一、红花对阿霉素诱导的肾小管间质纤维化大鼠的保护作用（论文文献综述）
秦浩[1]（2021）在《基于NF-κB/HIF-1α通路探讨“黄芪-丹参”药对干预UUO肾间质纤维化模型的机制研究》文中研究指明目的:1.基于数据挖掘方法对王耀光教授治疗慢性肾脏病的临床资料进行回顾性研究,总结王教授治疗本病的处方用药特点、组方规律,以发展名中医的临床经验及学术思想,进一步丰富慢性肾脏病的中医治疗方法。2.观察“黄芪-丹参”药对对大鼠肾功能及病理的影响。3.观察“黄芪-丹参”药对干预单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型肾间质纤维化的机制。方法:研究一:收集王耀光教授2018年1月-2019年6月治疗的符合2-4期慢性肾脏病研究标准的325例次医案资料,随后纳入中医传承辅助平台系统（V3.0）,使用统计报表系统和数据分析系统对病案的药物频次、四气五味、归经、功效信息进行统计分析,利用关联规则分析和聚类分析挖掘王教授治疗慢性肾脏病的常用药物、常用药物组合等。研究二:健康SD大鼠60只,随机将大鼠分为假手术组、实验模型组、中药低剂量组（2.7g/kg/d）、中药中剂量组（5.4g/kg/d）、中药高剂量组（10.8g/kg/d）、氯沙坦钾组（9mg/kg/d）。使用单侧输尿管梗阻技术建立肾间质纤维化模型,从术后第一天开始给药灌胃。各组大鼠于术后14天处死,收集大鼠24h尿液及血清,取梗阻侧肾脏,将部分肾脏于4%多聚甲醛及2.5%戊二醛液中固定,其余部分放入液氮保存。观察大鼠体重、肾重/体重系数;检测大鼠肾功能指标（Scr,BUN）;HE染色、Masson染色观察大鼠肾组织病理变化。研究三:取研究二中的六组大鼠肾脏标本,Western Blot检测肾组织上皮-间充质转分化指标（α-SMA、E-cad）,炎症指标（P65、p-P65）,缺氧诱导因子HIF-1α,细胞外基质（ColⅠ、FN）的蛋白表达情况;Real-time PCR检测大鼠肾组织（ColⅢ、P65、HIF-1α）的mRNA表达情况。结果:1.数据挖掘结果根据临床收集的325例处方数据分析结果可知,王耀光教授治疗慢性肾脏病常用药物功效以清热活血补益类为主;药物频次前十位分别是丹参、黄芪、泽兰、土茯苓、白术、牡蛎、槐花、枳壳、地肤子、白扁豆;药物以寒、温性为主;五味以甘苦辛为主;归经主要以肝脾经为主;在关联规则组方规律中,出现了10个药物组合,频次前三位主要是“丹参-黄芪”、“丹参-泽兰”、“丹参-茯苓”;根据最高频次组合“黄芪-丹参”所用药量分析可知,黄芪常用量为30g,丹参常用量为10g;在聚类分析组方规律中,得到4组新处方。2.大鼠一般情况大鼠在饲养及实验过程中生存状况良好,随着时间推移,各组大鼠体重出现增长,但各手术组与假手术组相比,体重均明显下降,经过药物治疗后,中药中剂量组和阳性药氯沙坦组体重显着增加（P<0.01）;14天大鼠在术后均出现了患侧肾重/体重系数的异常增加,模型组与假手术组相比明显增高。经过药物治疗后发现中药中剂量组、中药高剂量组、阳性药氯沙坦钾组的肾重/体重系数下降最显着（P<0.001）。3.大鼠肾功能及病理改变模型组与假手术组相比,血清肌酐明显增高（P<0.001）;使用药物治疗后,除中药低剂量组外,另外三个药物治疗组与模型组相比显着下降（P<0.001）;14天大鼠模型组与假手术组相比出现了血清尿素氮增高（P<0.01）,中药中、高浓度剂量和氯沙坦钾三个治疗组的尿素氮下降明显（P<0.01）。HE染色显示假手术组肾组织中肾小球肾小管等结构清晰,模型组出现肾小球数量减少、结构变形,球囊腔各处宽窄不一,肾小管的改变是管腔明显扩张、出现空泡变性,小管细胞水肿,间质内充斥大量炎症细胞,并且伴有纤维化改变;中药各剂量组和氯沙坦钾组与模型组相比,肾小球、肾小管、间质部分的病理情况都有所改善。