一、Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽在蛋鸡肠道内水解的研究（论文文献综述）
杜宝龙[1]（2021）在《亮氨酸-亮氨酸肽介导的肉仔鸡小肠上皮细胞调控通路研究》文中认为肠道是动物消化吸收养分的重要场所,也是机体重要的免疫屏障,维护肠道健康对于保障动物的生长发育具有极其重要的意义。小肽既是营养物质,又是生物活性分子,对机体具有营养和生理双重调节作用。为了阐明小肽对肉仔鸡IEC生长、增殖和凋亡的影响及其分子机理,本试验选用人工合成的亮氨酸（L-Leu）和亮氨酸-亮氨酸肽（L-Leu-L-Leu）为试验材料,利用鸡小肠上皮细胞体外培养技术研究L-Leu-L-Leu对IEC细胞生长、增殖和凋亡的影响,并结合转录组（RNA-seq）和蛋白组（Lable-free）测序技术,筛选与IEC细胞生长、增殖和凋亡相关的候选基因、蛋白以及通路,以期为初步阐明小肽介导的IEC调控通路,完善小肽营养理论体系和建立小肽营养调控技术提供理论依据。获得结果如下:（1）分离原代肠上皮细胞经免疫荧光鉴定纯度均达到90%以上,细胞传代经药物干预之后结果发现,L-Leu-L-Leu组对IEC细胞的生长和增殖均具有明显的促进作用,对IEC的凋亡有明显的抑制作用,且效果优于L-Leu组和对照组。（2）分别对对照组、L-Leu组、L-Leu-L-Leu组的9个样本构建的c DNA文库进行转录组测序,结果显示:与对照组相比,L-Leu组中的差异表达基因有34个,其中23个显着上调,11个显着下调;L-Leu-L-Leu组中有29个差异表达基因,其中19个显着上调,10个显着下调。与L-Leu组相比,L-Leu-L-Leu组中有26个差异表达基因,其中12个显着上调,14个显着下调。通过对细胞生长增殖和凋亡的相关候选基因筛选发现,与对照相比,L-Leu组筛选到CCL20、IL8L1、IL8、IL6 4个候选基因分别参与细胞因子受体相互作用通路,Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路,细胞衰老,RIG-I样受体信号通路等免疫调节的通路,L-Leu-L-Leu组筛选到IL8 1个候选基因参与Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路,细胞衰老,细胞因子-细胞因子受体相互作用等免疫调节通路;与L-Leu组相比,L-Leu-L-Leu组筛选到IL6、RGN 2个候选基因参与细胞因子受体相互作用,Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路,细胞衰老等免疫途径和磷酸戊糖（能量代谢）途径。（3）非定量蛋白组学标记测序结果显示,与对照组相比,L-Leu组总共筛选出90个差异表达蛋白,其中34个差异蛋白显着上调,56个差异蛋白显着下调,L-Leu-L-Leu总共筛选出221个差异表达蛋白,其中130个显着上调,81个显着下调;与L-Leu相比,L-Leu-L-Leu组中总共筛选出47个差异表达蛋白,21个显着上调,26个显着下调。通过对细胞生长增殖和凋亡的相关候选蛋白和通路筛选发现,与对照组相比,L-Leu组中发现1个候选蛋白PGM3参与到氨基糖和核苷酸糖代谢中,L-Leu-L-Leu组中发现3个候选蛋白RPS17、RPS11、RPL23参与核糖体通路;与L-Leu组相比,L-Leu-L-Leu组发现两个蛋白GPX4、PDPK1参与谷胱甘肽代谢和T细胞受体信号通路。本研究发现L-Leu-L-Leu可促进IEC细胞的生长、增殖,同时还能抑制IEC的凋亡。结合转录组和蛋白组测序技术,发现了多个免疫和能量相关调控信号通路与IEC细胞的生长、增殖和凋亡有关;鉴定出了IL8、IL6、RGN 3个候选基因,RPS17、RPS11、RPL23、GPX4、PDPK1 5个相关候选蛋白参与细胞的生长、增殖和凋亡。研究结果为初步阐明小肽介导的IEC调控通路、完善小肽营养理论体系和建立小肽营养调控技术提供了有价值的数据。
谭珏[2]（2013）在《基于外翻肠囊法的补锌制剂生物利用率评价研究》文中认为快速、高效、客观的评价各种微量元素补充剂的生物利用率,对于规范保健食品（剂）生产、消费和监管具有重要意义。以补锌制剂为例,市场经历了无机锌（硫酸锌为代表）、葡萄糖酸锌、甘草锌及氨基酸螯合锌、蛋白锌等有机锌过程,然而,对其生物利用率的评价无论是评价方法还是结果均十分混乱。如评价方法体内的有平衡试验法、同位素示踪法、原位结扎灌注肠段法、原位体肠灌流法；体外法则有体外灌注肠段法、外翻肠囊法、小肠刷状缘膜微粒法、细胞培养法等。本文以几种市售锌元素营养补充剂为研究对象,利用鸡回肠构建了外翻肠囊模型,通过灌注不同时间、不同浓度锌制剂的吸收效率,探索外翻肠囊法作为微量元素营养补充剂生物利用率评价方法的可行性及具体应用,以期为相关研究提供实验依据。本研究主要结果如下：1构建了基于肉仔鸡回肠的外翻肠囊模型。通过颈部宰杀肉仔鸡45只,解剖取其回肠,处理外翻后,制成肉仔鸡回肠外翻肠囊模型90只（一只回肠制成两只外翻肠囊）。选取无机锌（硫酸锌）、有机锌（氨基酸螯合锌）对模型进行评估。结果表明：（1）空白组与试验组浆膜液终体积并且无显着性差异（P>0.05）,随时间变化趋势具有明显线性关系,线性拟合所得相关系数R2=0.909。（2）硫酸锌培养5、15、30、45、60min吸收率极显着增加（P<0.01）,吸收率随时间变化经线性拟合后R2=0.990,并且肠囊在15min时对硫酸锌的吸收速率达到最大；氨基酸螯合锌在前30min内吸收率增加明显（P<0.01）,随后变化趋于平缓,60min时再次出现增加的趋势,吸收率随时间变化经线性拟合后R2=0.947,在30min内肠囊对氨基酸螯合锌吸收效果较好。由此可知试验所构建的外翻肠囊模型具有较好的重复性、准确性,可用以评价不同补锌制剂的生物利用率。2补锌制剂在不同浓度、不同时间培养后的吸收规律。根据不同补锌制剂的单次推荐剂量设置本试验中灌注肠囊的四个锌浓度水平,分别为：5.28,14.12,20,32.4（μg/ml）,培养肠囊10、20、30、40mmin。硫酸锌：吸收率都随着时间、浓度而增加。以锌浓度为32.4μg/ml（推荐量）下吸收率为100%。当锌浓度为5.28μg/ml时,培养4个时间吸收率可达8.74%-19.13%；当锌浓度为14.12μg/ml时,吸收率达到27.01%～45.52%；当锌浓度为20μg/ml时,吸收率达到63.61%-71.10%。由此可知,硫酸锌制剂在产品推荐摄入量下吸收效果最佳。肠囊对锌的扩散系数P在l0min时达到最大值为1.936±0.292cm2/min,此时肠囊对硫酸锌吸收最敏感。葡萄糖酸锌：4个浓度水平下,吸收率随着时间而增加。在锌浓度为32.4μg/ml时,培养时间超过20min后吸收率反而低于14.12和20μg/ml锌浓度水平。以锌浓度为14.12μg/ml（推荐量）下吸收率为100%。当锌浓度为5.28μg/ml时,培养4个时间吸收率达到18.30%-22.21%；当锌浓度为20μg/ml时,吸收率达到115.20%～121.11%；当锌浓度为32.4μg/ml时,吸收率达到138.23%～92.93%。由此可知,葡萄糖酸锌制剂在产品推荐剂量及锌浓度为20μg/ml时吸收效果都较好。P在10min时达到最大值为3.867±0.248cm2/min,此时肠囊对葡萄糖酸锌吸收最敏感。钙铁锌：较高的3个浓度水平之间,吸收率变化不显着（P>0.01）,都随着时间表现为先增后减再增的趋势。以锌浓度为5.28μg/ml（推荐量）下吸收率为100%。当锌浓度为14.12μg/ml时,培养4个时间吸收率分别为89.84%、115.10%、75.38%、122.60%；当锌浓度为20μg/ml时,吸收率分别为122.85%、129.18%、97.74%、60.58%；当锌浓度为32.4μg/ml时,吸收率分别达到94.78%、127.44%、65.60%、101.92%。由此可知,钙铁锌制剂随着锌元素浓度的增加,其在肠囊中的吸收效果并不稳定。P在20mmin时达到最大值为1.063±0.212cm2/min,此时肠囊对钙铁锌吸收最敏感。甘草锌：在锌最大浓度32.4μg/ml时,吸收率随时间表现为先增后减的趋势。