能（GE）、DM、CP表观消化率显着升高（P<0.05）;围产后期体重损失NDCA、ND与CON相比降低了33.60%、24.19%,且NDCA组BCS损失在各组间最低（P<0.05）。NDCA组奶牛初乳乳脂率、乳糖率显着提高,体细胞数（SCC）降低（P<0.05）。围产后期ND与NDCA组奶牛常乳乳糖率显着提高、SCC降低（P<0.05）,NDCA组泌乳量显着高于其他组（P<0.05）。（2）ND、NDCA奶牛围产期血Ca水平显着提高,同时显着增加了奶牛产前的尿Ca排泄（P<0.05）,围产后期低血钙（Ca<2.0 mmol/L）发生率降低,产乳热发生率以NDCA组最低。ND、NDCA组奶牛产前及产犊时尿液p H显着降低（5.5-6.0,P<0.05）,产犊时血液p H、HCO3-与SID显着低于CON（P<0.05）;钙调激素中甲状旁腺素（PTH）、甲状旁腺素相关肽（PTHr P）无显着变化,1,25（OH）2D3及维生素D结合蛋白（VDBP）水平显着高于CON（P<0.05）,其调控下游的骨动员活动标志分子:Ⅰ型胶原C端肽（CTX I）、羟脯氨酸（HYP）在产后24 h显着升高（P<0.05）,BGP:CTX I下降（P<0.05）,同时Ca表观消化率显着提高（P<0.05）。（3）ND和NDCA显着改善了奶牛围产后期能量负平衡（NEB,P<0.05）,NDCA组在产后1周的EB高出CON组17.66%、ND组6.37%。脂肪代谢相关调控激素中,ND与NDCA组奶牛产后脂联素（APN）显着降低（P<0.05）,胰岛素样生长因子I（IGF-I）激素分泌升高（P<0.05）;此外,NDCA显着提高了胰岛素（INS,P<0.05）,降低胰高血糖素（GC）分泌（P<0.05）。血清脂肪代谢物中NEFA水平在ND、NDCA组奶牛中显着降低（P<0.05）。（4）脂肪合成相关酶中脂肪酸合成酶（FAS）酶活在ND与NDCA组中显着升高,NDCA组乙酰辅酶羧化酶（ACC）显着高于其他组（P<0.05）;脂肪氧化分解相关酶中ND与NDCA组奶牛激素敏感酯酶（HSL）、酰基辅酶A氧化酶（ACOX）酶活较CON组显着降低,且NDCA组显着低于其他组（P<0.05）。脂肪酸氧化过程中活化分子辅酶A及酰基辅酶A合成酶（ACS）在ND、NDCA组中显着降低（P<0.05）,转运分子肉碱、酰基肉碱及氧化产物乙酰Co A、BHBA、乙酰乙酸在NDCA组显着降低（P<0.05）。肝脏脂肪转运蛋白中NDCA组奶牛血清极低密度脂蛋白（VLDL）、载脂蛋白（Apo B100）水平显着提高（P<0.05）,NDCA进一步显着降低了奶牛肝损伤指标碱性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TB）水平（P<0.05）。（5）ND、NDCA组奶牛产后免疫球蛋白Ig A、M水平显着升高（P<0.05）,机体LPS及炎性细胞因子白介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的生成显着降低（P<0.05）;NDCA在产后7 d进一步显着降低LPS及炎性细胞因子（P<0.05）。奶牛产后与低血钙、感染相关疾病的发病率及不良健康评分以NDCA组最低。以上结果表明,产前日粮添加阴离子盐可促进奶牛产后采食量恢复,缓解NEB;阴离子盐结合高Ca进一步提高围产后期采食量及养分摄入消化,体储损失降低,泌乳性能提高。添加阴离子盐提高了奶牛围产期血Ca水平,通过改变体液酸碱平衡,使血钙稳衡机制中1,25（OH）2D3羟化及转运增强,进一步从骨Ca动员与消化道Ca吸收改善了围产期奶牛血钙稳衡。添加阴离子盐提高脂肪合成调控相关激素分泌和酶活;降低了脂肪分解调控激素、酶活、NEFA及其氧化活化,阴离子盐补充高Ca进一步降低分解酶酶活、脂肪酸转运、氧化及酮体生成;并提高肝脏脂肪转运蛋白,缓解了肝脏损伤。阴离子盐添加增强了奶牛产后免疫功能、降低炎症反应,产后疾病发生率以阴离子盐高Ca组最低。试验三围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛产后血清代谢组的影响基于试验二阴离子盐及钙添加对奶牛产后NEB与脂肪代谢的影响结果,本试验通过代谢组学分析方法进一步探索围产前期日粮添加阴离子盐及钙对围产期奶牛脂肪代谢方面影响的内在代谢途径。试验随机选取CON、ND、NDCA组奶牛各8头,通过LC-MS方法分析了奶牛产后24 h血清代谢组变化。结果发现:（1）ND、NDCA显着降低了奶牛产后血清中长链脂肪酸水平（P<0.05）;NDCA添加显着影响了甘油磷脂代谢通路（P<0.05）,其中参与肝脏脂肪转运的甘油磷脂酰胆碱水平显着升高（P<0.05）,同时显着降低脂肪酸代谢物:甲基丁酰肉碱、3羟基-3甲基戊二酸和BHBA水平（P<0.05）,NDCA与ND相比进一步显着降低了血清脂肪酸癸二酸、10Z-十九烯酸浓度（P<0.05）。（2）ND显着影响了泛酸辅酶A生物合成途径,提高了其代谢通路中泛酸分解代谢产物尿嘧啶和N-氨基甲酰-β-丙氨酸及缬氨酸水平（P<0.05）,而ND与NDCA组奶牛产后血清中泛酸浓度显着降低（P<0.05）,参与脂肪酸氧化的辅酶A前体物泛酸生物合成减弱,而促进脂肪合成的烟酰胺水平显着升高（P<0.05）。（3）NDCA显着提高了三羧酸循环代谢通路与乙醛酸-二羧酸代谢通路中乌头酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸的浓度（P<0.05）,增强了参与脂肪氧化分解产物利用的三羧酸循环代谢及乙醛酸-二羧酸代谢。（4）ND与NDCA显着影响了奶牛产后精氨酸脯氨酸代谢通路（P<0.05）:其中NDCA组尿素循环代谢中间产物精氨酸、瓜氨酸、N（2）-乙酰-L-鸟氨酸浓度显着下降（P<0.05）,尿素循环减弱,并进一步提高了限制性氨基酸蛋氨酸浓度。（5）生物标志物分析显示:谷氨酰胺、吡咯烷酮羧酸、尿嘧啶、尿苷和泛酸5种代谢物可作为围产前期日粮添加阴离子盐对奶牛产后机体代谢影响的生物标志物;肌酸、棕榈酰甘氨酸、甘油磷脂酰胆碱、丙氨酸、蛋氨酸、N（2）-乙酰-L-鸟氨酸、烟酰胺和泛酸8种代谢分子为阴离子盐高Ca添加对奶牛产后机体代谢影响的生物标志物。以上结果表明,添加阴离子盐降低了奶牛产后脂肪动员的长链脂肪酸生成,影响泛酸辅酶A生物合成途径,参与脂肪酸氧化活化的辅酶A前体物泛酸合成下降;阴离子盐搭配高Ca进一步降低奶牛产后血清脂肪酸及其氧化产物,并影响甘油磷脂代谢通路提高其中参与肝脏脂肪转运的甘油磷脂胆碱水平,增强参与脂肪分解产物利用的三羧酸循环代谢及乙醛酸-二羧酸代谢通路,尿素循环减弱。综上所述,产后低血钙奶牛生产性能降低,疾病发生率升高,机体脂肪动员增加。围产前期日粮添加阴离子盐能够促进奶牛产后采食量恢复,提高常乳乳品质;阴离子盐结合高Ca可进一步显着提高奶牛产后采食量及养分摄入消化,围产后期体储损失降低,泌乳性能显着提高。阴离子盐添加通过改变体液酸碱平衡,促进了血钙稳衡机制中1,25（OH）2D3的羟化及转运,增强骨Ca动员与消化道Ca吸收,改善了围产期奶牛血钙稳衡,低血钙发生率下降。阴离子盐添加缓解了奶牛产后NEB,降低脂肪分解相关激素和酶活、及产物长链脂肪酸生成,通过泛酸辅酶A生物合成途径减弱脂肪酸活化,从而减少脂肪动员;阴离子盐结合高Ca进一步降低脂肪酸氧化过程中转运分子、下游氧化酶酶活与氧化产物、酮体生成,促进参与肝脏脂肪转运的甘油磷脂代谢通路与脂肪转运脂蛋白,并增强参与脂肪分解产物利用的三羧酸循环代谢,缓解了肝脏损伤与酮体积累。阴离子盐添加提高了奶牛产后机体免疫、降低了炎症反应,阴离子盐结合高Ca添加使奶牛产后疾病发生率及不良健康评分降低。