Masson染色显示:模型组的胶原容积与假手术组相比明显升高（P<0.001）,14天大鼠各个药物治疗组与模型组相比明显减少（P<0.001）。4.“黄芪-丹参”调节NF-κB/HIF-1a信号通路及EMTWB结果表明,模型组大鼠的FN、ColⅠ蛋白水平表达明显升高（P<0.001）;对于FN蛋白,中药中剂量组、高剂量组与模型组比较表达明显降低（P<0.001）,阳性药组显着下降（P<0.01）;对于ColⅠ蛋白,三个不同中药剂量组和氯沙坦钾组与模型组相比表达显着降低（P<0.001）。与假手术组相比,模型组α-SMA蛋白明显升高（P<0.001）、E-cad蛋白表达明显减少（P<0.001）;与模型组相比,各药物治疗组α-SMA蛋白表达水平显着降低（P<0.01）,其中黄芪丹参中剂量干预效果最明显（P<0.001）;中药中剂量和氯沙坦钾治疗组E-cad蛋白表达显着升高（P<0.001）。与假手术组相比,模型组的P65蛋白、p-P65蛋白和HIF-1α蛋白均明显升高（P<0.01）;与模型组相比,中药中剂量组、高剂量组、氯沙坦钾组P65蛋白显着降低（P<0.01）;各药物治疗组p-P65蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;各药物治疗组的HIF-1α蛋白下降明显（P<0.001）。PCR结果显示模型组肾组织的ColⅢ、P65、HIF-1αmRNA水平明显升高（P<0.05）;各治疗组ColⅢmRNA表达均有所下降（P<0.05）;对于P65 mRNA表达改善情况来看,中药高剂量组和氯沙坦组减少最为明显（P<0.001）;在抑制HIF-1αmRNA表达方面各治疗组均有较好治疗效果（P<0.001）,其中中药中剂量组抑制效果最明显。结论:1.结合数据挖掘中药物频次、聚类分析、关联规则等分析结果可知,王耀光教授治疗慢性肾脏病常用药物功效为活血化瘀类、补虚类、清热类为主,多以补气活血治法作为慢性肾脏病的基本治法;“黄芪-丹参”、“丹参-泽兰”、“丹参-土茯苓”、“黄芪-泽兰”等药物组合是王教授的常用药对。2.“黄芪-丹参”药对可以改善UUO大鼠的一般情况,降低血清肌酐、尿素氮的水平,对大鼠的肾功能具有保护作用。3.“黄芪-丹参”药对可以通过调控NF-κB/HIF1α信号通路,降低P65、p-P65、HIF-1α的表达,抑制肾小管上皮细胞向间充质转分化、减少细胞外基质及胶原纤维的沉淀,从而延缓肾间质纤维化的进程。
边红萍[2]（2021）在《基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究》文中研究指明研究目的本研究工作以2.5%腺嘌呤混悬液灌胃与单侧输尿管结扎两种方法复制CRF大鼠模型,以金匮肾气丸“补益肾气”为治法,研究肺、肾、膀胱上APQ1-4的表达,探讨机体水液代谢的调控与机理,评价中医“肾主水”理论的科学性,为金匮肾气丸在中医慢性肾脏病的治疗与干预水液代谢调控提供实验依据。研究方法1金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究将60只健康雄性SD大鼠,随机分正常组（n=20只）和腺嘌呤造模组（n=40只）,适应性喂养1周后,用2.5%的腺嘌呤悬浊液剂量为250mg/（kg·d）灌胃复制CRF模型4周,两组中各取10只大鼠进行血、尿肾组织病理检测,评估腺嘌呤CRF大鼠模型。剩余40只大鼠分为正常组、CRF模型组、金匮肾气丸中剂量、金匮肾气丸高剂量4组,每组10只。金匮肾气丸中、高剂量组分别给予对应浓度剂量金匮肾气丸溶液灌胃,正常组、CRF模型组大鼠予以等量蒸馏水灌胃,治疗4周,比较各组大鼠24h-UTP,血常规、血生化与肾脏病理指标。2金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=10只）和UUO造模组（n=40只）。