以锌浓度14.12μg/ml（推荐量）下吸收率为100%。当锌浓度为5.28μg/ml时,培养4个时间吸收率可达34.66%-47.35%；当锌浓度为20μg/ml时,吸收率可达119.82%～100.97%；当锌浓度为32.4μg/ml时,吸收率分别达到104.21%、101.40%、79.14%、76.21%。由此可知,甘草锌制剂在推荐剂量及锌浓度为20μg/ml时具有较好的吸收效果。P在l0min时达到最大值为3.447±0.230cm2/min,此时肠囊对甘草锌吸收最敏感。氨基酸螯合锌：在锌最大浓度32.4μg/ml下,吸收率随时间表现为先增后平再增再减的趋势。以锌浓度为20μg/ml（推荐量）下吸收率为100%。当锌浓度为5.28μg/ml时,培养4个时间吸收率可达27.77%-36.17%；当锌浓度为14.12μg/ml时,吸收率可达52.57%-62.64%；当锌浓度为32.4μg/ml时,吸收率分别达到131.27%、85.57%、106.36%、97.84%。由此可知,氨基酸螯合锌制剂在其推荐剂量下较为稳定,吸收效果较好。P在10min时达到最大值为3.256±0.420cm2/min,此时肠囊对氨基酸螯合锌吸收最敏感。综上所述,葡萄糖酸锌、甘草锌在肉仔鸡回肠中生物利用率较高,氨基酸螯合锌次之,硫酸锌和钙铁锌较差。
李维,兰海楠,付志玲,杨艳红,郭风,刘禹,张辉,崔焕忠,赵雪,吴天成,马思慧,李雁强,郑鑫[3]（2013）在《生物活性肽的生理功能及在动物生产中的应用》文中认为英国科学家Bayliss等[1]从动物胃肠中发现了促胰腺素,这是人类首次发现活性肽类的物质。生物活性肽（Biologically active peptides,BAP）是由25个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的,分子量一般小于6 000Da,在构象上比较松散,是对生物机体的生命活动有益或具有特定生理作用的多功
兰楠海[4]（2012）在《猪生长激素模拟肽的筛选与活性鉴定》文中提出猪生长激素是由191个氨基酸组成的多肽类激素,主要由脑垂体分泌。大量研究表明生长激素具有促进蛋白合成、脂肪分解、骨细胞增殖、加快脂类代谢等重要的生物学作用。研究者们最初尝试提取猪脑垂体组织中的生长激素,加以利用。但由于生长激素分泌呈周期性、分泌量少、纯化工艺复杂等各种因素,使得生长激素的研究只停留在试验阶段,80年代中后期,随着分子生物学的进一步发展,人们开始通过基因表达的方式制备重组的生长激素,这为猪生长激素的应用提供了有利的条件。在生产实践中,研究者开始小规模的应用生长激素,取得了一定的效果,重组的生长激素促生长作用效果明显,但顾虑到动物产品中激素残留问题,所以包括我国在内的世界上大多数国家禁止在动物生产中使用外源性生长激素。因此,深入研究生长激素的促生长机理并寻找安全有效的替代物,一直是动物促生长研究中的重要的研究方向。主要从以下几个方面开展了生长激素模拟物的研究:（1）基于配体诱导受体二聚化是生长激素受体激活的前提必要条件,所以通过制备生长激素受体的抗体（IgG类）的方式,来模拟生长激素作用。（2）通过寻找生长激素分子上的关键活性序列（主要生长激素与受体的结合位点）合成多肽,用以模拟生长激素作用。（3）基于Jerne的免疫网络理论,以“内影像”型抗独特型抗体作为生长激素的模拟物。（4）基于生长激素负反馈调节机制,即通过抑制生长抑素进而达到促进生长激素的分泌的目的。主要研究结果包括以下几个方面:（1）利用本实验室制备并已获得国家发明专利的猪生长激素抗体为靶标,通过噬菌体随机12肽库的“吸附—洗脱—扩增”淘选程序,经过反复三轮的淘选,筛选出了与猪生长激素单克隆抗体特异性结合的噬菌体。提取其ssDNA并进行测序,并对其测序结果进行肽序列分析,筛选出含有相同氨基酸组成且出现频率较高的氨基酸序列,然后对所得序列进行氨基酸序列比对分析,发现共有2组同源性较高氨基酸序列,结合计算生物学分析确定核心序列为RPCLPHCNSTSD（相关研究内容已申报国家发明专利,专利申请号为201110442548.8）。（2）在建立的体外猪肝细胞模型上,进行了猪生长激素模拟肽的活性验证试验,通过激光共聚焦显微镜观察、流式细胞分析、竞争性结合受体分析等技术手段验证了猪生长激素模拟肽能够与肝细胞表面的生长激素受体相结合。通过Western-blot与流式细胞技术证实了猪生长激素模拟肽可以激活猪肝细胞上生长激素受体并启动JAK-STAT信号转导通路,并且也证明了猪生长激素模拟肽能够促进肝细胞生长因子IGF-I的分泌。（3）猪生长激素模拟肽信号转导机制的研究表明,猪生长激素模拟肽与猪生长激素激活了相同的信号转导路径。此外,猪生长激素模拟肽以剂量依赖性的方式激活信号转到蛋白,呈钟形激活曲线,其最大的激活浓度为其KD值的1/2左右,同时辅以抗体激活猪生长激素受体机制为佐证,表明猪生长激素模拟肽可能是通过二聚化的方式激活生长激素受体。（4）从猪生长激素的负反馈调节机制方面进行了初步的研究,构建了猪生长抑素受体的模型,并通过计算机软件与服务器评估了生长抑素受体模型的正确性,这也为猪生长激素的负调节机制的研究奠定了一定的理论基础。综上所述,利用噬菌体展示技术筛选了猪生长激素模拟肽,通过筛选、鉴定、组合、和验证等过程,我们获得猪生长激素模拟肽的核心氨基酸序列,并在此基础上,以肝细胞为模型,在细胞水平上验证了猪生长激素模拟肽能够特异性的与猪生长激素受体结合,并启动JAK-STAT信号转导通路,刺激肝细胞分泌IGF-I。此外,本研究还从生物信息学角度对猪生长激素的负反馈调节机制进行了初步的分析与预测。本研究采用活性肽模拟猪生长激素的方式,为实现动物的调控促生长研究提供理论依据,也为进一步探讨免疫调控激素促生长作用的机理,研制开发可替代激素的安全有效的新型生长激素活性肽疫苗奠定理论和技术基础。
李家驹[5]（2010）在《应激对肉仔鸡小肽吸收的影响及小肽调控脂肪代谢的机理研究》文中提出本论文以肌苷肽（Gly-Sar）及酪啡肽（β-CM-3）为试验材料,分别研究肉仔鸡小肽吸收过程中应激的影响机制以及小肽吸收后对肉仔鸡脂肪代谢的调控。试验一旨在研究糖皮质激素类物质地塞米松对肉仔鸡生产性能及血浆内源皮质酮含量的影响。试验选取体重相近的21日龄雄性AA肉仔鸡200只,随机分为4个处理,每个处理5个重复,每个重复10只鸡。其中3个处理组腹部皮下注射地塞米松,注射剂量分别为0.1、0.5、2.5mg/kgBW,对照组注射等体积生理盐水,连续注射7天。结果表明,与对照组相比地塞米松显着降低肉仔鸡平均日增重、平均日采食量及显着增加料重比（P<0.05）,并且地塞米松可显着降低肉仔鸡血浆内源皮质酮含量（P<0.05）。试验二旨在研究地塞米松对肉仔鸡离体空肠外翻肠囊吸收转运Gly-Sar及空肠黏膜形态的影响。本试验以试验一中肉仔鸡为试验材料,28日龄时,每个重复取4只鸡,屠宰后取每只鸡相同部位空肠肠段,制备外翻肠囊及肠道组织切片。与对照组相比,地塞米松可显着降低空肠囊膜Gly-Sar的吸收量（P<0.05）,显着降低空肠绒毛高度、吸收面积和绒毛高度/隐窝深度值（P<0.05）,显着增加隐窝深度（P<0.05）,但对空肠绒毛宽度无显着影响（P>0.05）。试验三旨在研究地塞米松对肉仔鸡空肠上皮细胞小肽转运载体PepT-1mRNA表达量及BBMV转运Gly-Sar能力的影响。本试验以试验一中肉仔鸡为试验材料,28日龄时,每个重复取4只鸡,屠宰后取每只鸡相同部位空肠肠段,制备BBMV及用作实时定量检测。与对照组相比,地塞米松可显着降低肉仔鸡空肠上皮细胞小肽转运载体PepT-1mRNA相对表达量（P<0.05）,显着降低BBMV Gly-Sar的转运能力（P<0.05）。试验四旨在体外培养肉仔鸡原代肝脏细胞以提供试验模型。本试验以健康的21日龄雄性AA肉仔鸡为试验材料,采用原位灌注法分离培养肉仔鸡原代肝脏细胞。结果表明,应用原位灌注法分离培养的肉仔鸡肝脏细胞培养8天后,仍可维持正常的形态及功能,可满足后续试验需要。试验五旨在研究酪啡肽（β-CM-3）对肉仔鸡体外培养的原代肝脏细胞脂肪代谢的影响。本试验以体外培养的肉仔鸡原代肝脏细胞为试验材料,将培养三天的肝脏原代细胞以1×105个/孔浓度接种于24孔板,培养一天后,向细胞培养板加入浓度分别为0,0.1,0.01,0.001,0.0001,0.00001 nmol/mlβ-CM-3,每个浓度作用时间为0,2,4,6,8h,每个时间及浓度对应三个重复。