孙玉[5]（2019）在《右向左分流的有先兆偏头痛患者血浆降钙素基因相关肽与内皮素含量的相关性》文中研究表明目的:研究在有先兆偏头痛发作期及发作间期和健康人群血浆降钙素基因相关肽及内皮素含量,探讨存在与不存在右向左分流的偏头痛患者间的区别与联系,通过临床分析探索偏头痛的发病机制。方法:选取85例于2017年11月至2018年12月在佳木斯大学附属第一医院神经四科门诊确诊为“有先兆偏头痛”的患者,其中男性患者28例,女性患者57例,年龄18-55岁（34.64±9.21岁）,入组均符合有先兆偏头痛诊断符合2013 IHS国际头痛分类第三版。对纳入实验的患者行颅内段血管彩色多普勒超超及发泡试验检查,根据检查结果确定患者有无右向左分流情况,将85例偏头痛患者分为存在RLS的偏头痛患者组（RLS组）及不存在RLS的偏头痛患者组（非RLS组）,以发作开始后72小时为界,按照发病时间将患者分为发作期（A期）及发作间期（I期）,同时选取同期门诊健康体检者30例作为健康组,其中男性12例,女性18例,年龄19-50岁（36.67±6.79岁）。测定所有入组者外周血降钙素基因相关肽及内皮素的含量。结果:1.偏头痛患者组在发作期外周血降钙素基因相关肽及内皮素的含量显着增高,且与健康对照组之间存在统计学差异（p<0.01）。2.偏头痛患者组在发作间期外周血降钙素基因相关肽及内皮素的含量增高,且与健康对照组之间存在统计学差异（p<0.05）。3.在偏头痛发作间期,RLS组与健康组相比,外周血降钙素基因相关肽及内皮素含量升高,两者之间存在统计学差异（p<0.05）。4.在偏头痛发作间期,非RLS组与健康组相比,外周血降钙素基因相关肽的含量及内皮素含量升高,但两者之间无统计学差异（p>0.05）。5.健康组（r=0.536,p<0.05）及RLS组、非RLS组偏头痛发作间期（r=0.706,p<0.05;r=0.495,p<0.05）,降钙素基因相关肽和内皮素含量变化呈正相关。结论:1.本实验提示降钙素基因相关肽及内皮素水平变化与有先兆偏头痛的发作密切相关。2.右向左分流的有先兆偏头痛患者外周血降钙素基因相关肽及内皮素在偏头痛发作间期升高。3.pearson相关性分析提示健康人与偏头痛发作间期的外周血降钙素基因相关肽及内皮素存在着一定平衡关系,在偏头痛发作这种病理情况下,两者失去平衡。
樊凤娇[6]（2019）在《基于骨免疫的乳铁蛋白调控骨重建机制研究》文中指出乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）是牛乳中一种微量的多功能糖蛋白,既可以调控骨骼生长也可以调控免疫系统,但目前在去卵巢小鼠体内调控骨重建的相关机制并未阐述完全。因此,本研究从骨免疫学的角度,研究乳铁蛋白对骨质疏松模型小鼠骨重建的影响以及乳铁蛋白在小鼠体内的消化和吸收情况,旨在阐明乳铁蛋白通过骨免疫的方式调控骨重建的机制。首先,研究了乳铁蛋白对小鼠骨骼系统的影响。建立了骨质疏松小鼠模型,通过双能X线吸收法、微计算机断层扫描技术和三点弯曲法等,得到结果如下:乳铁蛋白可以明显抑制去卵巢小鼠体重的增加,使去卵巢小鼠的全身骨密度提高了11.93%,使其血清中碱性磷酸酶活性升高了80.76%和抗酒石酸酸性磷酸酶活性降低了60.38%。同时,乳铁蛋白提高股骨的钙磷含量,改善股骨的骨生物力学以及通过提高股骨骨小梁的骨体积分数、厚度、数量和减少结构模型指数,从而改善股骨的微观结构。乳铁蛋白促进骨生成且抑制骨吸收,调控去卵巢小鼠骨系统的平衡。其次,研究了乳铁蛋白对小鼠骨免疫系统的影响。通过液相悬浮多因子芯片技术对血清中的免疫因子进行测定,发现血清中IL-1α、IL-2、IL-3、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12（p70）、IL-13、IL-15、IFN-γ的含量升高、而IL-1α和IL-9含量下降,其中IL-5、IL-10、IL-12（p70）和IFN-γ可影响RANKL和OPG的分泌。通过酶联免疫吸附法检测RANKL和OPG的表达,发现乳铁蛋白可以使小鼠血清和T淋巴细胞分泌的RANKL/OPG比值分别下降57.14%和21.57%。同时,乳铁蛋白可以显着促进巨噬细胞和B淋巴细胞增殖,并能通过影响胸脾指数进而调节小鼠的免疫功能。由此可知,乳铁蛋白通过调控骨免疫系统的平衡,进而调控骨重建的过程。接着,研究了乳铁蛋白在小鼠体内的消化和吸收情况。分别采用液相色谱-质谱联用法和毛细管电泳-质谱联用法,对小鼠胃肠道中的乳铁蛋白肽进行定性分析,在小鼠胃肠道内容物中共鉴定到578条不同的乳铁蛋白肽。通过生物信息学分析,筛选出活性肽LRPVAAEIY（LF-LR）。采用体外Caco-2单层细胞吸收模型,通过质谱对肽LF-LR进行定量分析,发现乳铁蛋白肽LF-LR通过内吞的方式被小肠上皮细胞吸收且具有良好的吸收率。同时,在小鼠血清中可以鉴定到乳铁蛋白肽LF-LR的存在,表明乳铁蛋白肽LF-LR可能是乳铁蛋白的活性片段之一。最后,研究了乳铁蛋白肽LF-LR对骨免疫系统的影响。基于上述胃肠道中乳铁蛋白肽的研究结果,利用MTT实验和分子对接方法对其中的五条肽进行了研究。结果表明,500 ng/mL乳铁蛋白肽LF-LR可显着促进成骨细胞增殖且可以与整合素受体α5β1结合调控成骨细胞的分化。同时乳铁蛋白肽LF-LR中Leu和Pro可与TRAF6上的Glu448、Met450、Phe471和Tyr473结合,可以阻断TRAF6与RANK的结合,从而调控RANKL/RANK/OPG信号通路。同时,含有PEQ三种氨基酸的乳铁蛋白肽KESPQTHY、ESPQTHYY、ISQPEWFK和KPVTEAQ,也可以通过氢键和静电用作用与TRAF6结合,均具有潜在的通过骨免疫通路调控骨重建的活性,有待进一步研究。本研究阐述了乳铁蛋白经由免疫学途径调控骨重建的活性机制,有效地丰富了乳铁蛋白的生物学内涵,为乳铁蛋白在功能食品领域的应用奠定了一定的理论基础。
赖满香[7]（2018）在《梓醇促进BMSCs增殖分化及Hedgehog信号通路的研究》文中研究指明目的骨质疏松（Osteoporosis,OP）是一种以骨强度下降,骨微观结构改变和骨脆性增加为特征的慢性全身性骨骼系统疾病,是生理衰老在骨骼方面的一种特殊表现。随着我国社会老龄化进程的加快和我国平均寿命的延长,OP的发病率不断上升,预计到2020年我国将成为世界上拥有OP患者最多的国家,因此,寻求其发病机理和安全有效的防治药物显得尤为重要。骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）是来源于骨髓的一类多潜能成体干细胞,其向成骨细胞（Osteoblasts,OB）分化能力下降是造成OB生成不足,骨形成降低,发生OP的主要病机之一。中医学认为“肾藏精,主骨,生髓”,即骨髓由肾精所化生,肾精充足,骨髓生化有源,骨骼得养,则骨骼生长发育正常,强健有力,若肾精亏虚,则骨髓生化乏源,不能充养骨骼则致骨髓空虚,发为OP,这一理论与现代医学BMSCs向成骨分化能力下降造成OP的发生极其相似,因此,现代医学认为BMSCs可能是肾精在细胞水平上的表现形式,并多从补肾中药入手,寻找能够促进BMSCs的增殖及诱导其向成骨分化的有效药物,以促进骨的形成,延缓OP的发生。梓醇是传统补肾滋阴中药地黄的有效活性成分,研究表明,其对神经系统疾病,糖尿病、心血管疾病,骨质疏松等多种疾病均体现出一定的防治作用。本研究观察梓醇对BMSCs增殖、骨向分化的影响,以及观察它对分化相关的Hedgehog信号通路的影响,明确梓醇作用于BMSCs而影响防治OP的具体靶点,从一条新途径阐明梓醇对OP的调节机制,对评价梓醇防治OP的有效性提供细胞分子学依据,另一方面丰富中医学理论“肾藏精,主骨,生髓”理论的现代科学内涵,也为中医养生本草的现代研究提供实验依据。方法1.采用全骨髓贴壁法分离和培养BMSCs;2.通过倒置显微观察BMSCs形态学特性、电子显微镜观察BMSCs微观结构,CCK-8法检测BMSCs生长曲线,流式细胞仪检测BMSCs的细胞周期及细胞表面标志分子CD29、CD90、CD45、CD80,ALP染色和茜素红染色鉴定其成骨分化特性,油红O染色鉴定其成脂特性;3.CCK-8方法检测不同浓度梓醇（1×10T3mol/L～1×10-9mol/L）对BMSCs的增殖活性的影响;4.pNPP法检测不同浓度梓醇（1×10-3mol/L～1 ×10-9mol/L）对BMSCs碱性磷酸酶活性的影响,以确定梓醇最佳的促BMSCs骨向分化浓度;5.以最佳促骨向分化浓度的梓醇对BMSCs进行干预,实验分四组:对照组（control group）:BMSCs细胞以含15%胎牛血清的α-MEM完全培养液培养;梓醇组（catalpol group）:含15%胎牛血清的α-MEM完全培养液培养的BMSCs细胞中加入最佳浓度的梓醇;经典组（classic group）:BMSCs细胞中加含15%胎牛血清的成骨诱导液;联合组（combination group）:BMSCs细胞中加含15%胎牛血清的成骨诱导液+梓醇最佳作用浓度。6.ALP试剂盒检测各实验组对BMSCs ALP活性的影响,茜素红染色计数矿化结节的方法评价梓醇对BMSCs细胞矿化的影响,ELISA法检测梓醇对BMSCs BGP的影响;7.QPCR技术检测各实验组干预BMSCs骨向分化过程中Hedgehog信号分子Shh、IhhmRNA 的表达;8.Western blotting技术检测各实验组干预BMSCs骨向分化过程中Hedgehog信号传导通路中跨膜受体Ptch1、Smo蛋白的表达和下游核转录因子Gli1蛋白的表达。结果1.分离培养的细胞符合BMSCs的生物学特性,流式细胞仪检测大鼠BMSCs表面标志抗原CD90、CD29表达阳性,CD45及CD80表达阴性,BMSCs经诱导能向成骨细胞、脂肪细胞分化。