采用UUO手术法复制CRF模型,将大鼠10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉,在左肾下极临近肾门处及输尿管的上1/3处用0#丝线结扎并剪断,缝合肌肉皮肤组织。假手术组大鼠给予等量10%水合氯醛腹腔麻醉开腹,仅钝性分离左侧输尿管并不予以结扎;正常组不做任何手术处理。UUO术后2周随机抽取10只大鼠评估UUO法CRF大鼠模型。剩余40只大鼠再分为假手术组、UUO模型组、金匮肾气丸中剂量组、金匮肾气丸高剂量组,每组10只。假手术组、UUO模型组采用蒸馏水灌胃;金匮肾气丸中、高剂量治疗组分别给予对应浓度剂量的金匮肾气溶液灌胃,疗程4周,比较各组大鼠的24h-UTP,血常规与生化、肾脏病理指标。（正常组同实验第一部分）3.慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究金匮肾气丸治疗4周,腺嘌呤灌胃与UUO法CRF各组大鼠获取肾脏、肺脏、膀胱组织,用Western blotting检测对应的水通道蛋白AQP1、AQP2、AQP3、AQP4,将不同蛋白条带图像用Image J软件进行灰度值分析,对应DAPDH蛋白条带作进行数据矫正。4.采用SPSS18.0软件对实验结果进行分析,计量资料用均数±标准差（x±s）表示,多组间均数的比较采用两独立样本t检验和单因素方差分析,双侧检验,检验水准α=0.05,P<0.05定义为统计差异性显着。研究结果1.腺嘌呤造模组4周大鼠24h U-TP、BUN、Scr与正常组比较均增高,统计有显着性差异（P<0.05）,大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸治疗各组与腺嘌呤模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）,金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与腺嘌呤模型组相比,有不同程度减轻。2.UUO术后2周大鼠24h U-TP、BUN、Scr水平与正常组比较均升高,统计有显着性差异（P<0.05）,UUO大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸各治疗组与UUO模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）。金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与UUO模型组相比,有不同程度减轻。3.各组大鼠肾脏、肺脏、膀胱AQP蛋白检测中（1）腺嘌呤模型组大鼠肾脏AQP1-4与膀胱AQP3表达上调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。肺脏AQP1与膀胱AQP1表达下调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。（2）UUO模型组大鼠肾脏AQP1与AQP4、肺脏AQP1、膀胱AQP4表达下调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）;膀胱AQP3表达上调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）。（3）腺嘌呤CRF金匮肾气丸中高剂量治疗组肾脏AQP1-4均有下调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。膀胱AQP1水平上调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。（4）UUO金匮肾气丸高剂量治疗组膀胱AQP4蛋白明显上调,与UUO模型组比较有显着性差异（P<0.05）。研究结论1、金匮肾气丸可以改善腺嘌呤与UUO慢性肾功能衰竭大鼠的生存质量,改善肾功能,减少24h尿蛋白定量,减轻大鼠肾脏的病理损害,可不同程度改善肾脏纤维化损伤程度。2、金匮肾气丸治疗UUO与腺嘌呤CRF大鼠,通过调节不同种类与部位AQP表达发挥作用。两者侧重有不同,金匮肾气丸治疗腺嘌呤CRF主要下调肾脏AQP1-4和上调膀胱AQP1表达。金匮肾气丸治疗UUO大鼠,其肾脏与肺脏AQP2、AQP3、AQP4表达上调不显着,而以膀胱AQP4蛋白表达上调突出。
