一、乙肝患者复合感染巨细胞病毒的实验研究（论文文献综述）
李品[1]（2020）在《基于“火郁发之”研究“升阳清热”法治疗热毒炽盛型急性期SAT的疗效与机制》文中进行了进一步梳理目的:亚急性甲状腺炎（Subacute thyroiditis,SAT）是常见的甲状腺炎症性疾病,按照疾病表现可分为急性期,缓解期和恢复期。目前已证实SAT急性期治疗是本病的关键,也是中医治疗的优势期。本文首先通过文献学研究,对“火郁发之”理论进行系统溯源,再论述导师基于“火郁发之”理论采用“升阳清热”法治疗本病的理论依据和组方思想;其次通过临床观察,客观评价“升阳清热”法治疗热毒炽盛型急性期SAT的疗效及安全性;再次,应用Meta分析,验证高师提出的“升阳清热”法治疗SAT的疗效和安全性;最后,体外实验研究观察“升阳清热”法干预腺病毒致甲状腺滤泡上皮Nthy-roi3-1细胞感染的焦亡过程,阐释其治疗急性期SAT的作用机制。材料与方法:1.“火郁发之”理论用于热毒炽盛型急性期SAT治疗的理论研究1.1“火郁发之”理论溯源:将“火郁发之”文献进行深度挖掘,采用文献学、逻辑学的方法,对“火郁发之”的理论内涵进行梳理,其内容包括“火”、“郁”、“发”各自的内涵,历代医家对“火郁发之”的认知以及“火郁发之”代表方剂分别进行阐述。1.2吾师高天舒教授运用“火郁发之”理论论治SAT思想传承:从定义、病因病机、理法方药等方面,阐释吾师高天舒教授对于SAT论治理念。论述基于“火郁发之”理论的中药复方瘿痛饮治疗热毒炽盛型急性期SAT的理论基础和组方思想。2.“升阳清热”法治疗热毒炽盛型急性期SAT的临床疗效观察本课题采取随机、对照的临床试验方法,观察病例均为在2017年01月至2019年12月期间于辽宁中医药大学附属医院内分泌科就诊的初诊未经治疗的急性期SAT（热毒炽盛证）患者,本研究共纳入合格病例共计60人。结合诊断标准纳入患者,并符合参考2002年《中药新药临床研究指导原则》,符合热毒炽盛证候。采用随机对照方法分为强的松组和中药组。中药组采用具有“升阳清热”中药复方瘿痛饮,由导师高天舒教授自拟,具体组成如下:升麻、柴胡、僵蚕、薄荷、黄连、黄芩、牛蒡子、生甘草、桔梗、板蓝根、连翘、玄参、蝉蜕、姜黄,实验观察期为疗程均为4周,随访时间为12周。观察指标包括疼痛改善程度、疼痛缓解时间,退热时间,甲状腺肿大消退程度及时间、中医症状积分改善率、中医证候改善率、甲状腺功能、血沉、SAT复发率、甲减发生率以及安全性指标、依从性指标和不良事件等。3.“升阳清热”法治疗SAT有效性及安全性的Meta分析基于中国生物医学文献数据库（CBM）、CNKI中国期刊全文数据库、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库、pubmed数据库、Embase数据库、Cochrane对照试验中心数据库等七个数据库进行系统文献搜索,共得到243篇SAT文献,经剔除重复,综述、系统评价等文章以及筛除研究内容不符、设计不严谨等文献后,应用Meta分析对“升阳清热”法治疗SAT的有效性和安全性进行验证,指标包括总体有效率、中医症状积分改善率、中医证候改善率、疼痛缓解程度及止痛时间、退热时间、甲状腺肿大消退程度及时间、心悸、烦躁易怒症状、甲状腺功能、血沉、不良反应、SAT复发率、甲减发生率及等指标。4.“升阳清热”法干预腺病毒致甲状腺滤泡上皮Nthy-roi3-1细胞感染的焦亡过程的体外研究4.1制备含药血清:50只健康、雄性、清洁级、200±20g体重的Wistar大鼠（购于辽宁长生生物技术有限公司,动物许可证号:SCXK（辽）2010-0001）采用随机数字表法随机分成5组（空白组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、强的松组）,每组10只。受试方剂瘿痛饮,其中中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组分别按照正常成人的0.5、1.0、2.0倍剂量。经过换算,低剂量组药物浓度=0.33g/ml,中剂量组药物浓度=0.67g/ml,高剂量组药物浓度=1.32g/ml,每次灌胃剂量为1ml/100g,每日3次,连续灌胃7d。强的松组大鼠,按照成人10mg日三次正常剂量计算,将醋酸波尼松龙用0.9%Nacl溶解为0.156mg/ml浓度,每次灌胃剂量为1ml/100g,每日3次,连续灌胃7d。大鼠空白组大鼠则予生理盐水1ml/100g,每日3次,连续灌胃7d。7d后处死大鼠,经腹主动脉采血,离心、灭活补体、过滤细菌后置于EP管中,密封保存于-80℃冰箱中。4.2培养细胞:正常人甲状腺滤泡上皮Nthy-roi3-1细胞购自上海衡生物科技有限公司,在进行含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素的RPMI-1640培养基,细胞培养箱（环境温度37℃、5%CO2、相对饱和湿度）下细胞培养,1:2传代。4.3腺病毒感染:随机将Nthy-roi3-1细胞分为2组,即空白组和模型组。将模型组腺病毒感染成功后,将其随机分为5组,分别为模型组、强的松组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组。按照分组组别将模型组、强的松组、中药低剂量组、中药高剂量组进行腺病毒感染。将各组Nthy-roi3-1细胞对应加用含药血清,其中空白组为正常大鼠血清+正常非腺病毒感染细胞;模型组为正常大鼠血清+腺病毒感染细胞;强的松组为强的松含药血清+腺病毒感染细胞;中药低剂量组为低剂量中药含药血清+腺病毒感染细胞;中药中剂量组为中剂量中药含药血清+腺病毒感染细胞;中药高剂量组为高剂量中药含药血清+腺病毒感染细胞。分别应用免疫荧光法观察细胞中的Caspase-1蛋白含量,免疫化学发光法测定的细胞上清液T3、T4水平,比色法测定细胞上清液LDH,ELISA检测各组细胞上清液IL-1β、IL-18水平,Western-blot测定细胞GSDMD-N、Caspase-1、NLRP-3、ELAVL-1蛋白表达,Real-time PCR测定细胞Tg、TPO、Caspase-1、NLRP-3、ELAVL-1 m RNA表达,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞焦亡水平。结果:1.“火郁发之”理论用于热毒炽盛型急性期SAT治疗的理论研究分别阐述了“火”、“郁”、“发”各自的概念涵义,并解释了“火郁”的成因和种类、“发之”的适用范围和具体方法。分别比较各朝代对于“火郁发之”的理论认知,总结出“火郁发之”理论涵义由《内经》中五运六气“郁”、“发”到金元时期的发表出汗,到最终采用“因势利导”治疗火热性疾病的转变过程。从经方、验方的角度系统阐述“火郁发之”代表方剂和组方思想。最后以“火郁发之”理论为基础,深入传承吾师高天舒教授对热毒炽盛型急性期SAT的论治理论,并对自创中药复方瘿痛饮治疗本病的组方理论依据进行阐释。2.“升阳清热”法治疗热毒炽盛型急性期SAT的临床疗效观察2.1 VAS疼痛评分:治疗2周时,中药组改善VAS疼痛评分疗效优于强的松组（P=0.020<0.05）;治疗4周时,中药组与强的松组两组疗效相当,无统计学差异。（P=0.307>0.05）。2.2甲状腺肿大程度测定:分别于治疗前、2周、4周和16周对各组患者甲状腺肿大程度进行触诊,两组患者甲状腺肿大程度均随时间推移而逐步减小,且2周、4周时中药组与强的松组相比差异无统计学意义（2周:P=0.281>0.05,4周:P=0.875>0.05）;随诊观察第16周时,中药组甲状腺肿大程度明显小于强的松组且差异有统计学意义（P=0.039<0.05）。2.3退热时间、疼痛消失时间:中药组退热时间（5.90±2.81天）与强的松组（6.60±4.06天）相比无显着差异（P=0.375>0.05）,中药组疼痛消失时间（6.87±2.35天）与强的松组（10.00±5.78天）相比明显缩短,且差异有统计学意义（P=0.025<0.05）。2.4中医症状量化评分及中医证候疗效:治疗4周后与治疗前相比,中药组（3.57±4.20）与强的松组（7.37±6.75）中医症状量化评分均有显着降低（P=0.000<0.01,P=0.000<0.01）,且中药组中医症状评分明显低于强的松组（P=0.009<0.01）,中医证候疗效明显优于强的松组（P=0.026<0.05）。2.5甲状腺功能:治疗4周后与治疗前相比,中药组与强的松组血清FT3、FT4均有明显下降,TSH明显升高,但两组之间差异无统计学意义（FT3:P=0.774>0.05,FT4:P=0.264>0.05,TSH:P=0.186>0.05）。2.6血沉:治疗2周、4周时,中药组和强的松组ESR水平均成下降趋势,但两组之间差异均无统计学意义（2周:P=0.744>0.05,4周:P=0.526>0.05）。2.7复发率、甲减发生率:在第16周时,中药组治疗后无病例复发,强的松组有1例复发;中药组甲减发生2例（甲减发生率6.7%）,强的松组发生3例（甲减发生率10%）,就复发率和甲减发生率而言,两者差异无统计学意义（P=0.313>0.05,P=064>0.05）。2.8安全性指标:对治疗前后血、尿常规、肝肾功能、心电图进行检测,结果除强的松组治疗后白细胞总数（8.03±1.47^109/L）出现显着上升（正常范围内）外,两组其他指标均无异常。2.9不良事件及依从性指标:不良事件强的松组1例,中药组0例,两组比较无统计学意义（P=0.313>0.05）。依从性方面,中药组95.87±5.70（%）,强的松组94.10±6.17（%）,均>80%,经秩和检验分析后表明差异无统计学意义（P=0.227>0.05）3.“升阳清热”法治疗SAT有效性及安全性Meta分析经严格筛查文献,排除不合格文献223篇,本研究共纳入20篇文献,累计1445例病例数。3.1“升阳清热”法可以提高SAT治疗总体有效率,显着提高证候有效率。在改善SAT症状方面,“升阳清热”法在改善颈前疼痛、缩短疼痛时间,缩小颈前肿大、减轻心悸、烦躁易怒等方面优于西药常规治疗;在退热时间,缩小甲状腺肿时间上与西药常规治疗相当。3.2检验指标方面,“升阳清热”法改善能够下调FT3,FT4指标,但目前仍需更多的临床临床观察佐证。“升阳清热”法在上调TSH、及下降ESR方面与西医常规治疗相当,但联合西药常规治疗后明显优于单纯西医常规治疗。3.3在不良反应、SAT复发率、甲减发生率等方面,“升阳清热”法均优于西医常规治疗。4.“升阳清热”法干预腺病毒致Nthy-roi3-1细胞感染的焦亡过程的体外研究4.1免疫荧光检测Caspase-1:模型组荧光强度明显增强,而各中药组和强的松组荧光均有不同程度减弱。