结果表明,与对照组相比β-CM-3可显着增加肉仔鸡肝脏细胞裂解液中脂肪酸合成酶、甘油三酯、丙二酰-CoA浓度（P<0.05）及显着降低肉毒羧碱转移酶浓度（P<0.05）,β-CM-3处理时间及处理浓度间具有显着交互作用（P<0.05）。此外,纳洛酮可显着抑制β-CM-3上述作用（P<0.05）。试验六旨在研究β-CM-3调控肉仔鸡体外培养原代肝脏细胞脂肪代谢的信号传导途径。本试验以体外培养的肉仔鸡原代肝脏细胞为试验材料,将培养三天的肝脏原代细胞以1×105个/孔浓度接种于24孔板,培养一天后,向细胞培养板中分别加入0.1nmol/mlβ-CM-3,0.1nmol/mlβ-CM-3+0.2nmol/ml PD98059,处理8h,每个处理3个重复。结果表明,与对照组相比,β-CM-3可显着增加肉仔鸡肝脏细胞裂解液中LXR浓度（P<0.05）,以及磷酸化的Raf、ERK1/2、MEK浓度（P<0.05）;与对照相比0.1nmol/mlβ-CM-3可显着增加肉仔鸡肝脏细胞裂解液中脂肪酸合成酶、丙二酰-CoA、甘油三酯浓度（P<0.05）,并显着降低肉仔鸡肝脏细胞裂解液中肉毒羧碱转移酶含量（P<0.05）。抑制剂PD98059可显着阻断β-CM-3上述作用（P<0.05）。试验七旨在研究β-CM-3对肉仔鸡脂肪代谢的影响。本试验选取体重相近的21日龄雄性AA肉仔鸡80只,随机分为4个处理,每个处理4个重复,每个重复5只鸡。其中3个处理组注射β-CM-3,注射剂量分别为0.1、0.5、1.0mg/kgBW,对照组注射等体积的生理盐水,连续注射7天。结果表明,对照组相比,β-CM-3可显着提高肉仔鸡平均日增重、平均日采食量及显着降低料重比（P<0.05）,显着提高肝脏、胸肌脂肪含量及腹脂率（P<0.05）;与对照组相比β-CM-3对胸肌中激素敏感脂肪酶（HSL）活性影响不显着（P>0.05）,但可显着降低肝脏及腹脂中HSL活性（P<0.05）及显着升高胸肌、肝脏及腹脂中苹果酸脱氢酶（MDH）活性（P<0.05）;与对照组相比,β-CM-3可显着提高血浆中胰岛素含量（P<0.05）,可显着减低血浆中胰高血糖素的含量（P<0.05）以及显着提高肉仔鸡血浆中极低密度脂蛋白和甘油三酯的含量（P<0.05）,但对甲状腺素及生长激素含量影响不显着（P>0.05）。试验八旨在筛选与β-CM-3调控肉仔鸡脂肪代谢相关的基因。本试验应用Affymetrix鸡基因组芯片,筛选β-CM-3处理前后与肉仔鸡肝脏脂肪代谢相关的表达量差异在4倍以上的基因。结果表明,β-CM-3处理前后肉仔鸡肝脏表达量差异在4倍以上的基因共168个,其中与脂肪代谢相关基因共37个。
王辉[6]（2010）在《谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的转运特点和对空肠发育影响的研究》文中指出为研究丙氨酰谷氨酰胺二肽（Alanylglutamine dipeptide, Ala-Gl）和甘氨酰谷氨酰胺二肽（Glyc ylglutamine dipepti de, Gly-Gln）在断奶仔猪肠道中的降解、吸收特点和两种二肽对断奶仔猪肠道发育的影响,本研究进行了以下三个试验：试验一：谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的水解本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠中的水解特点。试验采用体外培养断奶仔猪外翻肠段的方法,将培养液分三个处理（空白对照组、Ala-Gln二肽组和Gly-Gln二肽组）,每个处理三个重复,每个重复一个肠段,37℃恒温孵育60min,每5 min取样一次,通过检测培养液中完整二肽的含量来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在空肠中的水解情况。结果如下：在孵育60 min后,培养液中Ala-Gln二肽含量为9.00±1.57 mmol/L, Gly-Gln二肽含量为8.85±1.78 mmol/L,两种二肽浓度差异不显着（P>0.05）；孵育60 min后,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽的降解速率分别是0.17±0.03 mmol/L/miin、0.19±0.03 mmol/L/min,两者之间差异不显着（P>0.05）。结果表明：60 min内Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪肠段培养液中的含量均随着时间的延长逐渐降低,但并未完全降解,本试验为进一步研究这两种小肽的完整吸收提供了依据。试验二：谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠中的吸收特点本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠中的吸收特点。试验采用外翻肠囊的方法,将培养液分五个处理,即空白对照组、Ala-Gln二肽组、游离Ala+Gln组、Gly-Gln二肽组和游离Gly+Gln组,每个处理三个重复,每个重复一个外翻肠囊,37℃恒温孵育40 min后取样,通过检测培养液、浆膜液和组织匀浆液中完整二肽和单体谷氨酰胺的含量,来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在小肠中的吸收情况。结果如下：Ala-Gln的吸收量和吸收速率分别是10.26±0.74 mmol/L、0.26±0.02 mmol/L/min,显着高于Gly-Gln吸收量和吸收速率（分别是7.25±1.47 mmol/L、0.18±0.04 mmol/L/min） （P＜0.05）; Gly-Gln二肽吸收量（速率）高于Gly+Gln处理的中Gln吸收量（速率）,Ala-Gln二肽吸收量（速率）显着高于Ala+Gln处理中Gln吸收量（速率）（P<0.05）；游离Ala+Gln处理中Gln吸收量和转运速率分别是7.28±0.54 mmol/L和0.18±0.01 mmol/L/min,均高于Gly+Gln处理中Gln吸收量和吸收速率（P<0.05）,分别是4.79±0.54 mmol/L和0.12±0.01 mmol/L/min.以上结果表明,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽均能以完整形式被迅速吸收；Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽吸收速率,高于游离谷氨酰胺吸收速率。试验三：谷氨酰胺二肽对断奶仔猪空肠发育的影响本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽对断奶仔猪空肠发育的影响。采用体外培养肠组织的方法,将培养液分为三个试验组：空白对照组、Ala-Gln组和Gly-Gln二肽组；两个二肽组分别包括2mmol/L、4mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、30. mmol/L相应二肽处理,将组织置于二氧化碳培养箱中,95%O2 37℃恒温培养48 h～96 h,通过检测培养液中乳酸脱氢酶的活性、肠组织蛋白含量、谷氨酰胺酶和二胺氧化酶活力、BrdU掺入细胞核的情况、Caspase-3表达情况,来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽对肠组织中谷氨酰胺代谢、细胞增殖和凋亡的影响。