张明发,沈雅琴[3]（2021）在《苦参碱防治肾病的药理作用及其机制的研究进展》文中指出苦参碱具有抗内毒素性肾损伤、抗化疗药肾损伤、抗免疫性肾损伤、抗尿酸性肾病、抗输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化和抗糖尿病肾病的作用。苦参碱肾脏保护作用的机制可能是下调脂多糖识别受体的表达、抑制JAK/STAT通路、抑制PI3K/AKT/mTOR通路和抑制ERK1/2通路,从而阻断TGF-β1/Smad和NF-κB炎性信号通路,减轻肾脏炎症反应和细胞外基质沉积,产生延缓肾脏纤维化的作用。
方桂玉[4]（2021）在《基于网络药理学探讨益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路抗肾纤维化的机制研究》文中研究表明目的1、利用网络药理学技术以及Cytoscape可视化软件,研究益肾活血方治疗肾纤维化的有效成分及可能的作用靶点,探讨益肾活血方治疗RIF的作用机制。2、探讨益气活血法对肾纤维化大鼠PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达及炎症因子IL-6、TNF-α浓度的影响。方法1、利用中药系统药理学（TCMSP）建立益肾活血方的七味中药黄芪、当归、丹参、大黄、红花、三七、牛膝的化合物库;Gene Cards数据库、OMIM数据库预测RIF的靶点;构建益肾活血方化合物靶点-RIF疾病靶点互作网络,并通过DAVID网站对靶点网络进行GO分析和KEGG富集分析,最后采用cytoscape软件对分析结果做可视化网络图。2、动物实验:将36只（体重260±20g）清洁级雄性SD大鼠随机分为六组:假手术组组、模型组、氯沙坦组、益肾活血方低剂量组、益肾活血方中剂量组、益肾活血方高剂量组,每组6只。适应性饲养3天后,假手术组予游离单侧输尿管处理,余五组均用单侧输尿管结扎大鼠模型,益肾活血方不同剂量组和氯沙坦组予以对应的药物灌胃,假手术组和模型组按生理盐水灌胃,疗程14天。各组于药物干预的第14天取材,行HE、Masson染色,并用Western blot法检测各组肾组织VEGF、PI3K、AKT、HIF-1α的蛋白表达,用ELISA检测血清炎性因子IL-6、TNF-α的浓度。结果1网络药理学本研究通过TCMSP化合物分析平台筛选,得到105个化合物;Gene Card、OMIM等靶点预测平台找到了188个益肾活血方化合物-RIF疾病映射靶点进行蛋白互作分析,可见蛋白互作频次较高的有蛋白激酶相关受体（AKT1、MAPK1、MAPK8、JUN等）,炎症相关受体（IL-6、IL-1B、TNF等）,生长因子相关受体（VEGFA、EGFR ESR1等）,根据GO分析显示这些核心靶点主要涉及类固醇激素受体活性、转录因子结合催化功能、蛋白激酶的活性、细胞因子活性等分子功能,涉及炎症趋化因子的调控、白细胞介素-6产生的调控、表皮生长因子激活的调控、肾上腺素能受体信号通路激活MAPK活性等生物过程,可能是通过抑制成纤维细胞因子生长分化、抑制炎症趋化反应、抑制炎症反应、抑制细胞凋亡、抗氧化应激等多靶点发挥对RIF的治疗作用。P13K-Akt、TNF、MAPK、HIF-1、VEGF、TLR、NF-κB信号转导通路等细胞信号通路提示为益肾活血方参与肾纤维的重要通路。