2.CCK-8方法检测结果显示:细胞培养第1、3、5 d,1×10-3mol/L～1×10-9mol/L浓度范围的梓醇组OD值与空白组比较均有显着升高（P<0.05）;第7 d,1×10-4mol/L～1×10-9 mol/L梓醇组OD值与空白组比较均有显着升高（P<0.05）,而1×10-3mol/L梓醇组OD值与空白组无显着性差异（P>0.05）;第9 d,1 ×10mol/L～1 ×10-9 mol/L梓醇组OD值与空白组比较均有显着升高（P<0.05）,而1×10-3mol/L、1×10-4mol/L梓醇组OD值与空白组比较无显着性差异（P>0.05）;第 11 d,1×10-5mol/L 和 1×10-6mol/L 的梓醇组 OD 值与空白组比较显着升高（P<0.05）,其它各浓度梓醇组OD值无显着性差异（P>0.05）。3.pNPP法检测结果显示:第3、18、21 d,不同浓度的梓醇组的ALP活性与空白组相比均无显着性差异（P>0.05）;第6 d,1×10-4mol/L浓度的梓醇与空白组相比能显着提高 BMSCs ALP 活性（P<0.05）;第 9 d,1 × 1 0-3mol/L～1 × 1 0-5mol/L浓度的梓醇与空白组相比能显着提高BMSCs ALP活性（P<0.05）;第 12、15 d,1×10-3mol/L、1×10-4mo1/L 浓度的梓醇与空白组相比均能显着提高BMSCs ALP活性（P<0.05）,且以1×10-4mol/L作用最显着,故以1×10-4 mol/L的梓醇浓度为后续实验的最佳给药剂量。4.ALP试剂盒检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的ALP活性与对照组比较均显着升高（P<0.05）,但梓醇组的ALP活性低于经典组（P<0.05）,联合组的ALP活性与经典组比较均无显着差异（P>0.05）。5.茜素红染色计数结果显示:梓醇组、经典组和联合组的矿化结节数量与对照组比较显着升高（P<0.05）,但梓醇组的ALP矿化结节数量低于经典组（P<0.05）,联合组的矿化结节数量与经典组比较无显着差异（P>0.05）。6.ELISA法检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的BGP含量与对照组比较显着升高（P<0.05）,但梓醇组的BGP含量低于经典组（P<0.05）,联合组的BGP含量与经典组比较无显着差异（P>0.05）。7.QPCR检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的Shh mRNA表达与对照组比较显着升高（P<0.05）,梓醇组的Shh mRNA表达低于经典组（P<0.05）,联合组与经典组的Shh mRNA表达无显着差异（P>0.05）;梓醇组、经典组和联合组的Ihh mRNA表达与对照组比较均无显着差异（P>0.05）。8.Western blotting检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的Ptch1、Smo和Gli1蛋白表达与对照组比较显着升高（P<0.05）;梓醇组和联合组的Ptch1、Smo和Gli1蛋白表达均低于经典组（P<0.05）;梓醇组的Ptch1、Smo和Gli1蛋白表达与联合组无显着性差异（P>0.05）。结论1.采用全骨髓贴壁法可获得增殖能力强,纯度高的BMSCs;2.不同浓度的梓醇对BMSCs的增殖具有明显的促进作用;3.一定浓度范围（1 ×10-3～1 ×10-5mol/L）的梓醇可以诱导BMSCs向成骨分化,尤以1 × 10-4mol/L作用明显,并能提高BMSCs ALP活性、矿化结节数目和BGP的含量;4.梓醇促BMSCs的骨向分化过程中Hedgehog信号传导通路上游Ihh信号分子可能不参与调控;5.梓醇可通过上调Hedgehog信号传导通路中上游Shh信号分子、膜受体Ptch1、Smo和核转录因子Gli1来促进BMSCs的骨向分化,从而防治OP。
张贝贝[8]（2018）在《精氨酸对肉仔鸡肠道黏膜损伤的缓解作用及机理研究》文中指出本研究通过六个试验研究了日粮添加精氨酸对肠道致病菌感染的肉仔鸡肠道黏膜损伤的影响及机理。试验一旨在研究肉仔鸡空肠物理屏障相关基因表达的发育性变化。试验于肉仔鸡第1、7、14、21、28和35日龄采集空肠组织检测紧密连接和粘附连接蛋白的mRNA表达量。结果显示:1日龄时claudin-1表达显着高于其余日龄,而其他日龄之间无显着差异。Claudin-2表达在前14天逐渐增加,14-21日龄急剧下降,21-35日龄为平台期。Claudin-3表达在1-7日龄为平台期,7-21日龄逐渐升高,21-35日龄逐渐下降。Claudin-5在前21天逐渐增加,21-28日龄逐渐下降,28-35日龄为平台期。Occludin和ZO-1的发育模式相似,在1-14日龄逐渐增加,14-35日龄为平台期。ZO-2在前28天逐渐增加,28-35日龄逐渐下降。ZO-3和E-cadherin的发育模式相似,前21天逐渐增加,后 14 天逐渐降低。此外,Claudin-3、claudin-5、occludin、ZO-1、ZO-2、ZO-3 和 E-cadherin表达随日龄呈现极显着的二次曲线效应,且两两之间皆具有极显着的正相关关系。上述结果表明,1-14日龄是物理屏障相关基因（除claudin-1和claudin-3）表达的上升期,而28-35日龄是平台期（除claudin-3和ZO-2）。物理屏障相关基因表达的相关性可能由于它们结构上的相互作用。试验二旨在探究精氨酸水平与饲喂时间对患坏死性肠炎肉仔鸡的肠道免疫和屏障功能的影响。采用3×2因子随机试验设计,包括3种日粮处理:全期饲喂基础日粮（含精氨酸1.25%）;全期饲喂含精氨酸1.87%日粮;前期（1-8日龄）饲喂基础日粮,后期（9-28日龄）饲喂含精氨酸1.87%日粮。2种攻毒处理为:不感染;或在第10日龄感染球虫,并在14-20日龄感染产气荚膜梭菌。于21和28日龄采样。结果显示攻毒导致肠道损伤,表现为降低血浆D-木糖浓度、提高回肠通透性、促进盲肠食糜中大肠杆菌和产气荚膜梭菌数量;精氨酸添加可缓解上述现象。攻毒降低28日龄空肠sIgA含量,而精氨酸促进其分泌。攻毒显着降低肠道claudin-1和occludinmRNA表达,而精氨酸可抑制这种现象。攻毒上调肠道中claudin-2、IFN-γ、TLR-2和NOD1 mRNA表达量,而精氨酸促进IFN-γ、IL-10和NOD1 mRNA表达量。上述结果表明,精氨酸可以通过促进固有免疫反应和维护肠道屏障功能缓解坏死性肠炎造成的肉仔鸡肠道黏膜损伤,降低产气荚膜梭菌定植。试验全期饲喂含精氨酸1.87%的日粮效果较佳。试验三旨在研究精氨酸对产气荚膜梭菌感染的肉仔鸡肠道炎症反应的影响及机制。采用2×2因子随机试验设计,包含2种日粮精氨酸浓度（1.42%和1.72%）和2个攻毒状态（不感染或14-20日龄感染产气荚膜梭菌）,于21日龄和28日龄采集样品。结果显示产气荚膜梭菌感染显着升高血清降钙素原和尿素氮浓度。精氨酸添加显着降低血清二胺氧化酶、髓过氧化物酶活力和一氧化氮浓度。精氨酸添加缓解了感染引起的血清精氨酸和鸟氨酸浓度的下降,并缓解了感染引起的肠道损伤评分、空肠组织形态损伤、空肠粘膜溶菌酶酶活和iNOS酶活的提高。感染使空肠促炎细胞因子（IL-6、IFN-γ、IL-1β）和抗炎细胞因子（TGF-β）mRNA表达量升高,而精氨酸添加则降低这些细胞因子的表达。感染促进21日龄空肠抗菌肽Cathelicidins（CATH）1和CATH3mRNA表达,而降低28日龄空肠禽β防御素（AvBD）1、AvBD2、CATH3和肝脏表达抗菌肽（LEAP）2mRNA表达量。精氨酸添加降低21日龄AvBD1、AvBD2、CATH1和CATH3mRNA表达量。感染升高空肠碱性氨基酸转运载体（CAT）-1、CAT-2和CAT-3 mRNA表达量,并升高精氨酸分解酶——诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶2（ARG2）、精氨酸脱羧酶（ADC）和精氨酸:甘氨酸脒基转移酶（AGAT）的mRNA表达量;而添加精氨酸显着降低上述3种碱性氨基酸转运载体和4种精氨酸酶的过量表达。精氨酸添加显着减低感染诱导的空肠Janus激酶（JAK）1、JAK2、JAK3、信号转导子和转录激活子（STAT）1和STAT6mRNA的高表达。上述结果表明,日粮精氨酸能预防产气荚膜梭菌感染诱导的肉仔鸡循环精氨酸缺乏,使精氨酸转运和代谢恢复正常,下调激活的JAK-STAT信号通路,从而缓解炎症反应和肠道黏膜损伤。试验四旨在研究精氨酸添加对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道微生物区系组成和功能的影响。试验采用单因素完全随机设计,分为3个处理:对照组、产气荚膜梭菌感染组、饲喂精氨酸添加日粮的产气荚膜梭菌感染组。