免疫荧光观察,造模后Caspase-1大量表达于细胞质中,各组实验药物能够不同程度下调Caspase-1表达水平。4.2免疫化学发光法检测细胞上清液T3、T4:模型组T3、T4与空白组比较均明显升高,提示造模后存在甲状腺滤泡上皮细胞破坏,甲状腺激素释放。各用药组与模型组相比T3、T4水平均有不同水平的下调,其中中药中剂量、高剂量组、强的松组T3水平与模型组相比均有显着下调,但三者相比差异无统计学意义;观察T4水平变化,中药中剂量组（9.483±0.194ng/ml）、高剂量组（10.267±0.121ng/ml）、强的松组（10.233±0.258ng/ml）与模型组（26.033±0.258ng/ml）相比均有显着下调,且中药中剂量组T4水平与强的松组相比显着降低,差异有统计学意义（P=0.000<0.01）。4.3比色法测定细胞上清液LDH含量:与空白组相比模型组细胞死亡率显着增高,其他用药组与模型组相比细胞死亡率均有不同程度下调,其中中药中剂量组（14.267±0.476%,P=0.000<0.01）和中药高剂量组细胞（14.700±0.623%,P=0.000<0.01）)死亡率显着低于强的松组（18.983±0.691%）,且差异有统计学意义4.4 ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-18水平:与空白组相比模型组细胞上清液中的IL-1β、IL-18水平显着升高。各实验药物组与模型组相比,IL-1β、IL-18水平均显着下调。其中中药中剂量组、高剂量组与强的松组相比IL-1β（P=0.216>0.05）、IL-18水平（P=0.530>0.05）,无统计学差异。4.5 Western blot检测细胞Caspase-1、ELAVL-1、GSDMD-N、NLRP-3蛋白表达水平:与空白组相比,模型组Caspase-1、ELAVL-1、GSDMD-N、NLRP-3蛋白表达水平显着增高,各实验药物组与模型组相比各指标蛋白表达水平均有不同程度降低。其中中药中剂量组在下调Caspase-1（P=0.019<0.05）、ELAVL-1（P=0.016<0.05）、GSDMD-N（P=0.011<0.05）、NLRP-3（P=0.006<0.01）蛋白表达水平方面明显优于强的松组,差异均有统计学意义。4.6 Real-time PCR检测细胞中Tg、TPO、Caspase-1、NLRP-3、ELAVL-1 m RNA:与空白组相比,模型组Tg、TPO、Caspase-1、NLRP-3、ELAVL-1 m RNA水平均显着增高,各实验药物组与模型组相比各指标m RNA水平均有不同程度降低。中药中剂量组在下调Tg（P=0.000<0.01）、TPO（P=0.000<0.01）、Caspase-1（P=0.000<0.01）、ELAVL-1m RNA（P=0.000<0.01）、NLRP-3（P=0.000<0.01）转录水平方面明显优于强的松组。4.7细胞Annexin V-FITC PI染色:与空白组相比,模型组Annexin V（+）/PI（+）和Annexin V（+）/PI（-）细胞比例显着升高。各实验药物组Annexin V（+）/PI（+）和Annexin V（+）/PI（-）细胞比例与模型组均有不同程度降低。其中中药中剂量组、高剂量组Annexin V（+）/PI（+）细胞比例均显着低于强的松组,但Annexin V（+）/PI（-）细胞比例与强的松组相比无显着差异。结论:1吾师高天舒教授基于“火郁法之”理论提出的“升阳清热”法是治疗热毒炽盛型急性期SAT行之有效且安全的治法。2“升阳清热”法能够改善热毒炽盛型急性期SAT患者缓解疼痛、缩短发热时间、减轻甲状腺肿大程度、恢复甲状腺功能、控制炎症（血沉）反应,且甲减发生率和SAT复发率均较低。经过Meta分析验证,基于“火郁发之”理论下的“升阳清热”法是治疗SAT有效、安全的治疗方法。3“升阳清热”法能够抑制腺病毒致Nthy-roi3-1细胞感染的焦亡过程,其机制主要与下调焦亡上游调控分子ELAVL1表达和转录水平,抑制NLRP3炎症小体活化、下调Caspase-1活化水平、抑制炎性细胞因子IL-1β、IL-18表达和GSDMD-N的表达有关。
康成栋[2]（2019）在《一例乙型肝炎病毒感染致系统性红斑狼疮样病变儿童及文献复习》文中进行了进一步梳理目的:乙型肝炎病毒感染不仅引起肝脏疾病,而且还引起肝外表现。约20%的乙型肝炎病毒感染患者出现肝外表现。乙型肝炎病毒感染引起的肝外表现通常是非特异性的,包括血清疾病样综合征、肾小球肾炎、多关节炎、多动脉炎、皮肤病、冷球蛋白血症、自身抗体的产生。然而,目前尚没有乙型肝炎病毒感染模拟系统性红斑狼疮的病例报道。我们通过报告一例乙型肝炎病毒感染导致系统性红斑狼疮样病变儿童,提高对乙型肝炎病毒感染肝外表现及引起系统性红斑狼疮样病变的认识。病人与方法:1例9岁男孩因“关节肿痛4周,皮疹3周,蛋白尿2周”就诊于福建医科大学福总临床医学院儿科。我们询问该患儿的病史,并对他进行了体格检查。同时测定患儿的血常规、尿常规、血生化、自身抗体、补体C3、补体C4、病原体（包括乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、Epstein-Barr病毒）等指标,并进行肾活检组织病理检查。给于患儿静脉滴注甲基强的松龙48mg,每日1次,连续2周,然后在6周内逐渐减量直至停用,同时口服恩替卡韦0.5mg,每日1次,疗程3个月。之后随访患儿1年。结合患儿的症状、体征、实验室化验结果和肾脏病理及文献复习对该病例进行分析。结果:患儿于入院前4周,双下肢出现疼痛和肿胀,并逐渐出现双下肢红色皮疹。入院体检时发现臀部和双下肢有明显的紫癜样皮疹。实验室检查提示肾病水平蛋白尿、肾小球源性血尿、补体C4<0.07g/L、补体C3 1.08g/L、抗核抗体1:100、抗双股DNA抗体阳性,血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数为1.6×108,血清人类免疫缺陷病毒抗体阴性,血清丙型肝炎病毒、Epstein-Barr病毒和巨细胞病毒DNA拷贝数<1.0×103。肾脏病理光镜检查显示肾小球系膜细胞增生;免疫组化显示IgM、IgG、C3d、C4D沿肾小球血管襻沉积,IgA、C1q在肾小球系膜区沉积,HBsAg在肾小球基底膜沉积;电镜显示肾小球系膜细胞增生,肾小球系膜区可见电子致密物。经过8周的甲基强的松龙和3个月的恩替卡韦治疗后,患儿的关节疼痛消失,皮疹消失,尿蛋白和尿隐血转阴,抗核抗体和抗双股DNA抗体阴性,补体C40.156 g/L,血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数4.88×104。随访1年,患儿未诉任何不适,无关节痛、脱发、光过敏、皮疹等表现,尿白蛋白和尿隐血均阴性,补体C4 0.147g/L,血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数1.12×108,抗核抗体1:100和抗双股DNA抗体阳性。结论:乙型肝炎病毒感染可以模拟系统性红斑狼疮,提示当临床拟诊系统性红斑狼疮时需检测乙型肝炎病毒。
魏艳艳[3]（2019）在《TIGIT在慢性HBV感染者T细胞中的表达和功能研究》文中研究说明乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）引起,危及全球人类健康的传染病。在HBV感染过程中,适应性免疫应答在肝脏损害及病毒清除中发挥重要作用。研究表明,急性HBV感染时,激活外周血CD4+辅助性T细胞及CD8+细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T-lymphocyte response,CTL）反应能够有效清除病毒。慢性HBV感染时,抑制性受体在病毒特异性CD8+T细胞表达逐渐增多,参与了CD8+T细胞耗竭,使其无法发挥有效清除病毒作用,导致病毒持续存在和肝损伤。阻断抑制性受体通路可逆转T细胞耗竭,增强T细胞免疫,从而增强病毒清除能力。T细胞免疫球蛋白域和免疫受体酪氨酸抑制基序（T cell immunoglobulin and immune receptor tyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT）是在基因组研究中发现的共抑制受体,主要表达于T细胞、自然杀伤性细胞（Natural killer,NK）和调节性T细胞（Regulated T cell,Treg）等细胞表面。在病毒感染免疫方面,TIGIT在淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（Lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV）、丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）和人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）等感染的T细胞免疫中作为共抑制受体起关键作用。TIGIT作为抑制性受体在乙肝病毒感染中作用的相关研究少。近期有研究报道,在HBs Ag阳性小鼠中,TIGIT作用于肝脏HBV特异性CTL导致细胞免疫耐受,HBV难以清除,阻断TIGIT通路或抑制TIGIT表达可使HBV特异性CTL功能恢复,导致肝脏炎症激活和乙肝病毒清除。程序性死亡受体-1（programmed cell death protein 1,PD-1）也是参与T细胞耗竭的一个关键负调控分子。TIGIT作为抑制性受体在慢性HBV感染者T细胞中的表达和功能及其与PD-1是否有协同作用尚无相关报道。本研究主要探讨TIGIT在慢性HBV感染者T细胞中的表达和功能,并揭示TIGIT与PD-1在慢性HBV感染者T细胞功能耗竭中的协同作用。本研究分为以下三个部分:第一部分TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞表达的研究目的:研究TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞、T细胞分化亚群和HBV特异性CTL上的表达及其与PD-1表达的关系。方法:收集和分离73例慢性HBV感染者和28例健康志愿者（healthy donors,HD）血浆和外周血单个核细胞（PBMC）并冻存。