结果显示：与空白对照组相比,添加Ala-Gln二肽或Gly-Gln二肽后能降低培养液中乳酸脱氢酶活力；能显着提高断奶仔猪空肠组织蛋白含量（P<0.05）、谷氨酰胺酶活力（P<0.05）和二胺氧化酶活力（P<0.05）,且随着二肽浓度提高而逐渐增加,当Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽浓度分别为20 mmol/L、30 mmol/L时,空肠组织蛋白含量和二胺氧化酶活力最高,当两种二肽浓度均为20mmol/L时,空肠组织谷氨酰胺酶活力最高；Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽都能显着提高BrdU掺入细胞核的阳性细胞百分比（P<0.01）、增加BrdU免疫阳性细胞的平均光密度（P<0.01）,均随着二肽浓度提高而逐渐增加,当两种二肽浓度均为30 mmol/L时效果最佳；Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽都能显着降低肠组织Caspase-3免疫阳性细胞百分比（P<0.01）和Caspase-3免疫阳性细胞平均光密度（P<0.01）,随着二肽浓度增加而逐渐降低；两种二肽浓度在20 mmol/L与30 mmol/L时,作用效果差异不显着（P>0.05）。结果表明,Ala-Gln二肽、Gly-Gln二肽通过提高肠组织谷氨酰胺代谢酶活力而加强组织对Gln利用,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高空肠组织蛋白含量。谷氨酰胺二肽作用效果随其浓度提高而呈剂量依赖效应,且相同浓度的两种二肽作用效果基本一致。当两种二肽浓度均为20 mmol/L时,空肠组织谷氨酰胺酶活力最高；当Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽浓度分别是20 mmol/L、30 mmol/L时,空肠组织蛋白含量和二胺氧化酶活力最高；当两种二肽浓度为30mmol/L时,其促进空肠细胞增殖,抑制细胞凋亡效果最佳。综上所述,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠培养液中培养60 min后并不完全被降解,其降解速率分别是0.17±0.03mmol/L/min. 0.19±0.03 mmol/L/min。40 min内,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽能以完整形式被吸收,吸收量分别是10.26±0.74 mmol/L和7.25±1.47 mmol/L; Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽,高于游离谷氨酰胺吸收速率。Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽通过提高空肠组织谷氨酰胺酶活力和二胺氧化酶活力,加强细胞对谷氨酰胺的利用强度,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高组织蛋白含量,最终起到保护细胞完整性的作用。两种肽作用效果均随二肽浓度提高而呈剂量依赖效应,且相同浓度的两种二肽作用效果基本一致。
陈文雅,计成,马秋刚,胡新旭,范仕苓[7]（2009）在《深海鱼肽对肉仔鸡肠道氨基酸吸收的影响》文中研究说明为研究深海鱼肽对肉仔鸡肠道氨基酸（苏氨酸、甘氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、组氨酸、赖氨酸）吸收的影响,选取健康体重差异不显着的6周龄爱拔益加肉仔公鸡10只,随机分为两个处理,分别是深海鱼肽处理组和游离氨基酸处理组,每个处理5个重复。采用外翻肠囊法,将肠段进行离体培养。结果显示:在深海鱼肽系统中,7种氨基酸回肠中的总吸收高于游离氨基酸系统;对苏氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸,深海鱼肽能很好的促进它们在小肠的吸收,且在小肠后段效果更明显;深海鱼肽系统中异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸的吸收相对于游离氨基酸系统要低。结果表明,深海鱼肽对不同肠段不同氨基酸作用效果不同。
陈文雅,计成,马秋刚,胡新旭,范仕苓[8]（2009）在《外翻肠囊法研究深海鱼肽对氨基酸吸收的影响》文中研究说明本文旨在研究深海鱼肽对肉仔鸡肠道氨基酸（苏氨酸、甘氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、组氨酸、赖氨酸）吸收的影响。选取健康体重差异不显着的6周龄爱拔益加肉仔公鸡10只,随机分为两个处理。分别是深海鱼肽处理组和游离氨基酸处理组,每个处理5个重复。采用外翻肠囊法,将肠段进行离体培养。结果显示:在深海鱼肽系统中,7种氨基酸回肠中的总吸收高于游离氨基酸系统;对苏氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸,深海鱼肽能很好的促进它们在小肠的吸收,且在小肠后段效果更明显;深海鱼肽系统中异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸的吸收相对于游离氨基酸系统要低。结果表明,深海鱼肽对不同肠段不同氨基酸作用效果不同。
江勇[9]（2008）在《肉仔鸡小肽转运载体的克隆表达及其转运调控研究》文中认为本课题研究了肉鸡小肽转运载体不同肠段的发育及分布规律,并克隆,表达、纯化了肽转运载体C端抗原表位区,同时建立了肉鸡肽转运载体cPEPT1外源表达的293-T细胞模型、研究了激素和调节因子对细胞模型中小肽转运载体的调控作用。试验一荧光定量PCR检测肉仔鸡肠道肽转运载体cPEPT1 mRNA方法的建立:根据鸡肽转运载体cPEPT1 mRNA和看家基因18SrRNA序列,分别设计cPEPT1和18SrRNA引物,建立了包括RNA提取、反转录、PCR的鸡小肠cPEPT1基因表达检测方法,并通过模板浓度、引物浓度及退火温度等条件的摸索进行了试验条件的优化,试验二实时定量PCR评定肉鸡小肠PEPT1 mRNA基因发育变化:分析不同日龄肉仔鸡小肠不同肠段肽转运载体PEPT1 mRNA的发育规律。选用1日龄商品代雄性Arbor Acre （AA）肉鸡100羽,随机分为5组,采用实时定量PCR法研究肉鸡肠道表达的肠段差异;以9、18、27、36、45日龄AA肉鸡十二指肠、空肠、回肠样品为模板研究肉鸡肠道肽转运载体（Peptide transporter1, PEPT1） mRNA表达发育变化。结果表明:AA肉鸡PEPT1 mRNA的表达丰度从十二指肠、空肠到回肠依次降低;AA鸡PEPT1 mRNA在十二指肠及空肠发育规律表现出相反趋势,十二指肠9、18、27丰度较高,其中27日龄显着高于45日龄,而空肠36、45表达丰度较高,显着高于9、18日龄丰度。试验三实时定量PCR评定北京油鸡小肠PEPT1mRNA基因发育变化:分析不同日龄北京油鸡小肠不同肠段肽转运载体PEPT1 mRNA的发育规律。选用1日龄雄性商品代北京油鸡100羽,随机分为5组,采用实时定量PCR法研究肉鸡肠道表达的肠段差异;以18、36、54、72、90日龄北京油鸡十二指肠、空肠、回肠样品为模板研究肉鸡肠道肽转运载体1 mRNA表达发育变化。结果显示: （1）北京油鸡肠道PEPT1 mRNA的表达丰度从十二指肠、空肠到回肠依次降低;北京油鸡PEPT1 mRNA在十二指肠与空肠、回肠发育规律不同,十二指肠18、36日龄丰度较高,显着高于54、72及90日龄的相应值,其中18日龄表达量最高,而72日龄最低;空肠90日龄时PEPT1 mRNA表达量最高,显着高于18、36日龄的相应值,而在54、72日龄时的表达丰度则高于18、36日龄,但结果不显着;回肠PEPT1 mRNA表达量以72日龄时最高,54、72及90日的表达量龄显着高于18、36日龄时的表达量。试验四北京油鸡cPEPT1基因编码区的克隆:试验成功构建了重组载体pEASY-T3-PEPT1。根据GenBank发布序列设计引物,通过RT-PCR成功从肉鸡空肠肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其克隆进pEASY-T3载体并测定核苷酸序列,经扩增成功获得到测序正确的2145bp的基因。测序结果证明测序和方向均正确,该基因通过基因序列分析包括12个跨膜区一个较大的亲水环,抗原表位区集中于蛋白的C端。试验五鸡PEPT1抗原表位基因的原核表达及序列鉴定:表达并纯化鸡肠道肽转运载体PEPT1抗原表位区。