在14-20日龄进行产气荚膜梭菌攻毒,21日龄采集回肠食糜。结果显示3个处理的微生物区系明显不同,但对照组与精氨酸添加组的微生物结构较为相似。精氨酸能显着缓解产气荚膜梭菌感染引起的厚壁菌门丰度的下降,并显着缓解变形菌门等7种菌门丰度的升高。属水平T-test分析显示,感染引起24个属的相对丰度显着升高,且其中15个属属于变形菌门,精氨酸添加能显着抑制其中23个属。饲喂精氨酸的感染肉鸡与健康肉鸡仅有3个属的丰度显着不同。LEfSe分析显示产气荚膜梭菌攻毒组富含多种变形菌纲,而对照组富含瘤胃球菌科和格氏乳杆菌,感染情况下精氨酸添加组富含梭菌目和乳杆菌目。PICRUST（基于16S rRNA扩增子测序结果预测微生物群落功能）分析显示精氨酸可显着缓解感染引起的大多数微生物基因通路的变化,其中感染引起的代谢、人类疾病和细胞进程基因丰度的上调可被精氨酸显着抑制,感染引起的遗传信息处理和环境信息处理基因丰度的下调可被精氨酸显着促进。以上结果表明,日粮添加精氨酸可提高梭菌目和乳杆菌目等潜在有益菌的数量,减少变形菌门下的有害菌生长,抑制产气荚膜梭菌感染引起的肠道微生物代谢和人类疾病等基因丰度的增加,将感染肉仔鸡的肠道微生物菌群组成和功能调整到与健康肉仔鸡相似。试验五旨在研究精氨酸对鼠伤寒沙门氏菌感染肉仔鸡引起的肠道损伤的缓解作用。采用2×2因子随机试验设计,包含2种日粮精氨酸浓度（1.42%和1.72%）和2个攻毒状态（不感染和8-10、13-16日龄感染鼠伤寒沙门氏菌）。在17和23日龄采集样品。结果显示精氨酸添加降低感染引起的血清二胺氧化酶活力和降钙素原含量的升高。感染降低血清精氨酸浓度,补充精氨酸缓解这一现象。在感染条件下,添加精氨酸提高17日龄血清鸟氨酸和尿素氮含量。精氨酸添加缓解感染造成的肠道形态学损伤。在17日龄,感染提高空肠IL-17mRNA表达量,降低NF-κB、IFN-γ和IL-10 mRNA表达量。精氨酸添加提高空肠IFN-y并降低IL-22 mRNA表达量。在23日龄,感染提高空肠IL-1β、IL-10、IL-17、IL-8和IL-22mRNA表达,精氨酸添加提高空肠IFN-γ和IL-10 mRNA表达量并降低IL-22 mRNA表达量。感染降低17日龄空肠多种抗菌肽mRNA表达量和23日龄空肠LEAP2mRNA表达量,升高23日龄空肠三叶因子（TFF）2mRNA表达量。精氨酸添加升高17日龄空肠TFF2 mRNA表达量,降低23日龄空肠多种抗菌肽表达量但升高LEAP2 mRNA表达量。感染提高空肠CAT-1、CAT-2、CAT-3mRNA表达量,精氨酸添加继续促进三者表达增加。感染显着降低17日龄空肠ARG2 mRNA表达量,提高23日龄空肠ADC和AGAT mRNA表达量,精氨酸添加继续促进23日龄ADCmRNA表达量。以上结果表明,沙门氏菌感染造成循环精氨酸缺乏,促进精氨酸转运,诱导炎症反应。精氨酸添加维护肠道形态,缓解沙门氏菌感染的不利影响,促进精氨酸转运载体表达并调节细胞因子和抗菌肽表达,尤其是促进IFN-y产生,有利于细胞内沙门氏菌的清除。本试验与试验三的结果比较可知,产气荚膜梭菌感染和沙门氏菌感染都可引起机体循环精氨酸缺乏,诱发全身炎症反应和肠道损伤,促进肠道碱性氨基酸转运载体表达。日粮补充精氨酸都可增加机体循环精氨酸浓度,缓解肠道损伤。但两种疾病模型的病理过程不同:产气荚膜梭菌在感染前期即可诱发肠道炎症反应,感染后期肠道炎症反应减弱;而沙门氏菌在感染前期使IFN-γ、NF-κB和大量抗菌肽表达下降,可能有助于沙门氏菌逃避机体免疫系统清除,感染后期诱发肠道炎症反应。精氨酸的调节机制也有所不同:在产气荚膜梭菌感染中,精氨酸缓解了精氨酸分解酶、促炎细胞因子、抗炎细胞因子和抗菌肽等的过度表达,这种调节作用是一致的,可能与提高循环精氨酸浓度进而反馈抑制肠道精氨酸过度转运有关;而在沙门氏菌感染中,精氨酸对不同分子的调节作用不同,精氨酸发挥保护作用可能与促进IFN-γ、增强T细胞数量和功能有关,具体机制有待进一步研究。试验六旨在研究精氨酸对产气荚膜梭菌感染的鸡胚肠上皮细胞炎症反应的影响。结果显示产气荚膜梭菌感染对细胞毒性、IL-1β、IL-6、IL-8和iNOS mRNA表达量的提高具有具有剂量和时间依赖性。适于构建感染模型的剂量和时间分别是感染复数为1,处理4h。50和/或400μM精氨酸可显着抑制产气荚膜梭菌感染引起的细胞毒性、碱性氨基酸转运载体（CAT-1和CAT-3）、iNOS和炎性细胞因子（IL-1β、IL8和IL10）的基因表达量的升高,继续升高感染刺激的IFN-γ和ARG2 mRNA表达。400μM比50μM精氨酸更利于缓解炎症。以上结果表明,精氨酸可通过缓解产气荚膜梭菌感染诱导的CATs、iNOS及炎性细胞因子的增加来减少鸡胚肠上皮细胞的死亡,与试验三动物试验结果基本一致。以上研究表明,日粮精氨酸可通过增加机体循环精氨酸浓度,影响肠道精氨酸转运和代谢,调节肠道免疫反应和抗菌肽表达,改善肠道机械屏障功能,调节肠道微生物菌群组成和功能,缓解肠道致病菌造成的肉仔鸡肠道黏膜损伤。精氨酸添加日粮在全期饲喂的效果优于仅在感染期饲喂的效果。
尼砸木·艾海提[9]（2013）在《异常黏液质型阳痿大鼠阴茎组织中VIP、CGRP及NOS表达改变研究》文中研究说明目的根据维吾尔医学理论建立维医异常黏液质证候及阳痿病证大鼠模型，测定及其阴茎组织勃起相关信号通路限速酶，关键递质表达含量，在此基础上探讨异常黏液质型阳痿分子生物学基础。方法随机选取具有正常性功能的SD雄性大鼠100只，10只分为正常（N组），90只为造模组。正常组大鼠使用普通大鼠饲料，在正常饲养环境进行饲养。造模组大鼠使用湿寒性饲料（普通饲料按一定比列混合芫荽实和菠菜实），在湿寒环境干预条件下进行饲养20周建立异常黏液质证候大鼠模型，使用APO勃起从证候模型中筛选异常黏液质型阳痿病证大鼠，建立异常黏液质型阳痿大鼠模型，对异常黏液质证候及阳痿病证模型大鼠进行分组：阳痿病证模型大鼠分为，病证组（A1），病证自然反证组（A2），病证药物反证组（A3）；证候模型大鼠分为，证候组（B1），证候自然反证组（B2），证候药物反证组（B3）；对证维药伊木萨克片进行反证实验至2周，使用Western-blot技术检测各组大鼠阴茎组织eNOS，nNOS，iNOS，VIP，CGRP表达含量。结果1.模型各组大鼠阴茎组织eNOS表达与N组进行比较，A1组及A2组大鼠阴茎组织eNOS表达水平有了显着的降低（P<0.01，P<0.01）；A3组eNOS表达量与A1组，A2组比较有了显着升高（P<0.01，P<0.01），A2组与A1组比较无显着差异（P>0.05）；B3组eNOS表达量与B1组比较有了显着升高（P<0.05），与B2组比较无显着差异（P>0.05）；B2组与B1组比较无显着差异（P>0.05）。2.模型各组大鼠阴茎组织nNOS表达与N组进行比较，A1组及A2组nNOS表达量有了显着降低（P<0.01，P<0.01）；A3组与A1组，A2组比较有了显着升高（P<0.01，P<0.01），A2组与A1组比较无显着差异（P>0.05）；B3组与B1组，B2组比较有了显着升高（P<0.01，P<0.05）；B2组与B1组比较无显着差异（P>0.05）。3.模型各组大鼠阴茎组织iNOS表达与N组进行比较，A1组，A2组有了显着的升高（P<0.01，P<0.01）；A3组与A1组比较有了显着降低（P<0.05），与A2组比较无显着差异（P>0.05）；B3组与B1组，B2组比较有了显着降低（P<0.05，P<0.05）。4.模型各组大鼠阴茎组织VIP表达与N组进行比较，A1组和A2组大鼠阴茎组织VIP表达水平有了显着降低（P<0.01，P<0.01）；A3组与A1组，A2组比较有了显着升高（P<0.01，P<0.01）；B3组与B1组，B2组比较有了显着升高（P<0.01，P<0.01）；B2组与B1组比较无显着差异（P>0.05）。5.模型各组大鼠阴茎组织CGRP表达含量与N组进行比较无显着差异（P>0.05）。结论1.异常黏液阳痿病证模型大鼠阴茎组织eNOS，nNOS，iNOS表达水平与正常组比较有了显着差异；eNOS，nNOS，iNOS是NO-cGMP信号通路主要限速酶，其含量变化可能会影响NO-cGMP信号通路，进一步影响了阴茎勃起功能。2.异常黏液阳痿病证模型大鼠阴茎组织VIP表达水平与正常组比较有了显着差异，CGRP无显着差异， VIP是勃起相关信号通路VIP-cAMP主要神经递质，其含量变化可能影响阴茎勃起功能；异常黏液质型阳痿发病机制中CGRP表达含量及其信号传导通路CGRP-cAMP可能未受影响。3.模型大鼠经过维吾尔医药（伊木萨克片）反证后，阴茎组织eNOS，nNOS，iNOS，VIP表达情况有了显着逆转，提示eNOS，nNOS，iNOS，VIP可能是异常黏液质型阳痿病证分子生物学基础研究中关键分子。