采用流式细胞术检测:（1）TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者组和HD组CD4+和CD8+T细胞表达;（2）TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者组和HD组CD4+和CD8+T细胞不同分化阶段的表达;（3）采用人白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）-A*0201/FLPSDFFPSV（HBVcore18-27）和HLA-A*0201/NLVPMVATV（cytomegalovirus 65 k Da Phosphoprotein,CMVpp65）五聚体（pentamer,PENTA）检测HBV和CMV特异性CTL,随后检测TIGIT和PD-1在HBV及对照CMVpp65特异性CTL表达。结果:（1）与HD组相比,TIGIT在慢性HBV感染者PBMC中的CD4+和CD8+T细胞表达明显升高（12.28±0.93%vs.7.98±0.86%,P=0.0083;30.77±2.00%vs.16.61±2.17%,P=0.0001）;（2）与乙肝病毒e抗原（Hepatitis B e Antigen,HBe Ag）阴性组相比,TIGIT在HBe Ag阳性慢性HBV感染者组CD4+和CD8+T细胞表达明显升高（13.79±1.31%vs.10.19±1.17%,P=0.0130;32.94±2.84%vs.27.75±2.64%,P=0.0043）;（3）与HD组相比,TIGIT在慢性HBV感染者各T细胞分化亚群表达均上调（P值均<0.05）;且TIGIT在慢性HBV感染者CD28-CD45RA+CD4+和CD28-CD45RA+CD8+T细胞表达最高（P<0.01,P<0.001）;（4）TIGIT在慢性HBV感染者CD4+和CD8+T细胞上的表达和PD-1的表达呈正相关。TIGIT和PD-1在CD4+T细胞及CD8+T细胞表面均存在双阳性表达;（5）与CMVpp65特异性CTL相比,TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者HBVcore18-27特异性CTL表达明显升高（P<0.0001,P=0.0003）;（6）与PENTA-CD8+T细胞相比,TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者HBVcore18-27特异性CTL表达明显升高（P<0.0001,P<0.0001）;（7）TIGIT和PD-1在HBVcore18-27特异性CTL上双阳性表达所占百分比与TIGIT单阳性及PD-1单阳性表达所占百分比相比有差异（P<0.001）,以双阳性表达所占百分比最高。结论:（1）TIGIT在慢性HBV感染者PBMC中的CD4+和CD8+T细胞表达均上调,在效应性T细胞亚群的表达最高;TIGIT在HBe Ag阳性慢性HBV感染者PBMC中的T细胞表达高于HBe Ag阴性者;（2）TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者CD4+和CD8+T细胞上存在共表达状态;（3）TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者HBV特异性CTL高表达,且以TIGIT和PD-1共表达状态为主。第二部分TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞中的功能研究目的:研究TIGIT对慢性HBV感染者CD8+T细胞细胞因子分泌、细胞增殖及凋亡敏感性的影响及TIGIT和PD-1的协同作用。方法:收集和分离85例慢性HBV感染者血浆和PBMC并冻存。采用流式细胞仪检测:（1）用佛波酯/离子霉素（phorbol 12-myristate-13-acetate/ionomycin,PMA/ionomycin）刺激,表面染色法检测TIGIT+和TIGIT-CD8+T细胞群表达CD69;采用胞内染色法检测TIGIT+和TIGIT-CD8+T细胞群分泌颗粒酶B（Granzyme B,Gr B）和穿孔素（Perforin）;（2）用HBVcore18-27肽段刺激,检测:（1）TIGIT阳性和TIGIT阴性HBV特异性CTL群表达CD69,TIGIT阳性和TIGIT阴性HBV特异性CTL群分泌Gr B、Perforin、干扰素-γ（interferon-gamma,IFN-γ）、白介素-2（Interleukin-2,IL-2）和肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）;（2）采用羟基荧光素二酯酸盐琥珀酰亚胺脂（carboxy-fluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE）实验检测细胞增殖;（3）TIGIT+和TIGIT-CD8+T细胞在未处理组、活化诱导凋亡（activation induced cell death,AICD）组和阻断TIGIT通路组凋亡比例;（4）用PMA/Ionomycin刺激,检测TIGIT+PD-1+和TIGIT-PD-1-CD8+T细胞分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α;（5）阻断TIGIT和/或PD-1通路,用HBVcore18-27肽段刺激,检测HBV特异性CTL分泌IFN-γ和IL-2。结果:（1）与TIGIT-CD8+T细胞群相比,TIGIT+CD8+T细胞群表面活化标记CD69表达明显升高（P=0.0095）,TIGIT+CD8+T细胞群中分泌Gr B和Perforin的细胞所占百分比明显下降（P=0.0205,P=0.0377）;（2）与TIGIT阴性HBV特异性CTL群相比,慢性HBV感染者TIGIT阳性HBV特异性CTL群表达CD69明显升高（P=0.0014）,TIGIT阳性HBV特异性CTL群中能够分泌Perforin和Gr B的细胞所占百分比明显下降（P=0.0360,P=0.0205）;（3）与TIGIT阴性CTL群相比,慢性HBV感染者TIGIT阳性HBV特异性CTL群中能够分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的细胞所占百分比均下调（P=0.0407,P=0.0446,P=0.0087）,细胞增殖降低（P=0.0029）;阻断TIGIT通路并用HBVcore18-27肽段刺激,HBV特异性CTL增殖增加（P=0.0023）;（4）与未活化诱导组相比,活化诱导后CD8+T细胞群凋亡敏感性增强（P=0.0004）;与活化诱导后TIGIT-CD8+T细胞组相比,活化诱导后TIGIT+CD8+T细胞群凋亡敏感性增强（P=0.0070）;阻断TIGIT通路,CD8+T细胞凋亡敏感性下降（P=0.0003）;（5）与TIGIT-PD-1-CD8+T细胞相比,慢性HBV感染者TIGIT+PD-1+CD8+T细胞分泌IFN-γ（P<0.001）、IL-2（P<0.001）、TNF-α（P<0.001）所占百分比明显下调;与对照组相比,阻断TIGIT和/或PD-1通路慢性HBV感染者HBV特异性CTL中分泌IFN-γ和IL-2的细胞所占百分比明显增多（P<0.001,P<0.001）;与单独阻断TIGIT通路相比,联合阻断TIGIT和PD-1通路组慢性HBV感染者HBV特异性CTL中分泌IFN-γ和IL-2的细胞所占百分比明显增多（P<0.001,P<0.001）。结论:（1）表达TIGIT的慢性HBV感染者PBMC中CD8+T细胞和HBV特异性CTL活性增加,其释放效应分子功能受到抑制;（2）TIGIT参与抑制慢性HBV感染者CD8+T细胞细胞因子分泌和细胞增殖,使其细胞凋亡敏感性增加;（3）阻断TIGIT通路,慢性HBV感染者HBV特异性CTL分泌细胞因子上调,细胞增殖功能增强,CD8+T细胞凋亡敏感性降低;（4）阻断TIGIT和PD-1通路可逆转耗竭的HBV特异性CTL细胞因子分泌功能。第三部分TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞表达与临床指标相关性研究目的:研究TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞和HBVcore18-27特异性CTL表达与临床指标的相关性。方法:收集和分离141例慢性HBV感染者和20例HD外周血血浆和PBMC并冻存。用如下方法检测:（1）全自动生化仪检测谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）和转肽酶（gamma-glutamyl transpeptidase,GGT）等指标;（2）化学发光法检测乙肝病毒表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBs Ag）、HBe Ag滴度等;（3）实时荧光定量聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）检测HBVDNA载量;（4）采用流式细胞术检测:（1）TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者CD4+和CD8+T细胞表达;（2）TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者HBVcore18-27特异性CTL表达;（3）TIGIT在慢性乙型肝炎组、乙肝相关肝硬化组和乙肝肝硬化合并原发性肝癌组和健康者组外周血CD4+和CD8+T细胞表达;（4）TIGIT在接受拉米夫定（lamivudine,LAM）、阿德福韦酯（adefovir dipivoxil,ADV）、替比夫定（Telbivudine,LDT）和恩替卡韦（entecavir,ETV）抗病毒治疗和未接受抗病毒治疗慢性HBV感染者外周血CD4+和CD8+T细胞表达。结果:（1）TIGIT在CD4+和CD8+T细胞表达分别与ALT水平和HBVDNA载量对数值呈正相关;（2）TIGIT在HBVcore18-27特异性CTL表达分别与ALT水平和HBVDNA载量对数值呈正相关;PD-1在HBVcore18-27特异性CTL表达分别与ALT水平和HBVDNA载量对数值呈正相关;（3）TIGIT和PD-1在CD4+和CD8+T细胞共表达分别与ALT水平和HBVDNA载量对数值呈正相关;（4）与未接受抗病毒治疗组相比,TIGIT在接受四种核苷（酸）类似物治疗的慢性HBV感染者CD4+和CD8+T细胞表达均下调,有明显统计学差异（P<0.001,P<0.001）,且在ETV组表达最低;（5）随着慢性HBV感染病程进展,TIGIT在慢性HBV感染者CD4+和CD8+T细胞表达呈上升趋势（P<0.001,P<0.001）,且TIGIT和PD-1在慢性HBV感染者CD4+和CD8+T细胞共表达亦呈上升趋势（P<0.001,P<0.001）。结论:（1）在慢性HBV感染者中,乙肝病毒复制和肝脏炎症环境可能诱导TIGIT和PD-1在T细胞和HBVcore18-27特异性CTL表达上调,并随着病情进展TIGIT和PD-1在T细胞的共表达呈上升趋势;（2）四种核苷（酸）类似物抗病毒药物均可抑制TIGIT在慢性HBV感染者CD4+和CD8+T细胞表达。