根据GenBank的原鸡PEPT1保守区序列设计引物,提取鸡十二指肠道黏膜总RNA进行反转录,以合成的cDNA为模板,PCR扩增PEPT1抗原表位区序列后与pEASY-T3载体进行T克隆;测序正确后,采用定向克隆的方法将PEPT1抗原表位区基因连接到pET22B+载体上,成功构建了pET-22B-PEPT1重组质粒。将重组质粒克隆转化到原核表达宿主Rosetta （DE3）中。诱导蛋白表达,并通过SDS-PAGE和Westernblot及质谱测序验证。构建得到原核融合重组载体pET22B-6His-PEPT1;诱导后表达得到6His-PEPT1融合蛋白,纯化得到表达产物并进行了初步的鉴定,所得产物经质谱分析其序列正确。试验六鸡肠道肽转运载体抗原表位基因毕赤酵母表达系统的构建:根据GenBank发布序列设计引物,从鸡空肠肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其克隆进pEASY-T3载体并测定核苷酸序列,设计一对PEPT1抗原表位区段外源表达的PCR引物,利用已得到得的全长目的基因（2145）pEASY-T3 -PEPT1载体为模板,设计酶切位点为EcoRⅠ和NotⅠ,扩增出目的片断。将该片段克隆到pPIC9K载体,通过重组质粒酶切验证、菌落PCR鉴定,证明得到的阳性重组质粒含有目的基因片段,抗原表位区1000bp,。将抗原表位区基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,测序结果证明测序和方向均正确,并将其命名为pPIC9K-PEPT1（s）。通过诱导蛋白序列正确。试验七北京油鸡PEPT1基因编码区的克隆及其在HEK293-T细胞的转染条件优化:通过本试验,我们构建了北京油鸡PEPT1的真核pcDNA3-PEPT1,并且同时为了检测转染体系的状态,同时建立了绿色荧光蛋白的共转染体系,通过对HEK293-T的生长条件优化,确定了最佳转化时间及转化条件,为建立细胞模型建立了基础。试验八北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1基因表达载体在293-T细胞的表达鉴定:本试验通过分子生物学手段建立了北京油鸡PEPT1细胞模型。根据GenBank的原鸡PEPT1保守区序列设计引物,从北京油鸡肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其与pEASY-T3载体连接并测定核苷酸序列,成功获得到测序正确的2145bp的基因,并将北京油鸡肠肽转运载体PEPT1基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0,构建了真核表达载体pcDNA3-PEPT1。采用脂质体介导将表达质粒pcDNA3-PEPT1转染293-T细胞,同时转染pcDNA3.0-EGFP荧光蛋白进行转染体系荧光监测,流式细胞术检测转录后16h、20h、24h的荧光强度。分别在16h、20h、24h、44h收集等量转染细胞,抽提转染细胞总RNA,DNAseⅠ处理残留的DNA污染,反转录合成cDNA,以构建不同稀释度的pEASY-T3-PEPT1质粒为模板,建立SYBERGREEN实时荧光定量标准曲线,检测PEPT1在293-T细胞中的转录水平。结果表明,在质粒转染入293-T细胞后,在16h、20h、24h、44h均有稳定的转录水平。从而建立了在293-T细胞表达北京油鸡PEPT1的外源模型。试验九北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1基因表达载体在293-T细胞的转运调控:通过克隆北京油鸡cPEPT1基因在293-T细胞中进行瞬时表达,检测重组蛋白cPEPT1的异源转运甘亮肽活性。方法:培养293-T细胞待细胞生长至90-95%融合时,以胰酶消化稀释1:2传代至24孔板,待细胞融合度达到约95%,将构建好的重组pcDNA3-cPEPT1采用脂质体转染法导入293-T细胞,每孔质粒添加量1ug,Real-Time PCR检测mRNA表达,同时在PEPT1导入后22h加入3H标定的甘亮肽孵育液,孵育液中添加H+、GH及胰高血糖素,分别在30、60min中止反应,液闪仪测定孵育液放射性。结果:用Real-Time PCR法检测表明293-T细胞可表达cPEPT1;在表达细胞中,与H+及胰高血糖素相比,生长激素添加有效的促进了表达细胞对甘亮肽的吸收。
李玲玲[10]（2008）在《蝇蛆肽的酶法制备及其对大鼠营养作用、生物活性的研究》文中研究说明本研究以经过脱脂处理的蝇蛆为试验材料。以温度、时间和底物浓度为影响因素,初步筛选各影响因素的水平,通过正交试验优化预处理单酶酶解条件,确定最优预处理条件为:温度90℃,时间20分钟,底物浓度为2%。将经过预处理的脱脂蝇蛆粉进行复合酶酶解条件筛选。以酶解温度、复合酶量、酶配比、酶解时间、pH值为影响因素,先初步筛选各影响因素的水平,再通过正交试验优化酶解条件,筛选出脱脂蝇蛆粉的最佳酶解条件。结果表明,脱脂蝇蛆粉的最优酶解条件为A1B3C3D4E3,即温度（A）为45℃,酶量（B）为8000U/g,酶配比（C）为风味酶:木瓜酶:胃蛋白酶:胰蛋白酶=35:50:5:10,酶水解时间（D）为7 h,pH（E）为7.5。其中脱脂蝇蛆粉溶液水解度的最大影响因素为酶解温度。对制得的蝇蛆肽进行感官性质、得率和分子量测定。得到的蝇蛆肽呈褐色粉末,较细腻,无异味,蝇蛆肽得率为35.42%,得到的蝇蛆肽大部分为分子量分布在5.8KD左右的小分子肽类物质。将制得的蝇蛆肽分别以0.2%、0.5%和1%的量添加到SD大鼠日粮中,研究蝇蛆肽对SD大鼠营养作用、抗氧化和免疫功能的影响。结果表明:（1）大鼠日粮中添加0.2%、0.5%和1%的蝇蛆肽均能显着提高SD大鼠的日增重（P<0.05）,降低SD大鼠的料重比（P<0.05）。添加0.2%蝇蛆肽对SD大鼠各种营养物质代谢率没有显着提高,添加0.5%和1%蝇蛆肽对SD大鼠各种营养物质代谢率均有明显提高,其中对CP、EE、Ca、P代谢率,CF消化率提高显着（P<0.05）。（2）添加蝇蛆肽可以显着降低SD大鼠血清MDA含量（P<0.05）,显着提高GSH-Px的活力（P<0.05）。添加0.5%和1%的蝇蛆肽可以提高SD大鼠血清CAT活力（P<0.05）,显着提高SD大鼠SOD活力（P<0.05）,说明本试验酶解得到的蝇蛆肽具有抗氧化活性。（3）添加蝇蛆肽能够提高SD大鼠脾脏系数和胸腺系数,提高了SD大鼠血清IgA、IgG和溶菌酶的含量,尤其以添加0.5%和1%蝇蛆肽作用显着（P<0.05）。说明本试验酶解得到的蝇蛆肽具有提高机体免疫功能的活性。
二、Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽在蛋鸡肠道内水解的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽在蛋鸡肠道内水解的研究（论文提纲范文）
（1）亮氨酸-亮氨酸肽介导的肉仔鸡小肠上皮细胞调控通路研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 中英文缩略表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 小肽的转运吸收机制 |
| 1.1 小肽转运载体 |
| 1.2 单胃动物小肽的吸收机制 |
| 1.3 小肽吸收的特点 |
| 2 小肽的生物学功能 |
| 2.1 抗菌、增强机体免疫力 |
| 2.2 抗氧化作用 |
| 2.3 维护肠道健康 |
| 2.4 促进蛋白质的合成 |
| 2.5 促进矿物质的吸收 |
| 2.6 生理调节作用 |
| 3 小肽在动物生产上的应用 |
| 3.1 小肽在反刍动物上的应用 |
| 3.2 小肽在猪生产中的应用 |
| 3.3 小肽在家禽生产当中的应用 |
| 3.4 小肽在水产动物中的应用 |
| 4 研究目的意义及内容 |
| 5 技术路线 |
| 第二章 亮氨酸-亮氨酸肽对体外培养肉仔鸡IEC生长、增殖和凋亡的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验耗材及主要仪器 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 完全培养基及试剂配制 |