方立[10]（2010）在《内皮祖细胞对血管平滑肌细胞增殖与表型转化的抑制作用及其机制研究》文中认为第一章内皮祖细胞与血管平滑肌细胞共培养条件下内皮祖细胞对血管平滑肌细胞增殖的影响研究背景：近年来大量研究提示内皮祖细胞（endothelial progenitor cell, EPCs）能够延缓高血压、冠心病、血管成形术后再狭窄等血管增殖性疾病血管重塑的进程。鉴于血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）的增殖是形成高血压、冠心病、血管成形术后再狭窄等心血管疾病的共同细胞病理基础之一,本实验拟从细胞水平探讨共培养体系下EPCs对大鼠VSMCs增殖的影响。方法：采用3%明胶沉降红细胞及密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,利用内皮生长培养基（Endothelial growth medium-2,EGM-2,含EPCs分化所需各种生长因子）进行培养,诱导单个核细胞贴壁并向EPCs分化；Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双染色鉴定正在分化的EPCs;流式细胞仪和间接免疫荧光法检测EPCs干细胞分子标志CD34／CD133以及内皮细胞分子标志FLK-1/VWF/CD31/ VE-cadherin/CD 105/CD 146;采用Transwell培养板建立早期EPCs和VSMCs共培养模式,20%FBS诱导VSMCs增殖,利用BrdU标记和蛋白定量法检测血管平滑肌细胞DNA和蛋白合成能力,观察共培养条件下EPCs对VSMCs增殖的影响。结果：从人脐血单个核细胞成功分离培养EPCs,早期EPCs和VSMCs共培养12,24,48和72h时,血管平滑肌细胞DNA和蛋白合成能力均较对照组明显降低（P<0.05）；与此类似,流式细胞术结果显示共培养组VSMCs细胞周期中S期细胞所占百分率较对照组显着降低（P<0.05）,而细胞周期中G1期细胞所占百分率均相应高于对照组（P<0.05）,其中均以48h抑制效果最明显。结论：共培养条件下早期EPCs能够抑制血管平滑肌细胞DNA和总蛋白的合成,其机制可能与早期EPCs通过阻滞细胞周期进程抑制VSMCs的增殖有关。第二章内皮祖细胞对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖与表型转化的抑制作用研究背景：VSMCs表型转化是高血压、冠心病和血管成形术后再狭窄等心血管疾病VSMCs增殖和迁移的关键性起始步骤。病理条件下VSMCs的增殖和表型转化受到多种血管活性物质和细胞因子的调控,其中AngⅡ诱导的VSMCs增殖和表型转化在心血管疾病的发生、发展中起着非常重要的作用。为了进一步阐明EPCs对VSMCs病理性增殖和表型转化的抑制作用及其机制,本研究拟采用AngⅡ刺激VSMCs后,观察内皮祖细胞条件培养基对VSMCs增殖、表型转化及其信号转导通路的影响。方法：分别制备早期EPCs条件培养基（E-EPC-CM）、晚期EPCs条件培养基（L-EPC-CM）以及人脐静脉内皮细胞条件培养基（HUVEC-CM）后,采用BrdU标记法、蛋白定量、MTT以及流式细胞术分析E-EPC-CM、L-EPC-CM、HUVEC-CM对AngⅡ诱导的VSMCsDNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率、细胞周期进程以及VSMCs收缩表型标志基因平滑肌α-肌动蛋白（α-smootn musle actin,α-SM-actin）和合成表型标志基因骨桥蛋白（osteopontin, OPN）表达变化的影响；进一步采用RT-PCR和Western-blot观察E-EPC-CM、L-EPC-CM、HUVEC-CM对AngⅡ诱导的VSMCs MAPK （P38、JNK、ERK活化）和NF-κB（P65活化）信号通路以及原癌基因c-myc、c-fos表达的影响。结果：AngⅡ（10-6mmol/L）诱导VSMCs增殖48h后,血管平滑肌细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率均较对照组明显增加（P<0.05）；细胞周期中S期细胞所占百分率较对照组显着增加,G1期细胞所占百分率均相应较对照组减少（P<0.05）;α-SM-actin mRNA和蛋白表达明显减少,而OPN mRNA和蛋白表达明显增加（P<0.05）,提示VSMCs从收缩表型向合成表型转化；P38、JNK. ERK、P65活化以及原癌基因c-myc、c-fos的表达均较对照组显着增加（P<0.05）。E-EPC-CM、L-EPC-CM、HUVEC-CM预处理后能够显着抑制AngⅡ诱导的VSMCs DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率的增加以及阻滞VSMCs从Gl期向S期的转化；并且抑制VSMCs从收缩表型向合成表型转化,其中均以E-EPC-CM的抑制效果最明显（P<0.05）。同样E-EPC-CM也抑制了AngⅡ诱导的P38、JNK、ERK.P65的活化以及c-myc、c-fos的表达（P<0.05）。结论：EPCs能够抑制AngⅡ诱导的VSMCs病理性增殖和表型转化,其机制可能与其抑制MAPK和NF-κB信号通路的活化以及原癌基因c-myc、c-fos的表达有关。第三章降钙素基因相关肽介导内皮祖细胞抑制血管平滑肌细胞的增殖与表型转化研究背景：EPCs许多生物学功能主要都是通过其旁分泌功能而实现的,研究表明降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）能够显着抑制AngⅡ等诱导的VSMCs增殖和表型转化,已有研究证实EPCs（主要是早期EPCs）能够合成并分泌CGRP。前一章研究已证实EPCs可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖与表型转化,那么EPCs通过旁分泌释放的CGRP是否参与这一过程值得进一步探讨。因此,本研究拟初步探讨CGRP在EPCs抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖与表型转化过程中的作用和可能的分子机制。方法：采用ELISA和RT-PCR检测EPCs和脐静脉内皮细胞CGRP的表达情况,对E-EPC-CM采取CGRP抗体封闭和CGRP受体阻断策略后,观察E-EPC-CM对AngⅡ诱导的VSMCs的增殖、表型转化及其MAPK、NF-κB信号转导通路和原癌基因c-myc、c-fos表达的影响。结果：早期EPCs能够表达并分泌高浓度的CGRP,并且显着高于晚期EPCs和HUVEC; CGRP阻断后,E-EPC-CM对AngⅡ诱导的VSMCs DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率、细胞周期进程以及表型转化的的抑制作用均较对照组明显降低（P<0.05）；并且对MAPK（P38. JNK、ERK）、NF-κB（P65）信号转导通路的活化以及原癌基因c-myc、c-fos表达的抑制能力也较对照组明显降低（P<0.05）。结论：EPCs通过旁分泌CGRP抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖与表型转化。
二、不同年龄大鼠血中二甲基精氨酸和降钙素基因相关肽浓度的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、不同年龄大鼠血中二甲基精氨酸和降钙素基因相关肽浓度的变化（论文提纲范文）
（1）降钙素基因相关肽（CGRP）通过调控Akt/mTOR信号通路介导的凋亡和自噬减轻创伤性颅脑损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 创伤性颅脑损伤患者血清CGRP水平及与预后的关系 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 降钙素基因相关肽(CGRP)对创伤性颅脑损伤模型小鼠的神经功能保护作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 降钙素基因相关肽(CGRP)对创伤性颅脑损伤后神经元细胞自噬和凋亡的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 AKT/mTOR信号通路参与了外源性CGRP对神经元细胞自噬和凋亡的调控 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 自噬和凋亡在颅脑创伤治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 降钙素基因相关肽CGRP在神经系统疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）不同经期偏头痛患者血清雌激素及CGRP含量的变化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 对象与方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 实验结果计算 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组基本情况 |