以核心靶点IL-6、VEGF、MAPK、AKT1、EGFR、PTGS2为研究载体,对益肾活血方化学成分进行分子对接研究,结果显示益肾活血方化学成分与关键靶点具有较好的结合活性。2.1 HE染色与假手术组相比,模型组大鼠肾脏组织的肾实质重度萎缩变薄,肾小球数量减少、萎缩,部分肾小管呈囊性扩张,间质纤维组织增生。与模型组相比,氯沙坦组与益肾活血方各剂量组的肾实质呈轻到中度萎缩,肾小球萎缩、数量减少,部分肾小管呈囊性扩张。纤维化程度减轻。2.2 Masson染色与假手术组相比,模型组大鼠梗阻侧肾脏组织的胶原纤维蓝染增多,间质胶原纤维形成明显,肾脏组织的小管基底膜及管周围纤维组织显着增生。与模型组相比,氯沙坦组与益肾活血方各剂量组大鼠梗阻侧肾脏组织中胶原纤维蓝染减少,小管基底膜及管周围纤维组织呈中度增生。2.3 PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达第14天,模型组的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF的蛋白表达均高于假手术组,组间比较均有统计学意义（P<0.05）。益肾活血方各剂量组和氯沙坦组的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达均低于模型组,组间比较均有统计学意义（P<0.05）。益肾活血方高剂量组和氯沙坦组的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达相近,组间比较无统计学意义（P>0.05）。2.4炎性因子IL-6、TNF-α浓度第14日,模型组大鼠血清中IL-6、TNF-α的浓度均高于假手术组（P<0.05）。与模型组相比,各治疗组大鼠血清中IL-6、TNF-α浓度均出现不同程度的下降（P<0.05）,益肾活血方高剂量组与氯沙坦组显着低于低、中剂量组（P<0.05）,益肾活血方高剂量组与氯沙坦组大鼠血清IL-6、TNF-α浓度未见统计学差异（P>0.05）。结论1.网络药理学结论表明益肾活血方可能是通过参与炎症反应、血管内皮因子生长分化、氧化应激、表皮生长因子增殖、免疫应答等生物过程,调控P13K/Akt、HIF-1α、VEGF、MAPK、NF-ΚB、TLR等信号通路发挥延缓RIF发生发展作用。2.实验研究证明益肾活血方能够抑制肾纤维化大鼠的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达,降低血清炎性因子IL-6、TNF-α浓度,其作用机制可能在于益肾活血方抑制P13K/Akt/HIF-1α信号转导通路发挥抑制炎症反应、抑制缺血缺氧状态下的肾脏血管无序增生从而发挥抗RIF作用。
黄国顺[5]（2021）在《基于氧化应激介导MAPK信号通路调控细胞凋亡探讨茵陈对肾损伤的影响以及机制研究》文中研究说明背景/目的肾损伤是由多种病因引起的,也是诸多肾脏病共同的特点,主要分为急性肾损伤与慢性肾脏病两大类型。其病理过程主要表现为肾小管间质纤维化,这也代表着几乎所有慢性和进展性肾脏病包括肾病综合征共同的最终途径。但是,目前减缓慢性肾脏病进展和预防慢性肾脏病相关并发症的有效治疗方法是非常有限的,也没有针对性的治疗方法来减缓肾小管间质纤维化。其对于整个社会造成了巨大的负担,迫切需要一种切实有效的治疗手段。而中医药治疗肾病综合征具有多成分、多靶点、多途径的优势,探究中医药治疗手段具有重要意义。茵陈（Artemisia Capillaris）作为一味具有悠久使用历史的中药,被用于肾脏病的治疗在各种医籍中屡见不鲜。其也是着名中医周恩超教授治疗肾脏病的经验方——苏茵解毒方的君药之一,对于慢性肾脏病的治疗颇具疗效,但对于具体机制尚不清楚。本研究目的就是为了探究茵陈对肾病综合征的干预作用及潜在机制。