| 1.3.2 细胞培养 |
| 1.3.3 原代细胞免疫荧光鉴定 |
| 1.3.4 细胞生长曲线绘制 |
| 1.3.5 细胞分裂指数 |
| 1.3.6 细胞克隆形成率计算 |
| 1.3.7 细胞活力测定 |
| 1.3.8 细胞周期和细胞凋亡测定 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 鸡原代IEC鉴定结果 |
| 2.2 IEC生长曲线 |
| 2.3 细胞分裂指数 |
| 2.4 细胞活力与克隆形成率测定 |
| 2.5 细胞凋亡测定 |
| 2.6 细胞周期测定 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 亮氨酸-亮氨酸肽对体外培养肉仔鸡IEC差异基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验耗材及主要仪器 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 完全培养基配制 |
| 1.3.2 细胞培养 |
| 1.3.3 样品采集 |
| 1.3.4 细胞总RNA提取 |
| 1.3.5 转录组测序 |
| 1.3.6 测序数据质量评估 |
| 1.3.7 参考基因组比对 |
| 1.3.8 差异基因分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序质控数据概述 |
| 2.2 参考基因组比对 |
| 2.3 基因表达水平分析 |
| 2.4 小肽对体外培养肉仔鸡IEC基因表达的影响 |
| 2.5 差异表达基因KEGG富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 亮氨酸-亮氨酸肽对体外培养肉仔鸡IEC中差异蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验耗材及主要仪器 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 完全培养基配制 |
| 1.3.2 细胞培养 |
| 1.3.3 试验处理及试验设计 |
| 1.3.4 样品采集 |
| 1.4 蛋白组学研究 |
| 1.4.1 蛋白抽提检测及定量 |
| 1.4.2 SDS-PAGE电泳 |
| 1.4.3 肽段酶解 |
| 1.4.4 质谱分析鉴定 |
| 1.4.5 下机数据分析 |
| 1.5 生物信息学分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 蛋白组学定性结果 |
| 2.2 蛋白鉴定结果 |
| 2.3 蛋白质定量结果分析 |
| 2.4 差异表达蛋白KEGG通路富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 1 全文总结 |
| 2 创新点和有待解决问题 |
| 2.1 本试验创新点 |
| 2.2 有待解决问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果等 |
| 导师简介 |
（2）基于外翻肠囊法的补锌制剂生物利用率评价研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1.1 锌的生物学功能与补锌制剂 |
| 1.1.1 锌的生物学功能 |
| 1.1.2 锌的吸收与代谢 |
| 1.1.3 影响锌吸收的因素 |
| 1.1.4 锌的人体生理需求量 |
| 1.1.5 补锌制剂的发展 |
| 1.2 锌生物利用率的评定方法 |
| 1.2.1 体内法评价锌生物利用率 |
| 1.2.2 体外法评价锌生物利用率 |
| 1.2.3 外翻肠囊法评价锌生物利用率 |
| 1.3 课题研究目的、意义及主要内容 |
| 1.3.1 研究目的与意义 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 第二章 外翻肠囊的构建及有效性的验证 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 外翻肠囊模型的构建 |
| 2.2.2 浆膜液终体积在不同时间下的吸收变化趋势 |
| 2.2.3 补锌制剂培养不同时间后的吸收规律分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 构建外翻肠囊操作及装置设计 |
| 2.3.2 肠囊有效性及最佳培养时间确定 |
| 第三章 基于外翻肠囊法的补锌制剂生物利用率评价研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 硫酸锌 |
| 3.2.2 葡萄糖酸锌 |
| 3.2.3 钙铁锌 |
| 3.2.4 甘草锌 |
| 3.2.5 氨基酸螯合锌 |
| 3.2.6 五种补锌制剂锌吸收率比较分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 五种锌源在肉仔鸡回肠外翻肠囊中的吸收 |
| 3.3.2 五种锌源在肉仔鸡回肠外翻肠囊中的吸收动力学 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 总结 |
| 4.2 需要进一步解决的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表文章 |
（3）生物活性肽的生理功能及在动物生产中的应用（论文提纲范文）
| 1 生物活性肽的分类 |
| 2 生物活性肽的生理功能 |
| 2.1 降压活性肽 |
| 2.2 抗菌活性肽 |
| 2.3 抗氧化活性肽 |
| 2.4 免疫调节活性肽 |
| 2.5 抗肿瘤活性 |
| 2.6 降低胆固醇活性肽 |
| 3 生物活性肽在生产中的应用 |
| 3.1 活性肽对饲料适口性的影响 |
| 3.2 活性肽对动物的影响 |
| 4 前景与展望 |
（4）猪生长激素模拟肽的筛选与活性鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪生长激素概述 |
| 1.1 猪生长激素的结构 |
| 1.2 猪生长激素的分泌器官及其生理作用 |
| 1.3 猪生长激素的作用机制 |
| 1.4 猪生长激素的安全性与应用局限 |
| 1.5 猪生长激素可替代物的研究进展 |
| 2 噬菌体展示技术 |
| 2.1 噬菌体展示技术的基本原理 |
| 2.2 噬菌体展示技术的研究进展 |
| 3 生物活性肽的研究进展 |
| 3.1 生物活性肽的分类 |
| 3.2 生物活性肽的生理功能 |
| 3.3 生物活性肽在动物生产中的应用 |
| 第二章 采用噬菌体展示技术进行猪生长激素模拟肽的淘选和鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌种来源 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要化学试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 猪生长激素单克隆抗体杂交瘤细胞株的复苏及亚克隆试验 |
| 2.2 猪生长激素单克隆抗体腹水的制备与纯化 |
| 2.3 利用噬菌体展示技术进行猪生长激素模拟肽的淘选试验 |
| 2.4 阳性噬菌体的扩增试验 |
| 2.5 噬菌体测序模板的快速纯化 |
| 2.6 阳性噬菌体与靶分子的特异性结合试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 猪生长激素单克隆抗体杂交瘤细胞株的复苏及亚克隆试验结果 |
| 3.2 单克隆抗体腹水及培养上清效价的测定 |
| 3.3 阳性噬菌体筛选结果 |
| 3.4 阳性噬菌体氨基酸序列比对分析 |
| 3.5 阳性噬菌体与抗体靶分子的特异性结合分析 |