| 2.2 偏头痛组与对照组雌激素与CGRP含量的比较 |
| 2.2.1 偏头痛组与对照组总体雌激素、CGRP含量的比较 |
| 2.2.2 偏头痛组与对照组各亚组雌激素、CGRP含量比较 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）基于蛋白质/代谢组学的耳穴综合疗法治疗偏头痛的机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论背景 |
| 1 中医学对偏头痛的认识 |
| 1.1 病名溯源 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.3 治疗现状 |
| 2 现代医学对偏头痛的认识 |
| 2.1 流行病学调查 |
| 2.2 病因 |
| 2.3 发病机制 |
| 2.4 治疗现状 |
| 3 蛋白质组学的研究应用 |
| 3.1 基础研究 |
| 3.2 临床应用研究 |
| 4 代谢组学的研究应用 |
| 4.1 基础研究 |
| 4.2 临床应用研究 |
| 第二部分 临床观察 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 临床信息采集 |
| 2.2 干预措施 |
| 2.3 疗效观察 |
| 2.4 疗效评定 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 临床信息 |
| 3.2 偏头痛积分量表和VAS值情况 |
| 3.3 临床疗效 |
| 4 讨论 |
| 4.1 临床信息 |
| 4.2 耳穴综合疗法治疗偏头痛的研究基础 |
| 4.3 临床疗效分析 |
| 第三部分 基于TMT技术的耳穴综合疗法治疗偏头痛的蛋白质组学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 仪器与试剂 |
| 1.2 样本采集和分组 |
| 1.3 样品制备和质控 |
| 1.4 蛋白质组学检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 差异蛋白筛选结果 |
| 2.2 GO分析 |
| 2.3 KEGG通路分析 |
| 3 蛋白验证 |
| 3.1 仪器和试剂 |
| 3.2 操作步骤 |
| 3.3 蛋白验证结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 基于UPLC-Q-Exactive MS/MS技术的耳穴综合疗法治疗偏头痛的代谢组学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 仪器耗材和试剂 |
| 1.2 样本前处理 |
| 1.3 色谱和质谱条件 |
| 1.4 数据质量评估 |
| 1.5 数据处理和多变量分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 总离子流图 |
| 2.2 数据质量控制 |
| 2.3 主成分分析 |
| 2.4 偏最小二乘判别分析 |
| 2.5 差异代谢物筛选 |
| 2.6 代谢通路鉴定结果 |
| 3 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
（4）阴离子盐及钙添加对围产期奶牛血钙稳衡与脂肪代谢的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 引言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 奶牛围产期生理代谢特征 |
| 1.1 奶牛围产期生理特点 |
| 1.2 奶牛围产期代谢变化 |
| 1.2.1 奶牛围产期脂肪代谢变化 |
| 1.2.2 奶牛围产期蛋白质代谢变化 |
| 1.2.3 奶牛围产期糖代谢变化 |
| 1.3 奶牛围产期免疫状态 |
| 1.4 奶牛围产期血钙稳衡 |
| 2 奶牛低血钙症 |
| 2.1 围产期奶牛低血钙与能量代谢紊乱 |
| 2.2 围产期奶牛低血钙与免疫抑制 |
| 3 日粮钙水平对围产期奶牛低血钙的影响 |
| 4 日粮阴阳离子差(DCAD)及阴离子盐 |
| 4.1 添加阴离子盐对围产期奶牛生产性能的影响 |
| 4.2 添加阴离子盐对围产期奶牛酸碱平衡的影响 |
| 4.3 添加阴离子盐对围产期奶牛血钙的影响 |
| 4.4 添加阴离子盐对围产期奶牛脂肪代谢的影响 |
| 5 组学技术在围产期奶牛研究中的应用 |
| 6 存在的问题 |
| 第二部分 研究目的、意义、内容及技术路线 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究意义 |
| 3 研究内容 |
| 4 技术路线 |
| 第三部分 试验研究 |
| 试验一产后不同血钙水平奶牛生产性能、血液生化及钙调激素比较研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验设计及饲养管理 |
| 2.2 样品采集及指标测定 |
| 2.2.1 生产及泌乳性能 |
| 2.2.2 血液生化指标 |
| 2.2.3 血液钙调激素及分子 |
| 2.3 数据统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 产后不同血钙水平奶牛围产期生产及泌乳性能比较 |
| 3.2 产后不同血钙水平奶牛血液钙调激素水平及SID比较 |
| 3.3 产后不同血钙水平奶牛血液代谢物比较 |
| 3.4 产后不同血钙水平奶牛围产期疾病发生率比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 产后不同血钙水平奶牛围产期生产及泌乳性能比较 |
| 4.2 围产期奶牛血钙及钙调激素比较 |
| 4.3 产后不同血钙水平奶牛围产期血液代谢物比较 |
| 4.4 产后不同血钙水平奶牛围产期疾病发生率比较 |
| 5 小结 |
| 试验二围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛生产性能、血钙稳衡及脂肪代谢的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验设计及饲养管理 |
| 2.2 样品采集及指标测定 |
| 2.2.1 生产及泌乳性能测定 |
| 2.2.2 营养物质摄入量及表观消化率 |
| 2.2.3 体液酸碱平衡与血钙稳衡 |
| 2.2.4 血清代谢物 |
| 2.2.5 脂肪代谢 |
| 2.2.6 免疫与疾病发生率 |
| 2.3 数据统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛生产及泌乳性能的影响 |
| 3.2 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛营养物质摄入与表观消化率的影响 |
| 3.3 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛酸碱平衡及钙代谢的影响 |
| 3.3.1 体液酸碱平衡 |
| 3.3.2 血钙稳衡 |
| 3.4 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛血液代谢物的影响 |
| 3.5 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛脂肪代谢的影响 |
| 3.5.1 脂肪代谢调控激素 |
| 3.5.2 脂肪合成相关酶 |
| 3.5.3 脂肪分解、脂肪酸氧化相关酶及分子 |
| 3.5.4 肝脏脂肪转运相关分子及肝脏功能 |
| 3.6 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛免疫与疾病发生率影响 |