李维薇[4]（2019）在《婴儿巨细胞病毒肝炎的病证代谢组学研究》文中提出目 的:通过对婴儿巨细胞病毒（Human Cytomegalovirus,HCMV）肝炎血浆及尿液的代谢组学检测,建立该疾病基于差异性生物标志物的湿热内蕴证、脾虚湿困证及气滞血瘀证的代谢物特征谱库。明确婴儿HCMV肝炎各证型的代谢网络变化特征,为婴儿HCMV肝炎证本质研究提供一定的客观依据。同时将HCMV导致的婴儿肝脏损伤分为无黄疸型HCMV肝炎、HCMV胆汁淤积性肝病及胆道闭锁伴HCMV感染这三种临床常见类型,通过对血浆样本的代谢组学检测,探讨HCMV造成肝脏损伤的潜在生物标志物,为这类疾病的早期诊断及治疗提供科学依据。此外通过对婴儿肝炎综合征气滞血瘀证患儿和肝外胆道闭锁气滞血瘀证患儿的尿液样本进行代谢组学检测,总结气滞血瘀证的生物标志物,寻找“异病同证”的生物学依据;同时寻找胆道闭锁的生物标志物,探索该疾病的无创诊断的可行性。方法:本研究血浆、尿液样本均来源于首都医科大学附属北京儿童医院。采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱质谱联用（UHPLC-LTQ/Orbitrap-MS）技术及气相色谱质谱联用（GC-MS）技术进行血浆和尿液样本的代谢组学检测。本研究第二部分为纳入患儿的临床研究,详细列出了每一例HCMV肝炎患儿的黄疸程度及持续时间、症状体征及辨证分型。根据纳入和排除标准进行分组,并进行各组患儿的一般资料统计和实验室检查分析。本研究第三部分,共采集婴儿HCMV肝炎患儿的血浆样本115例,其中湿热内蕴证38例、脾虚湿困证36例、气滞血瘀证41例,另收集同时期正常对照组39例。采用UHPLC-LTQ/Orbitrap-MS和GC-MS的代谢组学方法检测所有血浆样本,获得各组的代谢轮廓。同时对数据进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）等多元统计分析,综合非参数检验及倍数变化（Fold change,FC）结果进行差异性代谢物筛选,通过LipidBlast、Mona等数据库鉴定差异性代谢物,寻找该疾病湿热内蕴证、脾虚湿困证及气滞血瘀证的潜在血浆生物标志物。本研究第四部分,共采集婴儿HCMV肝炎患儿的尿液样本122例,其中湿热内蕴证44例、脾虚湿困证35例、气滞血瘀证43例,另收集同时期正常对照组40例,均为在北京儿童医院保健中心体检的健康婴儿。同样采用UHPLC-LTQ/Orbitrap-MS和GC-MS的代谢组学方法检测所有尿液样本,获得各组的代谢轮廓。同时对数据进行PCA和OPLS-DA等多元统计分析,综合非参数检验及FC结果进行差异性代谢物筛选,并鉴定差异性代谢物,寻找该疾病湿热内蕴证、脾虚湿困证及气滞血瘀证的潜在尿液生物标志物。本研究第五部分,研究共纳入127例受试者,其中HCMV婴儿肝炎22例、HCMV胆汁淤积性肝病39例、HCMV感染伴胆道闭锁26例,正常对照组40例。采集这些受试者的血浆样本,采用GC-MS的代谢组学方法进行检测,获得各组的代谢轮廓。同时对数据进行PCA和OPLS-DA等多元统计分析,综合非参数检验及FC结果进行差异性代谢物筛选,并鉴定差异性代谢物。总结HCMV肝脏损伤涉及的代谢通路,寻找HCMV感染伴胆道闭锁的生物标志物。本研究第六部分,研究共纳入101例受试者,其中胆道闭锁患儿25例,婴儿肝炎综合征患儿38例,正常对照组婴儿38例。采集这些受试者的尿液样本,采用GC-MS的代谢组学方法进行检测,获得各组的代谢轮廓。同时对数据进行PCA和OPLS-DA等多元统计分析,综合非参数检验及FC结果进行差异性代谢物筛选,并鉴定差异性代谢物。寻找气滞血瘀证生物标志物;同时寻找胆道闭锁相关的尿液生物标志物,探索代谢组学技术用于胆道闭锁无创诊断的可行性。结 果:本研究第二部分发现气滞血瘀证组患儿黄疸程度重,持续天数长,胆汁淤积性肝病、胆道闭锁及肝硬化是该证型常见的西医肝脏损害类型。脾虚湿困证组患儿黄疸程度较轻,湿热内蕴证组患儿黄疸程度轻重不一,无黄疸型HCMV肝炎与胆汁淤积性肝病是这两个证型常见的西医肝脏损害类型。在实验室检查中,气滞血瘀证组肝脾肿大、肝硬化、胆囊充盈欠佳者较多,说明该证型肝脏损伤程度较重。本研究第三部分发现HCMV肝炎湿热内蕴证、脾虚湿困证及气滞血瘀证和正常对照组在PCA模型和OPLS-DA模型中区分明显,各证型在代谢物层面存在显着差异。三个证型组共有35个共同差异性代谢物,涉及甘油三酯、鞘磷脂、磷脂酰胆碱及溶血磷脂酰胆碱代谢紊乱,其中又以甘油三酯代谢紊乱最为显着。甘氨胆酸在气滞血瘀证组显着上调,是该证型可能的生物标志物。褪黑素在湿热内蕴证组显着上调,与该证型的炎症状态有关。本研究第四部分发现HCMV肝炎各证型组的尿液样本在PCA模型和OPLS-DA模型中均区分明显,提示各证型在尿液代谢物层面存在显着差异。各证型均涉及丙氨酸,天门冬氨酸和谷氨酸代谢、D-精氨酸与鸟氨酸代谢、组氨酸代谢、精氨酸与脯氨酸代谢紊乱。湿热内蕴证组存在D-葡萄糖、D-麦芽糖及柠檬酸等能量相关代谢物的下调;脾虚湿困证组存在氨基丙二酸、丁酸、马尿酸等与肠道菌群相关代谢物的上调或下调,涉及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,赖氨酸的降解及生物合成,组氨酸代谢通路的紊乱;气滞血瘀证存在氨基酸代谢通路的紊乱及乙醛酸和二羧酸代谢,柠檬酸循环等能量相关代谢通路的紊乱。本研究第五部分根据HCMV致不同类型肝脏损害的临床表现,将其分为HCMV婴儿肝炎组、HCMV胆汁淤积性肝病组及HCMV合并胆道闭锁组,并通过与正常对照组的对比,最终找到29个差异性代谢物。这些差异性代谢物涉及一系列氨基酸、脂肪酸及能量代谢紊乱。此外,我们还发现5个差异性代谢物,即氨基甲酸、谷氨酸、L-天冬氨酸、L-高丝氨酸,去甲肾上腺素均在HCMV合并胆道闭锁组上调,经ROC分析这5个代谢物构建的诊断模型可以较好区分HCMV合并胆道闭锁组和HCMV胆汁淤积性肝病组。本研究第六部分描述了胆道闭锁和婴儿肝炎综合征气滞血瘀证的尿液代谢轮廓。在OPLS-DA模型中,胆道闭锁组、婴儿肝炎综合征组和正常对照组区分明显,提示各组存在代谢组学差异。两个疾病的气滞血瘀证均涉及氨基酸及嘌呤代谢紊乱。此外经ROC分析发现α-氨基己二酸N-乙酰基-D-甘露糖胺是区分胆道闭锁和婴儿肝炎综合征潜在的生物标志物。结论:1.使用本研究所采用的UHPLC-LTQ/Orbitrap-MS和GC-MS代谢组学技术能够对HCMV肝炎湿热内蕴证、脾虚湿困证及气滞血瘀证血浆及尿液样本进行代谢轮廓分析,并能够区分和阐述各证型与正常对照组不同的代谢特征。2.根据本研究第二部分基于UHPLC-LTQ/Orbitrap-MS和GC-MS的血浆样本代谢组学检测,初步确定HCMV肝炎各证型血浆样本呈不同的代谢特征。各证型均涉及甘油三酯、鞘磷脂、磷脂酰胆碱及溶血磷脂酰胆碱代谢紊乱,以甘油三酯代谢紊乱最为显着。3.根据本研究第三部分基于UHPLC-LTQ/Orbitrap-MS和GC-MS的尿液样本代谢组学检测,初步确定HCMV肝炎各证型尿液样本呈不同的代谢特征。各证型均涉及氨基酸代谢紊乱,湿热内蕴证主要表现为能量代谢紊乱,脾虚湿困证涉及肠道菌群相关代谢物代谢紊乱,气滞血瘀证以氨基酸及能量相关代谢紊乱为主。4.根据本研究第四部分基于GC-MS的血浆样本代谢组学检测,初步确定HCMV致不同类型的肝脏损害有不同的代谢特征。HCMV造成的肝脏损害均存在氨基酸、脂肪酸及能量代谢紊乱。根据差异性代谢物构建的诊断模型可较好区分HCMV合并胆道闭锁组和HCMV胆汁淤积性肝病组。5.根据本研究第五部分基于GC-MS的尿液样本代谢组学检测,发现胆道闭锁和婴儿肝炎综合征的气滞血瘀证均涉及氨基酸及嘌呤代谢紊乱,证实了“异病同证”有其科学内涵。根据差异性代谢物构建的诊断模型可较好区分胆道闭锁和婴儿肝炎综合征。
张惜燕[5]（2019）在《当代中医病机创新理论研究》文中认为目的:本研究通过系统梳理60余年来中医病机理论研究的创新成果,分类整理病机创新理论所涉及的具体内容以及中医病机创新理论体系的构建,全面展示现代中医病机理论创新研究的现状,深入探讨现代中医病机理论的演变规律,明确中医病机理论的发展趋势与研究路径,以期能补充丰富传统中医病机理论体系,推动构建当代中医病机学。方法:充分收集中医病机理论创新研究的相关文献,在对“病机创新理论”的范畴进行严格界定的基础上,根据研究对象及目的,首先采用文献研究法进行文献查找、筛选,再依据逻辑分析法、科学哲学研究法对提取归纳的病机创新理论进行概念规范、特性厘清、层级划分、分类鉴别,创新性质及其临床意义的评价,病机创新理论演变规律的分析,最终构建创新性中医病机理论体系。结果:本研究通过系统梳理中医病机理论研究的创新成果:（1）从概念的内涵与外延（要素、分层、分类）对“病机”进行科学定义,从而准确指导病机创新理论的评价研究。病机作为疾病发生、发展、转归机理的本质概括,以因、位、性、势四者为基本要素,可分为单一病机与复合病机两类,层级划分是对病机从宏观到具体的准确把握。现代对“证”的内涵研究认识未达统一,病机与证的关系还需进一步探索。（2）系统梳理病机理论创新的研究成果,依据内容划分为毒邪病机、络病病机、毒损络脉病机、伏邪病机、玄府病机、情志病机、上火病机、复合病机及其他病机九个方面。界定各病机理论的概念或含义,厘清其形成原因、致病特性、致病机理、临床表征、生物学基础、鉴别分类、创新应用等,理清其逻辑层次,展示病机创新理论的研究现状,初步形成了共识性的病机创新理论。（3）从传统中医病机理论体系的初步形成到建立,深入剖析其所存在的内容不确定、层级不清晰、体系不完善等问题,基于此构建创新性的中医病机理论体系。创新性主要体现在,一是以脏腑经络分系统,以外感内伤分类病,明确系统病机与类病病机的概念内涵及要素;二是明确内生五邪病机是内伤病机,应归属于类病病机范畴;三是初步将病机理论创新的研究成果纳入创新性中医病机理论体系。（4）剖析中医病机创新理论形成的规律,建立病机理论创新科学的研究方法。研究了病机创新理论形成的四大影响因素,包括哲学思维、疾病谱变化、现代科技和其他因素;探索了病机创新理论形成的三大模式,包括临床实践的总结概括,经典理论的挖掘诠释,病机假说的检验验证;提出了病机理论的创新路径和整体要求。结论:界定“病机”“伏邪”“玄府”“情志病因”“上火”等概念范畴,为病机创新理论的研究和病机理论体系的建立提供依据;梳理总结毒邪病机、络病病机、毒损络脉病机、伏邪病机、玄府病机、情志病机、上火病机、复合病机及其他病机九个方面的病机创新理论,可促进中医临床疗效的提高;创新构建一个内容明确、结构合理、逻辑清晰的中医病机理论体系,阐明中医病机理论的发展规律和内在逻辑;研究病机理论的创新规律,为病机创新理论的系统评价提供依据,有助于形成科学有效的病机创新理论。诸方面一定程度上补充丰富了传统中医病机理论,促进了现代中医病机学的发展。