| 3.6 猪生长激素模拟肽核心序列的确定 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 猪生长激素模拟肽与肝细胞模型上猪生长激素受体特异性结合的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 猪生长激素模拟肽及猪的来源 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要化学试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 猪肝细胞体外培养试验模型的建立 |
| 2.2 猪生长激素与猪生长激素模拟肽的荧光分子标记试验 |
| 2.3 猪生长激素模拟肽与肝细胞结合动力学试验 |
| 2.4 猪生长激素与猪生长激素模拟肽的共定位试验 |
| 2.5 猪生长激素与猪生长激素模拟肽竞争性结合猪生长激素受体试验 |
| 2.6 猪生长激素与猪生长激素模拟肽的封闭受体试验 |
| 2.7 猪生长激素和猪生长激素模拟肽与猪生长激素受体的饱和性结合试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 猪肝细胞体外培养试验模型的建立 |
| 3.2 猪生长激素与猪生长激素模拟肽的荧光分子标记试验结果 |
| 3.3 猪生长激素模拟肽与肝细胞结合动力学及共定位试验结果 |
| 3.4 猪生长激素与猪生长激素模拟肽的竞争性结合受体试验结果 |
| 3.5 猪生长激素与猪生长激素模拟肽的封闭受体试验结果 |
| 3.6 猪生长激素与猪生长激素模拟肽在细胞模型上饱和试验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 猪生长激素模拟肽启动信号转导及机制研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 主要试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 猪生长激素模拟肽激活细胞信号转导蛋白AK |
| 2.2 猪生长激素模拟肽启动JAK-STAT细胞信号转导通路 |
| 2.3 猪生长激素模拟肽刺激肝细胞分泌IGF-Ⅰ的测定试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 猪生长激素模拟肽激活细胞信号转导蛋白JAK结果 |
| 3.2 猪生长激素模拟肽启动JAK-STAT细胞信号转导通路研究结果 |
| 3.3 猪生长激素模拟肽刺激肝细胞分泌IGF-Ⅰ的测定试验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五章 猪生长激素负反馈调节的生物信息学分析与预测 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 猪生长抑素受体蛋白及模板蛋白的搜索 |
| 2.2 猪生长抑素受体的同源模建 |
| 2.3 猪生长抑素受体的结合位点分析 |
| 2.4 配体与猪生长抑素受体的对接与预测 |
| 3 结果 |
| 3.1 猪生长抑素受体同源蛋白的序列水平评估结果 |
| 3.2 抑制剂与生长抑素的对接研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第六章 结论与建议 |
| 1 结论 |
| 1.1 采用噬菌体展示技术进行猪生长激素模拟肽的淘选和鉴定 |
| 1.2 猪生长激素模拟肽的体外活性研究 |
| 1.3 猪生长激素模拟肽激活受体的机制研究 |
| 1.4 猪生长激素负调节机制的初步研究 |
| 2 创新点 |
| 3 存在的不足与建议 |
| 参考文献 |
| 缩略语中英文对照表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）应激对肉仔鸡小肽吸收的影响及小肽调控脂肪代谢的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 小肽研究背景 |
| 2 基因芯片简介 |
| 3 动物脂肪代谢 |
| 4 应激对动物影响及相关作用机理 |
| 5 试验研究目的、意义及设计方案 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 地塞米松对肉仔鸡生产性能及血浆内源皮质酮含量的影响 |
| 试验二 地塞米松对肉仔鸡离体空肠Gly-Sar 吸收转运及空肠黏膜形态的影响 |
| 试验三 地塞米松对肉仔鸡空肠上皮细胞小肽转运载体PepT-1mRNA表达量及 BBMV 转运 Gly-Sar 效率的影响 |
| 试验四 肉仔鸡肝脏细胞分离及体外原代培养 |
| 试验五 酪啡肽对肉仔鸡肝脏细胞脂肪代谢的影响 |
| 试验六 酪啡肽调控肉仔鸡肝脏细胞脂肪代谢的信号传导途径 |
| 试验七 酪啡肽对肉仔鸡脂肪代谢的影响 |
| 试验八 酪啡肽调控肉仔鸡脂肪代谢相关基因的筛选 |
| 第三章 论文总结 |
| 1 论文结论 |
| 2 论文创新点 |
| 3 有待进一步解决的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的转运特点和对空肠发育影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文索引 |
| 一、前言 |
| 二、文献综述 |
| 1. 谷氨酰胺二肽的理化性质 |
| 2. 谷氨酰胺二肽的吸收和利用特点 |
| 2.1 谷氨酰胺二肽的吸收 |
| 2.2 谷氨酰胺二肽的利用特点 |
| 3. 谷氨酰胺二肽对肠道发育的影响 |
| 4. 谷氨酰胺二肽的抗分解/蛋白同化作用、免疫调节作用和抗氧化作用 |
| 5. 谷氨酰胺二肽对断奶仔猪生产性能的影响 |
| 三、有待研究的问题及本研究的内容、目的和意义 |
| 1. 研究中存在的问题 |
| 2. 研究目的、内容和意义 |
| 3. 技术路线 |
| 四、试验研究 |
| 实验一、谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的水解 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 试验设计 |
| 1.2 试验材料 |
| 1.3 体外培养过程和样品处理 |
| 1.4 检测指标和方法 |
| 1.5 数据分析与处理 |
| 2. 结果与分析 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 试验二、谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠中的吸收特点 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 试验设计 |
| 1.2 试验材料 |
| 1.3 体外培养过程和样品处理 |
| 1.4 检测指标和方法 |
| 1.5 数据分析与处理 |
| 2. 结果与分析 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 试验三、谷氨酰胺二肽对断奶仔猪空肠发育的影响 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 试验设计 |
| 1.2 试验材料 |
| 1.3 肠组织的培养和样品处理 |
| 1.4 检测指标和方法 |
| 1.5 数据处理 |
| 2. 结果与分析 |
| 2.1 谷氨酰胺二肽对空肠组织总蛋白含量和相关酶活力的影响 |
| 2.2 谷氨酰胺二肽对空肠细胞增殖的影响 |
| 2.3 谷氨酰胺二肽对空肠细胞凋亡的影响 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 谷氨酰胺二肽对空肠组织总蛋白含量和相关酶活力的影响 |
| 3.2 谷氨酰胺二肽对空肠细胞增殖的影响 |
| 3.3 谷氨酰胺二肽对空肠细胞凋亡的影响 |
| 4. 小结 |
| 五、总体讨论 |
| 1. 谷氨酰胺二肽在空肠的水解和吸收 |
| 2. 谷氨酰胺二肽对空肠发育的影响 |