| 3.6.1 中性粒细胞、单核细胞吞噬能力和氧化迸发能力 |
| 3.6.2 免疫球蛋白与细胞因子 |
| 3.6.3 疾病发生率 |
| 4 讨论 |
| 4.1 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛生产及泌乳性能的影响 |
| 4.2 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛营养物质摄入与表观消化率的影响 |
| 4.3 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛体液酸碱平衡与钙代谢的影响 |
| 4.3.1 体液酸碱平衡 |
| 4.3.2 血钙稳衡 |
| 4.4 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛血液代谢物的影响 |
| 4.5 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛能量平衡与脂肪代谢的影响 |
| 4.5.1 能量平衡 |
| 4.5.2 脂肪代谢调控激素 |
| 4.5.3 血清脂肪代谢物 |
| 4.5.4 脂肪合成相关酶 |
| 4.5.5 脂肪分解、脂肪酸氧化相关酶及分子 |
| 4.5.6 肝脏脂肪转运分子及肝脏功能 |
| 4.6 围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛免疫、疾病发生率的影响 |
| 4.6.1 中性粒细胞、单核细胞吞噬能力和氧化迸发能力 |
| 4.6.2 免疫球蛋白与细胞因子 |
| 4.6.3 疾病发生率 |
| 5 小结 |
| 试验三围产前期日粮添加阴离子盐及钙对奶牛产后血清代谢组的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验设计及饲养管理 |
| 2.2 样品采集与分析 |
| 2.2.1 样品采集 |
| 2.2.2 试剂与仪器 |
| 2.2.3 检测样本前处理 |
| 2.2.4 样本LC-MS分析 |
| 2.3 数据分析 |
| 2.3.1 样本数据预处理 |
| 2.3.2 差异代谢物的筛选与代谢通路富集分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 LC-MS数据可靠性分析 |
| 3.2 主成分分析(PCA) |
| 3.3 偏最小二乘判别分析(PLS-DA) |
| 3.4 正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA) |
| 3.5 重要差异代谢分子分析(VIP) |
| 3.6 差异代谢分子通路富集分析 |
| 3.7 生物标志物筛选 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脂肪代谢 |
| 4.2 有机酸代谢 |
| 4.3 氨基酸代谢 |
| 4.4 非氨基酸含氮化合物代谢 |
| 5 小结 |
| 第四部分 总体讨论与结论 |
| 1 总体讨论 |
| 2 全文结论 |
| 3 研究创新点 |
| 4 有待进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（5）右向左分流的有先兆偏头痛患者血浆降钙素基因相关肽与内皮素含量的相关性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 英文缩写 |
| 攻读学位期间发表的学术成果 |
| 附图 |
（6）基于骨免疫的乳铁蛋白调控骨重建机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.2 骨重建与骨免疫学研究进展 |
| 1.2.1 骨重建的过程 |
| 1.2.2 成骨细胞与破骨细胞的相互作用 |
| 1.2.3 骨重建相关的信号通路 |
| 1.2.4 骨质疏松与骨免疫 |
| 1.3 乳铁蛋白及其肽的生物活性研究进展 |
| 1.3.1 乳铁蛋白的分子结构 |
| 1.3.2 乳铁蛋白成骨活性的研究进展 |
| 1.3.3 乳铁蛋白免疫活性的研究进展 |
| 1.3.4 酶解后乳铁蛋白肽的生物活性研究进展 |
| 1.4 肽的活性分析研究进展 |
| 1.4.1 肽的骨重建活性分析 |
| 1.4.2 肽与受体相互作用分析 |
| 1.5 主要研究内容 |
| 1.6 技术路线 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料及仪器 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 小鼠模型的建立与分组 |
| 2.2.2 全身骨密度的测定 |
| 2.2.3 微计算机断层扫描仪测定股骨的微观结构 |
| 2.2.4 三点弯曲法测定股骨生物力学 |
| 2.2.5 电感耦合等离子体原子发射光谱测定股骨中钙磷 |
| 2.2.6 骨生成和骨吸收指标的测定 |
| 2.2.7 巨噬细胞活性的检测 |
| 2.2.8 脾淋巴细胞活性的检测 |
| 2.2.9 ELISA法测定RANKL和 OPG蛋白含量 |
| 2.2.10 液相悬浮多因子法检测免疫因子 |
| 2.2.11 胃肠道中乳铁蛋白的鉴定 |
| 2.2.12 乳铁蛋白肽的鉴定 |
| 2.2.13 Caco-2 细胞的培养及乳铁蛋白肽转运研究 |
| 2.2.14 成骨细胞活性的检测 |
| 2.2.15 受体α5β1和TRAF6 与肽的分子对接 |
| 2.3 数据处理与统计分析 |
| 第3章 乳铁蛋白对模型小鼠骨系统的影响 |
| 3.1 乳铁蛋白对模型小鼠骨密度的影响 |
| 3.1.1 乳铁蛋白对骨质疏松模型小鼠体重的影响 |
| 3.1.2 乳铁蛋白对模型小鼠全身骨密度的影响 |
| 3.2 乳铁蛋白对股骨生物力学的影响 |
| 3.3 乳铁蛋白对股骨钙磷含量的影响 |
| 3.4 乳铁蛋白对股骨形态学和微观结构的影响 |
| 3.4.1 乳铁蛋白对股骨形态计量学的影响 |
| 3.4.2 乳铁蛋白对骨小梁微观结构的影响 |
| 3.4.3 乳铁蛋白对皮质骨微观结构的影响 |
| 3.5 乳铁蛋白对小鼠骨重建指标的影响 |
| 3.5.1 乳铁蛋白对血清骨生成指标的影响 |
| 3.5.2 乳铁蛋白对血清骨吸收指标的影响 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 乳铁蛋白对模型小鼠骨免疫系统的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 乳铁蛋白对模型小鼠胸脾指数的影响 |
| 4.3 乳铁蛋白对免疫细胞增殖的影响 |
| 4.3.1 乳铁蛋白对巨噬细胞增殖的影响 |
| 4.3.2 乳铁蛋白对脾淋巴细胞增殖的影响 |
| 4.3.3 乳铁蛋白对T淋巴细胞增殖的影响 |
| 4.3.4 乳铁蛋白对B淋巴细胞增殖的影响 |
| 4.4 乳铁蛋白对RANKL和 OPG分泌的影响 |
| 4.4.1 乳铁蛋白对免疫细胞分泌RANKL和 OPG的影响 |
| 4.4.2 乳铁蛋白对血清RANKL和 OPG的影响 |
| 4.5 乳铁蛋白对骨重建相关免疫因子的影响 |
| 4.5.1 对天然性免疫相关因子的影响 |
| 4.5.2 对获得性免疫相关因子的影响 |
| 4.5.3 对其他免疫因子的影响 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 乳铁蛋白的消化及吸收研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 胃肠道中乳铁蛋白的鉴定 |
| 5.2.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定乳铁蛋白 |
| 5.2.2 高效液相色谱测定乳铁蛋白含量 |
| 5.3 胃肠道中乳铁蛋白肽的鉴定 |
| 5.3.1 UPLC-QTOF鉴定胃肠道中乳铁蛋白肽 |
| 5.3.2 CE-QTOF鉴定胃肠道中乳铁蛋白肽及分析 |
| 5.3.3 功能乳铁蛋白肽的筛选 |
| 5.4 乳铁蛋白肽吸收机制研究 |
| 5.4.1 Caco-2 单层细胞模型完整性评价 |
| 5.4.2 乳铁蛋白肽对Caco-2 细胞存活率的影响 |
| 5.4.3 乳铁蛋白肽的跨膜转运研究 |
| 5.4.4 肽吸收机制研究 |