方法网络药理学:基于中药系统药理学分析平台TCMSP中药“茵陈”的所有活性成分并收集所有符合条件的有效活性成分,利用基于GeneCards数据库、Drugbank数据库、OMI M数据库和PharmGkb数据库以及TTD数据库5个数据库检索肾病综合征的疾病相关靶点以及茵陈所有符合条件的有效活性成分对应靶点,筛选出共有靶点。利用STRING数据库构建蛋白互作（PPI）网络,接着利用Cytoscape软件对PPI网络进行拓扑分析,并对拓扑分析筛选出的共有靶点进行基因本体论（Gene Ontology,GO）分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路分析。动物实验:①采用SD大鼠尾静脉单次注射阿霉素造模。适应性喂养一周,SD大鼠给与尾静脉注射阿霉素注射液6.5mg/kg造模,予以茵陈水提物冻干粉溶液（WAC）（分别按照成人15g/d给药）进行干预,设置空白对照组（给与生理盐水）,第35天处死并采集血、尿以及肾脏标本。②HE染色观察大鼠肾小管结构,Masson染色观察纤维胶原沉积,免疫组化观察大鼠肾脏组织Bcl2/Bax、Cleaved Caspase3/Caspase3的表达,免疫荧光检测大鼠肾脏组织ROS的表达。③利用全自动生化分析仪以及自动尿液分析仪检测血生化指标如白蛋白、肌酐、尿素氮以及尿液指标如尿ACR,并比较其组间差异。④免疫蛋白印迹法检测肾脏组织凋亡相关蛋白（如Bcl2/Bax、Cleaved Caspase3/Caspase3）、MAPK信号通路相关蛋白（如p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK）以及抗氧化蛋白SOD1的表达,并比较其组间差异。细胞实验:①利用不同浓度阿霉素干预大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52e）24h,利用光镜观察形态学变化,CCK-8检测法检测细胞活性,细胞流式术以及TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞术以及活性氧试剂盒检测ROS生成,免疫蛋白印迹法检测织凋亡相关蛋白、MAPK信号通路相关蛋白以及抗氧化蛋白SOD1的表达,并比较其组间差异。②不同时间（0,3,6,9,12h）下阿霉素干预NRK-52e细胞,利用活性氧试剂盒检测ROS生成,免疫蛋白印迹法检测织凋亡相关蛋白、MAPK信号通路相关蛋白以及抗氧化蛋白SOD1的表达,并比较其组间差异。③利用不同浓度（1,2,4mg·mL-1）茵陈水提物冻干粉溶液分别与不同浓度（0.25,0.5,1mg·mL-1）阿霉素溶液共同干预NRK-52e细胞24h,利用CCK-8检测法检测细胞活性,并选定最佳实验条件（4mg·mL-1茵陈水提物冻干粉溶液+1mg·mL-1阿霉素溶液）。利用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫蛋白印迹法检测织凋亡相关蛋白、MAPK信号通路相关蛋白以及抗氧化蛋白SOD1的表达,活性氧试剂盒检测ROS生成,并比较其组间差异。④利用抗氧化剂NAC干预NRK-52e细胞24h,CCK-8检测法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫蛋白印迹法检测织凋亡相关蛋白、MAPK信号通路相关蛋白以及抗氧化蛋白SOD1的表达,活性氧试剂盒检测ROS生成,并比较其组间差异。结果网络药理学:①中药茵陈有效活性成分（OB≥30%,DL≥0.18）为异鼠李素、槲皮素、茵陈色原酮、去甲氧基茵陈色原酮、4-甲基茵陈色原酮、β-谷甾醇、芫花素、茵陈黄酮、异茵陈蒿黄酮、玄参黄酮、泽兰素、去甲泽兰黄醇素和阿特匹林A13个活性成分。②中药茵陈与肾病综合征的共同靶点主要AKT1、TNF、VEGF、IL-6、IL-1β、MAPK1、MAPK14、TP53等73个靶点。