| 六、结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士研究生期间发表文章 |
（7）深海鱼肽对肉仔鸡肠道氨基酸吸收的影响（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 试验分组 |
| 1.3.2 培养液配置 |
| 1.3.3 外翻肠囊的制作与培养 |
| 1.3.4 浆膜液的收集和样品制备 |
| 1.3.5 样品分析方法 |
| 1.3.6 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 苏氨酸在培养体系中的吸收 |
| 2.2 甘氨酸在培养体系中的吸收 |
| 2.3 脯氨酸在培养体系中的吸收 |
| 2.4 异亮氨酸在培养体系中的吸收 |
| 2.5 亮氨酸在培养体系中的吸收 |
| 2.6 组氨酸在培养体系中的吸收 |
| 2.7 赖氨酸在培养体系中的吸收 |
| 2.8 氨基酸在培养体系中的总体吸收情况 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（9）肉仔鸡小肽转运载体的克隆表达及其转运调控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1 小肽营养理论的提出 |
| 2 小肽的吸收和转运特点 |
| 3 小肽转运载体性质及吸收转运途径 |
| 4 影响动物小肽吸收和转运其它因素 |
| 5 小肽转运的营养意义 |
| 6 小肽吸收转运的研究方法 |
| 7 本论文的立题依据和研究目的 |
| 第二章 AA 肉仔鸡及北京油鸡肠道PEPT1 分布研究 |
| 试验一、肉仔鸡肠道肽转运载体mRNA 检测荧光定量PCR 方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验二、实时定量PCR 评定肉鸡小肠PEPT1 mRNA 基因发育变化 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验三、北京油鸡小肠PEPT1 mRNA 基因发育变化评定 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 PEPT1 基因的克隆及抗原表位克隆表达 |
| 试验四、北京油鸡PEPT1 基因编码区的克隆 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 试验五、鸡PEPT1 抗原表位基因的原核表达及序列鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 试验六、PEPT1 基因在pPIC9K 中的构建及蛋白表达、序列鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四章 PEPT1 基因的外源表达鉴定及其转运活性研究 |
| 试验七、北京油鸡PEPT1 基因编码区的克隆及其在293-T 细胞的转染条件优化 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 试验八、北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1 基因表达载体在293-T 细胞的表达鉴定检测 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 试验九、北京油鸡PEPT1 基因在293-T 细胞中的表达及其转运调控 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第五章 结论 |
| 1 基本结论 |
| 2 突出创新点 |
| 3 有待于进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 附录 肉仔鸡 PEPT1 和 18srRNA 的 mRNA 序列 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）蝇蛆肽的酶法制备及其对大鼠营养作用、生物活性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 生物活性肽国内外研究现状 |
| 1.1.1 寡肽吸收理论的建立 |
| 1.1.2 生物活性肽的生理活性作用 |
| 1.1.3 生物活性肽在饲料工业上的应用 |
| 1.1.4 生物活性肽的来源 |
| 1.1.5 生物活性肽的制备方法 |
| 1.2 动物蛋白制备生物活性肽酶解工艺的研究进展 |
| 1.2.1 动物蛋白制备生物活性肽的方法 |
| 1.2.2 酶解工艺流程 |
| 1.2.3 酶解工艺的发展趋势 |
| 1.3 本课题研究的目的和意义 |
| 1.3.1 目的 |
| 1.3.2 意义 |
| 1.4 研究思路与技术路线 |
| 1.4.1 研究思路 |
| 1.4.2 技术路线 |
| 第二章 酶解脱脂蝇蛆粉预处理条件的筛选 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 脱脂蝇蛆粉酶解条件的筛选 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 蝇蛆肽理化性质的测定 |
| 4.1 感官性质 |
| 4.2 TRICINE-SDS-PAGE 电泳法检测分子量分布 |
| 4.3 蝇蛆肽得率的计算 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 蝇蛆肽对大鼠营养作用的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 添加蝇蛆肽对SD 大鼠机体抗氧化功能的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 添加蝇蛆肽对SD 大鼠机体免疫能力的影响 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.2 结果与分析 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 论文总体讨论和总结 |
| 8.1 论文总体讨论 |
| 8.2 论文总体结论 |
| 8.3 本研究的创新之处 |
| 8.4 对未来研究的展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽在蛋鸡肠道内水解的研究（论文参考文献）
- [1]亮氨酸-亮氨酸肽介导的肉仔鸡小肠上皮细胞调控通路研究[D]. 杜宝龙. 甘肃农业大学, 2021(09)
- [2]基于外翻肠囊法的补锌制剂生物利用率评价研究[D]. 谭珏. 浙江工商大学, 2013(08)
- [3]生物活性肽的生理功能及在动物生产中的应用[J]. 李维,兰海楠,付志玲,杨艳红,郭风,刘禹,张辉,崔焕忠,赵雪,吴天成,马思慧,李雁强,郑鑫. 中国兽医杂志, 2013(03)
- [4]猪生长激素模拟肽的筛选与活性鉴定[D]. 兰楠海. 吉林农业大学, 2012(05)
- [5]应激对肉仔鸡小肽吸收的影响及小肽调控脂肪代谢的机理研究[D]. 李家驹. 中国农业科学院, 2010(10)
- [6]谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的转运特点和对空肠发育影响的研究[D]. 王辉. 四川农业大学, 2010(03)
- [7]深海鱼肽对肉仔鸡肠道氨基酸吸收的影响[J]. 陈文雅,计成,马秋刚,胡新旭,范仕苓. 中国家禽, 2009(18)
- [8]外翻肠囊法研究深海鱼肽对氨基酸吸收的影响[A]. 陈文雅,计成,马秋刚,胡新旭,范仕苓. 中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集, 2009
- [9]肉仔鸡小肽转运载体的克隆表达及其转运调控研究[D]. 江勇. 中国农业科学院, 2008(10)
- [10]蝇蛆肽的酶法制备及其对大鼠营养作用、生物活性的研究[D]. 李玲玲. 黑龙江八一农垦大学, 2008(09)