史艳平[6]（2016）在《杨震教授学术经验总结及治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的临床研究》文中研究表明研究目的继承老中医的学术经验是中医药事业发展创新的重要途径。杨震教授从事中医临床工作50余载,是全国着名的中医肝病专家。先生心存仁爱,德艺双馨,熟读经典,博采众长。且师古而不泥古,善于融会贯通而勇于创新。他自青年起便悬壶济世,擅长诊治各种疑难杂症,尤以肝病见长。在长期的临床诊疗中,先生的学术理论体系逐步形成,其学术思想独到,临床经验丰富,治疗效果卓越。我有幸成为先生的继承人,在跟师临诊时深切感受,理论学习时深入思考,临床实践中反复琢磨,个人思维上感触颇多,学术上获益丰厚。本研究目的在于探索杨震教授的学术渊源,挖掘、归纳、总结他的学术思想和临证经验。在继承先生学术思想的基础上,对其学术思想进行临床应用验证。从相火理论出发辨治婴儿巨细胞病毒肝炎,采用凉血解毒、养阴散瘀法治疗本病,为中医药治疗婴儿巨细胞病毒肝炎提供新的思路和有效的治疗方法。研究方法1跟师学习 抓住每次学习的机会（包括门诊、查房、学术会议、小讲课、专题汇谈等）,随时向先生请教,探讨相关学术观点及临床运用。认真做好跟师记录,包括诊病方法,临证用药等,从中分析总结先生的辨证思路和用药规律。2研读文献系统研究相关文献,以研读先生的着作,先生发表的学术论文、讲义文稿及其他继承人发表相关论文为出发点；向上延伸至四大经典、与先生学说相关的古代文献及先生推荐中医古籍；向下至现代医学最新的研究成果,包括杂志、书籍等,以求更为深入地探寻先生学术思想形成的渊源,深入对先生学术思想的理解和认识。3实践与探索 对先生学术思想形成脉络进行深入探索,系统思考后总结先生的学术思想及临床经验。并与个人所从事的儿科临床相结合,反复实践、探索优化,在实践中完善理论,验证学习成果,进一步加深对先生的学术思想的领悟。研究内容1杨震教授学术思想渊源通过肝病理论学术渊源与相火学说学术渊源两部分探索先生的学术思想渊源所在。1.1肝病理论学术渊源先生在长达半个多世纪的临床实践中,学术成就以肝病理论为主。通过对历代医家学术着作研究发现,《黄帝内经》为肝病理论的形成和发展奠定了基础,《伤寒杂病论》所创辨证论治及肝病治法方药为临床证治准则。金元四大家丰富和发展肝病学说。明清时期温病学说、气机学说及近现代中西合参的辨证论治理论,均对先生肝病学术理论形成产生了影响。此外,他曾师从王新午、麻瑞亭、午雪峤三位老师,尽得真传。先生在学术上兼容并蓄,吸收各医家学术之精华,结合个人多年的临床实践经验,形成了其丰厚的肝病理论学术思想体系。1.2相火学说学术渊源先生多年来从事中医临床工作,其所推崇的相火学说可谓独树一帜,别具特色。“相火”始见于《内经》,当时用来阐述气候变化,后世医家逐步将相火用于解释人体生理病理,开启了对相火新的认识。金元时期,相火理论得到了丰富的发展,刘河间提出了命门相火,朱丹溪对相火进行了详细的论述,包括相火的生理功能,相火的常与变等。张介宾认为相火的起源是命门,诸脏皆有相火。李时珍也推崇命门相火的观点,对相火的治疗分为火旺和火衰两类。这些理论,均对先生的相火学说理论产生了一定的影响,其中以朱丹溪的影响最大。2杨震教授学术思想研究与临床经验总结2.1杨震教授学术思想研究本节对先生学术思想体系的脉络进行梳理,将他的学术思想进行归纳分类。把学术思想分为学术观点和遣方用药特点两个部分,以便理清逻辑关系,便于学习。经过反复揣摩,深入思考,将先生的学术观点总结为“崇尚相火学说、重视滋养阴液、倡导疏肝调气、注重给邪出路”。这四点是对先生学术思想的高度概括,是研究内容的核心。2.1.1杨震教授学术观点①崇尚相火学说：相火学说是先生学术思想中最具特色的部分。他通过学习古代先贤对相火的认识,结合自身对相火的理解与领悟,并与临床相结合,形成了完整的相火学说理论。他推崇朱丹溪“相火论”的思想,但在此基础上又有所创新和完善。先生认为相火生于命门,藏于诸脏,而以肝肾二脏为着。相火之常具有恒动的性质,温煦脏腑周身皮毛,受心火支配,与肝肾之阴密切相关,是人体的动力所在。而相火妄动则可引起耗伤阴津,甚则出现阴损及阳之虚衰之证。在此理论指导下,先生将反常相火分为郁热相火、血热相火、湿热相火、瘀热相火、阴虚相火及相火虚衰六种。同时,将先生论治相火的方法总结为“郁热发之、血热清之、湿热化之、瘀热凉散之、滋阴润之和虚则补之”。通过观察小儿生理病理特点,挖掘先生相火观点,对小儿相火的特点进行总结分析。认为异常情志、不当饮食、温病伏邪、药毒及孕母相火素旺等原因均可引起小儿的反常相火,并提出小儿反常相火的论治方法。②重视滋养阴液：重养阴液反映了先生肝病临床中以肝体、肝阴为本的思想。他推崇朱丹溪“阳常有余,阴常不足”的观点,认为阴液作为构成人体的基本物质。阴液亏虚为人身之常,肝体为阴,寄相火,相火妄动、五志化火及热病均可引起阴液亏损。针对人体“阴常不足”的特点,在辨证时注重阴血、肝阴不足,在论治时重视滋养阴液。在治疗时通过补肝血、养肝阴、滋肾水、养肺阴、滋脾阴,益气养阴、滋阴熄风等不同治法来柔肝养阴。同时提出疏肝不过于温燥、慎用苦寒泻火及强调防重于养的治疗原则。③提倡疏肝调气：《素问·举痛论》有“百病生于气”之论。先生认为气机失调是疾病发生的根本原因。而“司疏泄者肝也”,肝失疏泄则可致诸脏之病,故诸病治疗皆以疏肝为要。他在突出肝主疏泄,调畅气机的同时,将脏腑关系、气血津液辨证融入疏肝调气之中,形成独特的辨治方法。通过疏肝调气的方法来治疗诸脏之病,使肝气条达,升降有序,则机体功能正常。治疗时采用疏肝行气解郁、疏肝行气止痛、疏肝行气化痰、疏肝行气化湿、疏肝健脾、疏肝和胃、疏肝利胆、疏肝泻火及补肝气、益肝血等多种疏调肝气之法,旨在通过气机一通,则一通百通。④注重给邪出路：人体以五脏六腑中心,与五官九窍、四肢百骸等组成一个有机整体。五脏六腑变化皆以“通”为要,这样机体才能达到阴平阳秘的状态,而“通”之法以“给邪出路”最为便捷有效。在治疗外感热病,依“肺与大肠相表里”,予通腑泻热；内科杂病多有痰、热、湿、瘀、毒等多种病理因素互结,只要有内热之证,均可采用通下、润下、清下的方法；在治疗肝病时,也多采用给邪出路的方法,通过利小便以利水泻热,或通大便以排出郁、热、湿、瘀、毒等；而小儿为纯阳之体,外感内伤皆易热化,治疗时也当于发表、和中、清里时加用通下之品。2.1.2杨震教授遣方用药特点先生临床用药经验丰富,他深谙药性、选药灵活。他的用药经验也是学术思想和辨治法则在临床中的体现。本节介绍了先生用药以辨治施治为原则、遵从理法方药；善用经方及多方共用；用药以“平”见长；喜用对药；常用花叶类药；多用引经药及鸡内金等。突出了他对方剂及药物的认识和应用特点。2.2杨震教授临床经验总结在此就先生临证最为常见的肝系疾病、杂病及儿科疾病的经验进行总结整理。力求深入、完整理解和领悟他的学术主旨。2.2.1杨震教授治疗肝系疾病及杂病经验先生多年来从事肝病临床工作,本节对他临床治疗最常诊治的疾病经验进行了整理与研究。列选了乙型病毒性肝炎、肝硬化、脂肪肝、抑郁症、痤疮等五种常见疾病。对疾病特有的辨病规律进行概括,治疗经验多能体现先生的学术思想,亦是他学术思想的具体运用。尤其较全面地总结了先生治疗乙型病毒性肝炎及肝硬化的经验和辨病思路。2.2.2杨震教授治疗小儿疾病经验先生曾在儿科工作,在儿科领域也积累了丰富的经验。通过挖掘、整理、探讨等多种形式,归纳总结他治疗儿科疾病,如性早熟、病毒性心肌炎、手足口病、药物性肝损害等的诊疗特色,分别从相火、温病等方面论治疾病,充分突出不同的辨治特色。3应用相火学说治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的临床研究通过对先生学术思想和临床经验的继承,特别是“相火”学说的深入领悟和理解之后,探索其在婴儿巨细胞病毒肝炎中的应用,为本病的辨治开拓新的思路,从理论挖掘到临床实践均实现了进展。3.1目的：观察运用相火理论辨治婴儿巨细胞病毒肝炎的临床疗效,评价其有效性和优效性。使“相火学说”理论的理解在临床实践中得以深化,验证继承先生学术经验的成效。同时为婴儿巨细胞病毒肝炎的中医治疗提供新的辨治思路和切实可行的治疗方法。3.2方法：采用随机对照的方法,选择符合婴儿巨细胞病毒肝炎瘀热黄疸型病例92例,运用随机数字表法分为治疗组和对照组。两组均采用西医治疗方案,治疗组在此基础上加用凉血解毒、养阴散瘀中药。治疗周期为21天。分别在治疗2周、治疗3周,评价两组疗效、症状积分、生化指标及炎性指标等。3.3结果：①收集完整病例85份,治疗组43例和对照组42例。②两组患儿临床疗效对比,治疗组治愈18例（41.8%）,显效17例（39.5%）,有效6例（14%）,无效2例（4.65%）,总有效41例（95.34%）。对照组治愈10例（23.8%）,显效12例（28.57%）,有效8例（19.05%）,无效12例（28.57%）,总有效30例（71.43%）。两组患儿疗效经Ridit检验差异（P<0.01）,治疗组优于对照组。③两组中医证侯积分疗效经Ridit检验有差异性（P<0.01）,治疗组优于对照组。治疗组与对照组在治疗2周、3周的证侯积分对比有差异（P<0.01）,治疗组在临床症状改善方面均优于对照组。④两组生化指标对比,如TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP、GGT、TBA等与疗前对比均有差异（P<0.05）,表明治疗后两组的肝功能均有改善。治疗组与对照组相比,TBIL、DBIL在治疗2周、3周均有差异（P<0.05）,治疗组优于对照组。两组ALT、AST在治疗2周、3周均有差异（P<0.05）,治疗组优于对照组。两组ALP在治疗2周、3周均无差异（P>0.05）。两组GGT在治疗2周、3周均有差异（P<0.05）,治疗组优于对照组。两组TBA在治疗2周时无差异（P>0.05）,在治疗3周时有差异（P<0.05）,治疗组优于对照组。两组CMV-DNA在治疗2周、3周后的阳性例数无差异（P>0.05）。⑤两组的IL-6与TNF-a在治疗前均有较高水平,治疗后较前均有所下降,治疗后治疗组与对照组相比有差异（P<0.05）。⑥随访结果表明,治疗组预后优于对照组（P<0.05）。3.4结论：①应用相火学说之瘀热相火辨治婴儿CMV肝炎联合西医治疗具有较好疗效,可改善预后；②凉血解毒、养阴散瘀中药具有利胆退黄、保肝降酶、减轻炎性反应的作用；③凉血解毒、养阴散瘀法可能成为中医治疗婴儿CMV肝炎的常用方法之一。研究成果经过三年的跟师学习,细致研读古代文献及先生着作、学术论文等文稿,对先生的学术思想和临床经验进行了深入挖掘和系统总结,提出“崇尚相火学说、重视滋养阴液、倡导疏肝调气、注重给邪出路”为先生学术思想的核心。并运用先生的学术思想对婴儿巨细胞病毒肝炎的治疗进行了有益的探索,收到预期疗效,达到对先生的学术经验传承和发扬的目的,同时使自身学术水平得到很大提高。