③中药茵陈与肾病综合征的共同靶点KEEG富集于TNF、PI3K-AKT、IL-17、NF-κB、P53、MAPK、Toll样受体信号通路、细胞凋亡和缺氧诱导因子（HIF-1）信号通路等。以上结果提示茵陈可能是通过调控TNF、AKT1、NF-κB、TP53、IL-6等关键靶点调控TNF、PI3K-AKT、IL-17、NF-κB、P53、MAPK、Toll样受体信号通路、细胞凋亡信号通路等来抑制肾脏细胞的炎症反应、细胞凋亡与增殖分化等途径来达到治疗肾病综合征的目的。动物实验:①动物实验第35天后取材,模型组（ADR组）SD大鼠表现为大量蛋白尿与肾功能（血肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白肌酐比即尿ACR）降低,同时伴有血清白蛋白降低,而低剂量中药治疗组（ADR+低剂量WAC,WAC-L组）、高剂量中药治疗组（ADR+高剂量WAC,WAC-H组）较ADR组在蛋白尿与血肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白肌酐比ACR均有不同程度的改善。②ADR组肾脏病理HE染色示肾小管细胞排列紊乱并肿胀,有大量蛋白管型,肾小球壁出现损伤,部分肾小球呈现不完整性;肾间质内有炎细胞浸润;MASSON染色示肾脏组织的胶原沉积显着,肾间质纤维化面积显着增加,而WAC-H组肾脏病理较ADR组HE染色、MASSON染色示肾小管、肾小球等肾脏组织结构得到了恢复,纤维化情况得到明显的改善。③通过肾脏组织氧化应激、MAPK信号转导通路以及细胞凋亡的相关检测显示,ADR组较Control组肾脏活性氧平均荧光强度明显升高,抗氧化蛋白SOD1明显下降,氧化水平升高,ERK、p38、JNK磷酸化水平升高,介导MAPK信号转导通路转导,Bcl2/Bax明显降低、Cleaved Caspase3/Caspase3明显升高,肾脏细胞凋亡水平上升,而WAC-L组、WAC-H组较ADR组氧化水平降低,抑制MAPK信号转导通路转导,降低肾脏细胞凋亡水平,WAC-H组尤为明显。以上结果提示:①中药茵陈对于SD大鼠阿霉素肾病的肾功能和蛋白尿具有改善作用,有效的降低血肌酐、尿素氮以及尿ACR水平,提高血清白蛋白水平。②中药茵陈具有保护肾脏结构,改善肾脏纤维化,抑制氧化应激、MAPK信号通路转导以及细胞凋亡,对SD大鼠的肾脏具有保护作用。细胞实验:①不同质量浓度阿霉素（0,0.25,0.5,1,2,4μg·mL-1）干预NRK-52e细胞24h后,光镜下观察细胞,发现NRK-52e细胞数目明显减少,间隙明显增大,形态皱缩变形,同时漂浮在培养液中的损伤细胞明显增加。以不同质量浓度阿霉素（0,0.25,0.5,1μg·mL-1）干预NRK-52e细胞24h后,流式细胞术、TUNEL染色以及Western Blot示随着阿霉素质量浓度的升高,NRK-52e细胞凋亡水平上升。以上结果均提示阿霉素诱导细胞凋亡,有剂量与时间依赖性。Western Blot示随着阿霉素干预时间（0、3、6、9、12h）增加,细胞凋亡水平也会上升。②不同质量浓度阿霉素（0,0.25,0.5,1μg·mL-1）干预NRK-52e细胞24h或阿霉素不同干预时间（0、3、6、9、12h）后,ROS平均荧光强度升高,抗氧化蛋白SOD1表达降低,细胞氧化水平升高。流式细胞术示阿霉素干预时间（0、3、6、9、12h）增加,细胞的活性氧表达水平上升。以上结果均提示阿霉素所诱导的细胞损伤与细胞氧化水平成正比,阿霉素可以造成NRK-52e细胞氧化损伤。③在茵陈水提物冻干粉溶液（WAC）的安全剂量内,不同质量浓度的WAC分别与不同质量浓度的阿霉素（0.5,1,2μg·mL-1）干预处理NRK-52e细胞24h,CCK-8检测细胞活性示WAC对于阿霉素诱导的NRK-52细胞损伤有保护作用。