| 5.4.5 小鼠血清中乳铁蛋白肽分析 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 乳铁蛋白肽对骨免疫系统的调控研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 乳铁蛋白肽LF-LR对成骨细胞的影响 |
| 6.2.1 乳铁蛋白肽LF-LR对成骨细胞增殖的影响 |
| 6.2.2 乳铁蛋白肽LF-LR对成骨细胞分化的影响 |
| 6.3 乳铁蛋白肽LF-LR对脾淋巴细胞的影响 |
| 6.3.1 LF-LR对淋巴细胞增殖的影响 |
| 6.3.2 LF-LR对分泌RANKL和 OPG的影响 |
| 6.4 乳铁蛋白肽调控骨免疫信号通路研究 |
| 6.4.1 含有PEQ的乳铁蛋白肽调控骨免疫信号通路研究 |
| 6.4.2 乳铁蛋白肽LF-LR调控RANKL/RANK/OPG信号通路研究 |
| 6.5 本章小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）梓醇促进BMSCs增殖分化及Hedgehog信号通路的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 研究背景 |
| 1 骨质疏松的研究进展 |
| 2 BMSCs成骨分化的研究进展 |
| 3 Hedgehog信号转导通路 |
| 4 中医理论对BMSCs成骨分化与“肾主骨生髓”理论相关性的认识 |
| 5 补肾中药促进BMSCs成骨分化的研究进展 |
| 6 地黄和梓醇的研究进展 |
| 实验一 SD大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 实验二 梓醇对BMSCs增殖及骨向分化的影响 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 实验三 梓醇对BMSCs骨向分化过程中Hedgehog信号通路的影响 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（8）精氨酸对肉仔鸡肠道黏膜损伤的缓解作用及机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词(Abbreviations) |
| 第一章 文献综述 |
| 1 研究目的及意义 |
| 2 国内外研究现状 |
| 3 研究内容与技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 肉仔鸡空肠物理屏障功能相关基因的发育研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 试验二 日粮精氨酸水平与饲喂时间对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉仔鸡肠道免疫和屏障功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 试验三 日粮精氨酸缓解产气荚膜梭菌感染的肉仔鸡肠道炎症反应的潜在机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 试验四 日粮精氨酸对产气荚膜梭菌感染的肉仔鸡回肠微生物区系的调节作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 试验五 日粮精氨酸对鼠伤寒沙门氏菌感染的肉仔鸡肠道损伤缓解作用的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 试验六 精氨酸对产气荚膜梭菌诱导鸡胚肠上皮细胞炎症反应的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 结论与建议 |
| 1 主要结论 |
| 2 创新点 |
| 3 有待进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）异常黏液质型阳痿大鼠阴茎组织中VIP、CGRP及NOS表达改变研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 维医异常黏液质性阳痿及相关研究进展（综述） |
| 2.1 阳痿概述 |
| 2.2 维吾尔医体液论 |
| 2.3 异常黏液质与阳痿关系 |
| 2.4 阳痿的发病因素 |
| 2.4.1 血管性勃起功能障碍 |
| 2.4.2 神经性勃起功能障碍 |
| 2.4.3 内分泌性勃起功能障碍 |
| 2.4.4 心因性勃起功能障碍 |
| 2.5 阴茎勃起机制 |
| 2.5.1 阴茎组织学及男性生理概要 |
| 2.5.2 阴茎勃起和性激素关系 |
| 2.5.3 阴茎勃起和血管活性长肽(VIP)关系 |
| 2.5.4 阴茎勃起和降钙素相关基因肽(CGRP)的关系 |
| 2.5.5 阴茎勃起和 NOS 关系 |
| 2.6 勃起功能障碍动物模型研究进展 |
| 2.7 研究目的和意义 |
| 第三章 异常黏液质阳痿大鼠模型的建立及其阴茎组织 eNOS、nNOS、iNOS、VIP、CGRP 含量的变化研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 异常黏液质性大鼠证候及阳痿病证模型的建立 |
| 3.3.2 阴茎组织中 eNOS、nNOS、iNOS、VIP、CGRP 表达水平 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 异常黏液质性阳痿大鼠模型的建立 |
| 3.4.2 异常黏液质对大鼠阴茎组织 eNOS，nNOS，iNOS 蛋白表达影响 |
| 3.4.3 异常黏液质对大鼠阴茎组织 VIP，CGRP 表达影响 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 全文结论 |
| 4.2 进一步研究方向 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文清单 |
| 致谢 |
（10）内皮祖细胞对血管平滑肌细胞增殖与表型转化的抑制作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写注释 |
| 第一章 内皮祖细胞和血管平滑肌细胞共培养条件下内皮祖细胞对血管平滑肌细胞增殖的影响 |
| 1、前言 |
| 2、材料与方法 |
| 3、结果 |
| 4、附图 |
| 5、讨论 |
| 6、结论 |
| 第二章 内皮祖细胞对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖与表型转化的抑制作用 |
| 1、前言 |
| 2、材料与方法 |
| 3、结果 |
| 4、附图 |
| 5、讨论 |
| 6、结论 |
| 第三章 降钙素基因相关肽介导内皮祖细胞对血管平滑肌细胞增殖与表型转化的抑制作用 |
| 1、前言 |
| 2、材料与方法 |
| 3、结果 |
| 4、附图 |
| 5、讨论 |
| 6、结论 |
| 第一章 参考文献 |
| 第二章 参考文献 |
| 第三章 参考文献 |
| 综述1 |
| 综述2 |
| 攻读学位期间主要成果 |
| 所获奖励 |
| 致谢 |
四、不同年龄大鼠血中二甲基精氨酸和降钙素基因相关肽浓度的变化（论文参考文献）
- [1]降钙素基因相关肽（CGRP）通过调控Akt/mTOR信号通路介导的凋亡和自噬减轻创伤性颅脑损伤的实验研究[D]. 田军. 河北医科大学, 2021
- [2]不同经期偏头痛患者血清雌激素及CGRP含量的变化[D]. 李军. 山西医科大学, 2020(11)
- [3]基于蛋白质/代谢组学的耳穴综合疗法治疗偏头痛的机制研究[D]. 王萌萌. 山东中医药大学, 2019(05)
- [4]阴离子盐及钙添加对围产期奶牛血钙稳衡与脂肪代谢的影响[D]. 张翔飞. 四川农业大学, 2019(06)
- [5]右向左分流的有先兆偏头痛患者血浆降钙素基因相关肽与内皮素含量的相关性[D]. 孙玉. 佳木斯大学, 2019(03)
- [6]基于骨免疫的乳铁蛋白调控骨重建机制研究[D]. 樊凤娇. 哈尔滨工业大学, 2019(01)
- [7]梓醇促进BMSCs增殖分化及Hedgehog信号通路的研究[D]. 赖满香. 广州中医药大学, 2018(08)
- [8]精氨酸对肉仔鸡肠道黏膜损伤的缓解作用及机理研究[D]. 张贝贝. 中国农业大学, 2018(01)
- [9]异常黏液质型阳痿大鼠阴茎组织中VIP、CGRP及NOS表达改变研究[D]. 尼砸木·艾海提. 新疆大学, 2013(10)
- [10]内皮祖细胞对血管平滑肌细胞增殖与表型转化的抑制作用及其机制研究[D]. 方立. 中南大学, 2010(11)