杨璐[7]（2016）在《一枝蒿黄酮类成分抗病毒活性研究及化学成分分析》文中进行了进一步梳理目的:对新疆一枝蒿进行抗病毒活性化学成分的活性导向分离,获得其中的抗病毒活性的有效成分或有效部位,并对有效成分或有效部位进行制备,以验证新疆一枝蒿中化合物的抗病毒作用,为一枝蒿抗病毒活性研究提供物质基础。方法:（1）一枝蒿药材经50%乙醇提取,采用聚酰胺柱进行分离纯化,得到一枝蒿乙醇洗脱物;（2）采用体外细胞培养法分别进行不同浓度乙醇洗脱物的抗人巨细胞病毒、抗呼吸道合胞病毒、抗H1N1型流感病毒、抗H3N2型流感病毒活性筛选,采用细胞病变法（CPE）初步评价一枝蒿抗病毒活性;分别采用western blotting法和Real-time PCR法检测50%乙醇洗脱物对H3N2型流感病毒蛋白和RNA的抑制作用;以麻鸭培养乙肝病毒模型,采用Dot blot方法、地高辛试剂盒Dot blot方法、地高辛试剂盒Southern blot方法进行检测,以血清DHBV-抗原、血清DHBV-DNA、肝脏DHBV-DNA作为药效评价指标,研究不同浓度乙醇洗脱物体内抗乙肝病毒的作用;（3）采用LC-HRMS/MS法,初步推测一枝蒿抗病毒活性作用可能的化学物质;（4）采用硅胶柱和制备型高效液相色谱仪对抗病毒活性较好的部分进行化合物的制备,经过1H-NMR,13C-NMR,ESI-MS等分析方法进行结构表征;（5）采用体外细胞培养法分别进行一枝蒿化合物的抗人巨细胞病毒、抗呼吸道合胞病毒、抗H1N1型流感病毒、抗H3N2型流感病毒活性筛选,采用细胞病变法（CPE）评价一枝蒿化合物的抗病毒活性;分别采用western blotting法和Real-time PCR法检测一枝蒿化合物对H3N2型流感病毒蛋白和RNA的抑制作用。结果:（1）新疆一枝蒿经聚酰胺柱分离后共得到5个乙醇洗脱部位;（2）通过体外抗病毒实验,在一枝蒿不同浓度洗脱物中,70%和95%乙醇洗脱物呈现一定的抗人巨细胞病毒作用,各浓度乙醇洗脱物均呈现一定的呼吸道抗合胞病毒作用,10%、30%、50%、95%乙醇洗脱物呈现一定的抗H1N1型流感病毒作用,50%乙醇洗脱物呈现一定的抗H3N2流感病毒作用,50%乙醇洗脱物可以显着降低H3N2型流感病毒M2、NS1蛋白和RNA的表达;通过体内抗病毒实验,30%和50%乙醇洗脱部位具有较好的抗鸭乙肝病毒作用;（3）通过LC-HRMS/MS分析,从30%乙醇洗脱物中推测出7种主要化合物,分别为芹菜素、7-甲氧基香豆素、蒙花苷、一枝蒿酮酸、针叶春黄菊酸、艾黄素、天师酸;从50%乙醇洗脱物中推测出5种主要化合物,分别为6-去甲氧基-4′-O-甲基茵陈色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、紫花牡荆素、6-去甲氧基-4′-O-甲基茵陈色原酮、艾黄素、山柰素-3,3′,4′-三甲醚;（4）从30%乙醇洗脱物中分离得到4个化合物,从50%乙醇洗脱物中分离得到7个化合物。通过MS、NMR分析,确定从50%乙醇洗脱物中分离出的6种化合物分别为6-去甲氧基-4′-O-甲基茵陈色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、5,7-二羟基-3,6,4′-三甲氧基黄酮、紫花牡荆素、6-去甲氧基-4′-O-甲基茵陈色原酮、艾黄素、反式螺缩酮烯醚多炔;（5）通过体外抗病毒实验,在一枝蒿化合物中,化合物A2、A9呈现一定的抗合胞病毒作用,化合物A3、A6、A8、A9均呈现一定的抗H1N1型流感病毒作用,化合物A6、A9、B1呈现一定的抗H3N2流感病毒作用,化合物A9可显着降低H3N2流感病毒M2、NS1蛋白和RNA表达。结论:本研究首次采用制备型高效液相色谱仪对一枝蒿中抗病毒活性较好的成分进行分离制备获得单体化合物,并首次对一枝蒿中的单体化合物进行抗病毒活性研究,确定化合物在抗病毒作用中的贡献,更直观的判断一枝蒿中抗病毒活性物质,使一枝蒿抗病毒活性物质基础更加明确。
张美伦（Meilun Cheung）[8]（2014）在《中医腹诊在嗜肝性病毒病的临床应用研究》文中进行了进一步梳理病毒是人类传染病的主要来源,超过400种病毒可令人致病,近年病毒性疾病的研究发展很快,也是医学研究热点之一,如病毒性肝炎、艾滋病仍严重威胁人类健康,而且又不断出现新发病毒和传播,病毒性疾病已涉及临床医学的各个领域,并发现许多非传染性疾病、肿瘤也与病毒感染有关。探索新的对策及诊治方法是二十一世纪全球医学的焦点之一,也是中医药踏入国际舞台的最佳切入点。近年,嗜肝病毒科是一组很引人注目的病毒家族,是由一个非常古老经过长期共同演化而来的病毒家族,具有极大的演化能力得以存留。嗜肝病毒侵袭宿主肝脏为特性,引起肝肿大的病理改变,是临床观察的重要依据。中医腹诊是古老而基础的诊断手法,有助临床医者捕捉早期病理信息、评价处方用药的疗效、了解脏腑功能状态,对于嗜肝性病毒病的肝肿大的临床判断有指导性意义,值得现今中西医者临床推广使用。近年,不少研究指中医腹诊能广泛用于内科,也应用于妇、儿、外伤等科,如何从个案摸索发展到针对某些专科病种,进行大、中样本的观察研究,以探讨腹诊在专病诊断治疗的特殊意义,是开展腹诊临床应用研究的重要内容。近十年,中医腹诊获注入新的元素,经过近代学者从文献理论、诊断标准的规范化、临床及专科应用、临床科研实验等进行了系统整理及研究,重新注入新命力。目的：本研究的方向是病毒病的中西医基础研究,从中医角度防治西医疾病,并以嗜肝性病毒病为切入点,包括危害性大的病毒性肝炎及一些容易被忽略又有嗜肝特性的病毒病,病理上有肝肿大为体征的特点。本研究是应用中医腹诊进行临床搜据及辅助诊断,在中医四诊基础上,中医腹诊能够及早捕捉嗜肝性病毒病患者的肝区浊音界异常及全身异常体征,以复方中药进行嗜肝性病毒病的防治,尤其在适用于临床症状不明显的乙肝病毒携带者,进行早期诊断及早期治疗,截断病情的发展,避免肝癌、肝硬化等发展,符合中医上工治未病的思路。1.探讨中西医学对嗜肝性病毒的认识。2.探讨中医腹诊对嗜肝性病毒病的临床应用。3.探讨中药复方「驱肝毒J治疗嗜肝性病毒病的临床疗效。4.探讨中药复方「驱肝毒」体内抗鸭乙肝病毒（DHBV）的实验研究方法：文献研究方面：（1）本研究回顾近二十年中医腹诊的文献研究,理解古老而富生命力的中医腹诊在现今医学的临床应用及价值,尤其在中医治疗肝病的重要性,突出中医治未病的概念。（2）本研究探讨了中西医学对嗜肝性病毒的理解及认识,从文献研究中寻找到中医温疫学对病毒疫邪的认识,同时探讨了现代医学对嗜肝性病毒及及嗜肝性病毒病的理解。临床总结方面：本研究的重心是以香港地区10000病例为临床统计数据,总结出应用中医腹诊中叩诊手法对嗜肝性病毒引致肝肿大的诊断意义,从中西医临床数据统计,指出肝区浊音界异常及临床体征的重要性,结合患者病史、主诉、病原学、化验指标而进行临床诊断,常能有理想满意的治疗效果,符合中医治未病的概念。实验研究方面：为探讨中药复方「驱肝毒」对嗜肝性病毒的疗效,本研究初步在广州中医药大学热带研究所动物实验研究室进行为期4周体内抗鸭乙肝病毒的实验研究。结果：本研究主要探讨中医腹诊在嗜肝性病毒病的临床应用,1.在临床方面,徒香港地区10000例的临床观察结果说明,发现临床在中医四诊基础上,加入中医腹诊及叩诊进行体格检查,有近九成患者肝区浊音界异常。中医腹诊能及早捕捉嗜肝性病毒病患者的体征,包括肝区浊音界的异常、胸腹壁的体征、唇舌象、皮肤关节等,从而进行早期中医分型、早期诊断和及时治疗,阻断病程的发展,符合中医上工治未病的思路。2.本研究初步观察,在经典复方上自拟「驱肝毒」治疗嗜肝性病毒病,有10000例肝区浊音界患者服用後,有81.2%患者可于3天内回缩肝浊音界至肋上位置,疗效理想。再进行有系统4-6周中药治疗,可达临床治愈,值得临床推广使用。3.动物实验研究初步发现,中药复方「驱肝毒」（颗粒剂型）对鸭乙肝病毒有抑制作用,对肝源性不同系统疾患提供一种治本方法。结论：本研究提倡「嗜肝性病毒病」的概念、中医分型及体查特征,尤适用于早期指标不明显、临床症状不显着的乙肝病毒携带者。并拟订「嗜肝性病毒病」的初步诊断依据,临床上很多常见病及多发病与嗜肝性病毒有密切的关系,提出「嗜肝性病毒是百病之源」,强调早期诊断可以截断病程的发展,避免做成误诊、漏诊和耽误早期治疗慢性肝病的机会,突出中医治未病的概念。临床医者应及早认识嗜肝性病毒病的概念及临床体征,应用中医治未病的概念,为肝病患者进行早期诊断,早期治疗,尤其是临床症状不显着的乙肝病毒携带者,减轻乙肝对社会的危害。中医及西医在病毒性疾病的防治工作上各有优势,西医注重寻根,找出病毒的类别,中医兼顾人体气血,从整体调整,在驱除邪毒之除,更能发挥机体的免疫力,对各种病毒感染性疾病有较肯定的效果。
二、乙肝患者复合感染巨细胞病毒的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、乙肝患者复合感染巨细胞病毒的实验研究（论文提纲范文）
（1）基于“火郁发之”研究“升阳清热”法治疗热毒炽盛型急性期SAT的疗效与机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 “火郁发之”理论用于亚急性甲状腺炎治疗的理论渊源 |
| 1.火郁发之理论的内涵释义 |
| 2.“火郁发之”理论源流 |
| 3.“火郁发之”代表方剂与临床应用 |
| 4.高天舒教授运用“火郁发之”理论用“升阳清热”法治疗急性期 SAT 的临床思路 |
| 论文二 “升阳清热”法干预热毒炽盛证急性期 SAT临床疗效研究 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三“升阳清热”法治疗SAT有效性及安全性Meta分析 |
| 前言 |
| 资料和方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四“升阳清热”法干预腺病毒致甲状腺滤泡上皮Nthy-roi3-1 细胞感染的焦亡过程的体外研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录一 用药日记 |
| 附录二 病例报告表 |
| 综述一 亚急性甲状腺炎的中西医研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 亚急性甲状腺炎与病毒感染相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（2）一例乙型肝炎病毒感染致系统性红斑狼疮样病变儿童及文献复习（论文提纲范文）
| 附录 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 2 病人与方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 简要病史 |
| 3.2 诊疗经过 |
| 3.3 治疗及转归 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）TIGIT在慢性HBV感染者T细胞中的表达和功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 本论文专用缩略词表(ABBREVIATIONS) |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1.引言 |
| 2.T细胞介导的抗病毒反应 |
| 3.慢性病毒感染过程中抑制性受体在耗竭的CD8+T 细胞表达上调 |
| 4.TIGIT和 PD-1 的分子结构特点、表达、参与免疫调节及在慢性病毒感染中的作用 |
| 4.1 TIGIT |
| 4.2 PD-1 |
| 5.共抑制性受体的协同作用 |
| 6.慢性病毒感染中抑制性受体表达的转录调控 |
| 6.1 NFAT |
| 6.2 Blimp-1 |
| 6.3 T-bet |
| 6.4 T-box |
| 6.5 FoxO1 |
| 7.小结和展望 |
| 第一部分TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞表达的研究 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.统计学处理 |
| 结果 |
| 1. TIGIT在慢性HBV感染者和健康者外周血T细胞表达 |
| 2.TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞分化亚群各阶段表达 |
| 3. TIGIT和PD-1 在慢性HBV感染者外周血T细胞表达 |
| 4. HLA-A*0201 限制性表位肽/五聚体复合物流式细胞术检测HBV特异性CTL |
| 5. TIGIT和PD-1 在慢性HBV感染者外周血HBVcore特异性CTL表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞中的功能研究 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.统计学处理 |
| 结果 |
| 1.慢性HBV感染者CD8+T细胞及HBV特异性CTL上CD69 的表达和Granzyme B、Perforin的分泌 |
| 2.慢性HBV感染者HBV特异性CTL细胞因子的分泌 |
| 3.慢性HBV感染者外周血特异性CTL增殖的检测 |
| 4.慢性HBV感染者CD8+T细胞凋亡敏感性 |
| 5.TIGIT和PD-1 共表达对慢性HBV感染者T细胞分泌细胞因子影响 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分TIGIT在慢性HBV感染者外周血T细胞表达与临床指标相关性研究 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.统计学处理 |
| 结果 |
| 1. TIGIT在慢性HBV感染者T细胞的表达与临床指标的相关性 |
| 2. TIGIT在四种核苷(酸)类似物治疗的慢性HBV感染者T细胞表达情况 |
| 3. TIGIT在慢性HBV感染者不同疾病进展阶段外周血T细胞表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 博士期间以第一作者发表文章目录 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（4）婴儿巨细胞病毒肝炎的病证代谢组学研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 婴儿巨细胞病毒肝炎辨证论治的文献综述 |
| 1.1 中医学对婴儿巨细胞病毒肝炎的认识 |
| 1.2 中医药治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的研究进展 |
| 1.3 中西医结合治疗婴儿巨细胞病毒肝炎临床疗效及安全性的Meta分析 |
| 2 肝脏疾病的代谢组学研究进展 |
| 2.1 代谢组学概述 |
| 2.2 肝脏疾病中医证型的组学研究进展 |
| 第二部分 婴儿巨细胞病毒肝炎各证候的临床研究 |
| 1 引言 |
| 2 临床研究 |
| 2.1 病例来源及分组 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 研究对象纳入标准 |
| 2.4 研究对象排除标准 |
| 2.5 病例信息采集及伦理审查 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 基于婴儿HCMV肝炎患儿血浆样本的证候研究 |
| 3.2 基于婴儿HCMV肝炎患儿尿液样本的证候研究 |
| 3.3 基于尿液样本研究HCMV导致的不同类型的婴儿肝脏损伤 |
| 第三部分 基于代谢组学技术探究婴儿巨细胞病毒肝炎各证候的血浆生物标志物 |
| 1 引言 |
| 2 实验研究 |
| 2.1 病例来源及分组 |
| 2.2 血浆样本采集及前处理 |
| 2.3 UHPLC-MS实验研究 |
| 2.4 GC-MS实验研究 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 HCMV肝炎各证型组与正常对照组血浆样本的总离子流图 |
| 3.2 数据质量评价 |
| 3.3 HCMV肝炎各证型组与正常对照组血浆样本的代谢轮廓分析及模式识别 |
| 3.4 HCMV肝炎各证型组潜在血浆生物标志物的筛选 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 基于代谢组学技术探究婴儿巨细胞病毒肝炎各证候的尿液生物标志物 |
| 1 引言 |
| 2 实验研究 |
| 2.1 病例来源及分组 |
| 2.2 尿液样本采集及前处理 |
| 2.3 UHPLC-MS实验研究 |
| 2.4 GC-MS实验研究 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 UHPLC-MS实验研究结果 |
| 3.2 GC-MS实验研究结果 |
| 4 讨论 |
| 第五部分 HCMV导致的不同类型的婴儿肝脏损伤与氨基酸及能量代谢紊乱相关 |
| 1 引言 |
| 2 实验研究 |
| 2.1 病例来源及分组 |
| 2.2 血浆样本采集及前处理 |
| 2.3 仪器和试剂 |
| 2.4 血浆样本处理 |
| 2.5 色谱和质谱分析条件 |
| 2.6 质量轴校准及方法学验证 |
| 2.7 数据处理及统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 数据质量评价 |
| 3.2 非靶标代谢组学发现HCMV致各类型肝脏损伤与正常对照组的代谢模式区分明显 |
| 3.3 HCMV致不同类型肝损伤的差异性代谢物鉴定 |
| 3.4 HCMV EHBA诊断模型的建立 |
| 4 讨论 |
| 第六部分 基于代谢组学技术分析婴儿肝炎综合征及肝外胆道闭锁气滞血瘀证异病同证的物质基础 |
| 1 引言 |
| 2 临床研究 |
| 2.1 病例来源及分组 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 研究对象纳入标准 |
| 2.4 研究对象排除标准 |
| 2.5 病例信息采集及伦理审查 |
| 3 实验研究 |
| 3.1 尿液样本采集及前处理 |
| 3.2 仪器和试剂 |
| 3.3 尿液样本处理 |
| 3.4 色谱和质谱分析条件 |
| 3.5 质量轴校准及方法学验证 |
| 3.6 数据处理及统计方法 |
| 4 研究结果 |
| 4.1 研究对象的临床研究 |
| 4.2 数据质量评价 |
| 4.3 胆道闭锁及婴儿肝炎综合征气滞血瘀证尿液代谢轮廓分析 |
| 4.4 胆道闭锁的尿液生物标志物筛选及验证 |
| 4.5 胆道闭锁诊断模型的建立 |
| 5 讨论 |
| 第七部分 结语 |
| 1 结论 |
| 2 本研究创新之处 |
| 3 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）当代中医病机创新理论研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究对象 |
| 3 研究范畴 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 文献学方法 |
| 4.2 逻辑学方法 |
| 4.3 科学哲学方法 |
| 5 研究路径 |
| 第一部分 中医病机概念创新研究 |
| 1 病机的内涵 |
| 2 病机的外延 |
| 2.1 依据构成内容分要素 |
| 2.2 依据等级关系分层次 |
| 2.3 依据复杂程度分类 |
| 3 病机与证关系研究 |
| 3.1 证是疾病外候 |
| 3.2 证是证候阶段本质 |
| 3.3 其他认识 |
| 4 小结 |
| 第二部分 中医病机创新理论研究 |
| 1 毒邪病机 |
| 1.1 毒邪的内涵 |
| 1.2 毒邪的外延 |
| 1.3 致病特点 |
| 1.4 创新应用 |
| 2 络病病机 |
| 2.1 络脉的含义 |
| 2.2 络脉的生理 |
| 2.3 病机含义 |
| 2.4 创新应用 |
| 3 毒损络脉病机 |
| 3.1 病机含义 |
| 3.2 创新应用 |
| 4 伏邪病机 |
| 4.1 伏邪概念 |
| 4.2 形成机制 |
| 4.3 致病特性 |
| 4.4 创新应用 |
| 5 玄府病机 |
| 5.1 玄府的含义 |
| 5.2 玄府的生理 |
| 5.3 玄府的病理 |
| 5.4 生物学基础 |
| 5.5 玄府与络脉 |
| 5.6 创新应用 |
| 6 情志病机 |
| 6.1 情志病因的概念 |
| 6.2 情志病因的形成 |
| 6.3 致病特性 |
| 6.4 致病机理 |
| 6.5 创新应用 |
| 7 上火病机 |
| 7.1 上火的含义 |
| 7.2 病机形成 |
| 7.3 致病机理 |
| 7.4 临床表征 |
| 7.5 生物学基础 |
| 7.6 创新应用 |
| 8 复合病机 |
| 8.1 瘀热病机 |
| 8.2 瘀毒病机 |
| 8.3 痰瘀互结 |
| 8.4 毒热病机 |
| 9 其他病机 |
| 9.1 脏腑风湿 |
| 9.2 瘀血生风 |
| 9.3 虚气留滞 |
| 9.4 气虚浊留 |
| 9.5 奇经病机 |
| 9.6 体质与病机 |
| 10 小结 |
| 第三部分 中医病机理论体系创新研究 |
| 1 中医病机理论体系的形成研究 |
| 1.1 教材病机体系 |
| 1.2 专着病机体系 |
| 2 中医病机理论体系的现状研究 |
| 2.1 中医病机理论具体内容的确定 |
| 2.2 中医病机理论体系的逻辑问题 |
| 3 中医病机理论体系的创新构建 |
| 4 小结 |
| 第四部分 中医病机理论创新规律研究 |
| 1 中医病机理论创新的影响因素 |
| 1.1 中医哲学思维方法的影响 |
| 1.2 现代疾病谱变化的要求 |
| 1.3 现代科学技术发展的促进 |
| 1.4 其他因素的综合作用 |
| 2 中医病机理论创新的形成模式 |
| 2.1 临床实践的总结概括模式 |
| 2.2 经典理论的挖掘诠释模式 |
| 2.3 病机假说的检验验证模式 |
| 3 中医病机理论创新的整体要求 |
| 3.1 始终以中医理论为指导 |
| 3.2 始终以多学科、多方法、多层次研究为手段 |
| 3.3 始终以服务临床、提高疗效为目的 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述 中医病机理论的创新研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 公开发表的学术论文 |
（6）杨震教授学术经验总结及治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 杨震教授学术思想渊源 |
| 第一章 杨震教授肝病理论学术渊源 |
| 第二章 杨震教授相火学说学术渊源 |
| 参考文献 |
| 第二部分 杨震教授的学术思想研究及临床经验总结 |
| 第一章 杨震教授学术思想研究 |
| (一) 杨震教授学术观点 |
| 1 崇尚相火学说 |
| 2 重视滋养阴液 |
| 3 倡导疏肝调气 |
| 4 注重给邪出路 |
| (二) 杨震教授遣方用药特点 |
| 1 以辩证论治为原则,遵从理法方药 |
| 2 善用经方及多方共用 |
| 3 用药以“平”见长 |
| 4 喜用对药 |
| 5 常用花、叶类药 |
| 6 多用引经药及鸡内金 |
| 第二章 杨震教授临床经验总结 |
| (一) 杨震教教授治疗肝系疾病及杂病经验 |
| 1 杨震教授治疗乙型病毒性肝炎经验 |
| 2 杨震教授治疗肝硬化经验 |
| 3 杨震教授治疗脂肪肝经验 |
| 4 杨震教授治疗抑郁症经验 |
| 5 杨震教授辨治痤疮经验 |
| (二) 杨震教授治疗儿科疾病经验 |
| 1 杨震教授治疗小儿性早熟经验 |
| 2 杨震教授治疗小儿手足口病经验 |
| 3 杨震教授治疗小儿病毒性心肌炎经验 |
| 4 杨震教授治疗小儿药物性肝损害经验 |
| 临床验案 |
| 参考文献 |
| 第三部分 应用相火学说辨治婴儿巨细胞病毒肝炎的临床研究 |
| 前言 |
| 第一章 综述研究 |
| (一) 婴幼儿抗巨细胞感染治疗研究进展 |
| (二) 中医学对婴儿巨细胞病毒肝炎的认识 |
| 第二章 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 2 诊疗标准及研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 不足与展望 |
| 附录 |
| 杨震教授学术生平 |
| 婴儿巨细胞病毒肝炎患儿症状体征评分表 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（7）一枝蒿黄酮类成分抗病毒活性研究及化学成分分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容 |
| 1 一枝蒿黄酮类成分的提取 |
| 1.1 仪器与试药 |
| 1.2 实验方法与结果 |
| 1.3 讨论 |
| 2 不同浓度乙醇洗脱物抗病毒活性的初步筛选 |
| 2.1 抗人巨细胞病毒活性初步筛选 |
| 2.2 抗呼吸道合胞病毒活性初步筛选 |
| 2.3 抗H_1N_1 型流感病毒活性初步筛选 |
| 2.4 抗H_3N_2 型流感病毒活性初步筛选 |
| 2.5 对H_3N_2 型流感病毒蛋白的抑制实验 |
| 2.6 对H_3N_2 型流感病毒RNA的抑制实验 |
| 2.7 抗乙肝病毒活性初步筛选 |
| 2.8 讨论 |
| 3 不同浓度乙醇洗脱物的化学成分初步分析 |
| 3.1 30 %乙醇洗脱物的化学成分初步分析 |
| 3.2 50 %乙醇洗脱物的化学成分初步分析 |
| 3.3 讨论 |
| 4 化合物的分离制备及结构鉴定 |
| 4.1 30 %乙醇洗脱物中化合物的制备 |
| 4.2 50 %乙醇洗脱物中化合物的制备 |
| 4.3 化合物的结构鉴定 |
| 4.4 讨论 |
| 5 化合物A_3、A_6、A_8、A_9、B_1、B_2、B_3、B_4、B_5、B_6、B_7的抗病毒活性筛选 |
| 5.1 化合物A_3、A_6、A_8、A_9的抗人巨细胞病毒活性筛选 |
| 5.2 化合物A_3、A_6、A_8、A_9的抗呼吸道合包病毒活性筛选 |
| 5.3 化合物A_3、A_6、A_8、A_9的抗H1N1 型流感病毒活性筛选 |
| 5.4 化合物A_3、A_6、A_8、A_9、B_1、B_2、B_3、B_4、B_5、B_6、B_7的抗H_3N_2 型流感病毒活性筛选 |
| 5.5 化合物A_6、A_9对H_3N_2 型流感病毒蛋白的抑制实验 |
| 5.6 化合物A_6、A_9对H_3N_2 型流感病毒RNA的抑制实验 |
| 5.7 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（8）中医腹诊在嗜肝性病毒病的临床应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 现代医学对嗜肝性病毒病的认识及研究 |
| 一、现代医学对嗜肝性病毒病的认识及研究 |
| 二、肝炎病毒的的发病机制及临床症状比较 |
| 三、非肝炎病毒感染的发病机制及临床症状 |
| 总结 |
| 第二节 中医学对嗜肝性病毒病的认识 |
| 前言 |
| 一、中医温疫学学说与嗜肝性病毒 |
| 二、小结 |
| 第三节 中医腹诊的历史沿革及近三十年的发展概况 |
| 前言 |
| 一、中医腹诊的历史沿革 |
| 二、中医腹诊的主要内容及方法 |
| 三、中医腹诊的临床意义 |
| 四、近代中医腹诊在临床应用及研究概况 |
| 五、近代中医腹诊客观化的研究 |
| 六、中医腹诊的研究进展 |
| 七、中医腹诊对肝病临床诊断的重要性 |
| 八、展望 |
| 第二章 临床研究 |
| 第一节 中医腹诊在嗜肝性病毒病的临床应用 |
| 前言 |
| 一、叩诊及望诊 |
| 二、未能确诊病毒性肝炎的主要原因 |
| 三、「肝区浊音界异常」对嗜肝性病毒病的诊断价值 |
| 四、「肝区浊音界异常」的病理分析 |
| 五、有关正常和异常肝区浊音界之区别,对病毒性肝炎的诊断价值 |
| 六、开发「声频诊断仪J的可行性 |
| 七、小结 |
| 第二节 中医腹诊应用于香港区10000例肝区浊音界异常病例的临床总结 |
| 前言 |
| 一、背景资料与方法 |
| 二、统计方法 |
| 三、临床结果 |
| 四、讨论及体会 |
| 五、中药复方「驱肝毒」的疗效机制 |
| 第三节 临床经验总结-嗜肝性病毒病的临床案例介绍 |
| 前言 |
| 一、甲型肝炎典型案例介绍 |
| 二、乙型病毒性肝炎案例 |
| 三、丙型肝炎案例 |
| 四、脂肪肝案例 |
| 五、肝硬化案例 |
| 六、非肝炎病毒引致肝区浊音界异常之案例介绍 |
| 第四节 嗜肝性病毒病的中医分型、临床体征及肝区浊音界异常的案例介绍 |
| 一、嗜肝性病毒病的中医分型 |
| 二、嗜肝性病毒病的体征 |
| 三、肝区浊音界异常之典型案例介绍 |
| 第三章 实验研究-中药复方「驱肝毒」抗鸭乙型肝炎病毒作用的实验研究 |
| 前言 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 附原始记录 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 中英文缩略词 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文及参加会议 |
| 致谢 |
四、乙肝患者复合感染巨细胞病毒的实验研究（论文参考文献）
- [1]基于“火郁发之”研究“升阳清热”法治疗热毒炽盛型急性期SAT的疗效与机制[D]. 李品. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [2]一例乙型肝炎病毒感染致系统性红斑狼疮样病变儿童及文献复习[D]. 康成栋. 福建医科大学, 2019(07)
- [3]TIGIT在慢性HBV感染者T细胞中的表达和功能研究[D]. 魏艳艳. 东南大学, 2019(05)
- [4]婴儿巨细胞病毒肝炎的病证代谢组学研究[D]. 李维薇. 南京中医药大学, 2019(08)
- [5]当代中医病机创新理论研究[D]. 张惜燕. 成都中医药大学, 2019(04)
- [6]杨震教授学术经验总结及治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的临床研究[D]. 史艳平. 中国中医科学院, 2016(01)
- [7]一枝蒿黄酮类成分抗病毒活性研究及化学成分分析[D]. 杨璐. 新疆医科大学, 2016(05)
- [8]中医腹诊在嗜肝性病毒病的临床应用研究[D]. 张美伦（Meilun Cheung）. 广州中医药大学, 2014(01)