取WAC（4mg·mL-1）与ADR（1μg·mL-1）联合干预NRK-52细胞24h后,光镜下见WAC可以改善ADR诱导的细胞损伤,流式细胞术、TUNEL染色以及Western Blot示WAC可以保护NRK-52e细胞。④不同质量浓度阿霉素（0,0.25,0.5,1μg·mL-1）干预NRK-52e细胞24h或阿霉素不同干预时间（0、3、6、9、12h）后,Western Blot示ERK、p38、JNK磷酸化水平升高,介导MAPK信号通路转导,而WAC与ADR联合干预细胞可以抑制阿霉素诱导的MAPK信号通路的转导,结合以上结果提示WAC可以通过抑制MAPK信号通路转导以保护肾小管上皮细胞。⑤在抗氧化剂NAC的安全浓度范围内,NAC（5mmoL）或WAC与ADR联合干预NRK-52e细胞,荧光染色、TUNEL染色法以及Western Blot示NAC、WAC能降低阿霉素诱导的ROS平均荧光强度,提高抗氧化蛋白SOD1的表达水平从而抑制氧化应激,降低ERK、p38、JNK磷酸化水平,抑制MAPK信号通路的转导,降低Cleaved Caspase3/Caspase3,升高Bcl2/Bax,抑制细胞凋亡,提示WACNAC能通过抑制细胞氧化应激介导MAPK信号通路的转导从而抑制细胞凋亡以保护肾小管上皮细胞。以上结果提示:①阿霉素能诱导NRK-52e细胞凋亡导致细胞损伤。②阿霉素能提高NRK-52e细胞氧化水平以造成氧化损伤。③WAC能改善ADR诱导的NRK-52细胞凋亡。④ADR能介导NRK-52e细胞MAPK信号通路转导,WAC能抑制MAPK信号通路以起保护作用。⑤WAC能抑制氧化应激介导MAPK信号通路转导以调控细胞凋亡以保护NRK-52e细胞。结论茵陈能有效的保护肾功能,减少蛋白尿,提高血清白蛋白水平,显着保护肾脏结构,改善肾脏纤维化,降低肾脏组织氧化水平,抑制MAPK信号通路转导,降低细胞凋亡水平。其潜在机制可能是通过降低NRK-52e细胞氧化水平,介导MAPK信号通路转导,降低其小关蛋白磷酸化水平,从而减轻细胞凋亡水平。
吴其晶[6]（2021）在《基于“阿霉素肾病”模型探讨清利活血中药治疗慢性肾脏病的作用及机制研究》文中研究表明背景/目的随着高血压、糖尿病等代谢性疾病发病人数的增多以及社会人口老龄化的加重,慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）的发病人数逐年增多,严重威胁着人们的生命健康,因此,如何科学有效地防治CKD成为临床医师亟需面对的问题。药物治疗是延缓CKD进展的主要手段,尽管随着现代医学的发展,CKD的治疗有了长足的进步,但临床可选择的保护肾脏、延缓CKD进展药物的种类较为局限,且多数造价昂贵,亟需寻找更多廉价高效的CKD治疗药物。中医药在CKD的传统治疗中发挥着重要作用,名老中医经验为我们寻找CKD治疗药物指明了方向。江苏省名中医、知名肾病专家孙伟教授投身临床实践40余载,在治疗CKD方面拥有丰富的临床经验,疗效显着,其用药经验是寻找CKD治疗药物的重要潜在宝库。本项目立足孙伟教授治疗CKD的临证经验,通过计算机数据挖掘方法总结疗效及用药规律,寻找潜在具有肾脏保护作用的中药,通过构建CKD药理学疾病模型对潜在有效药物的作用进行验证,并对作用机制进行探索,运用网络药理数据库对有效活性成分及机制进行进一步分析,以期科学高效地寻找中医药中潜在的CKD治疗药物,明确作用机制,为临床用药提供依据,为新药研发提供新思路。方法按统一标准对中国肾脏病大数据应用创新联盟大数据平台系统中实时记录的孙伟教授门诊CKD诊治病案及数据资料进行收集和整理,运用计算机数据挖掘和统计学方法对治疗前后疗效进行评价,并对用药规律进行分析,筛选出孙伟教授延缓CKD进展最常使用的药物。使用盐酸阿霉素（DOX）体外干预大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）,构建阿霉素肾小管上皮细胞损伤模型。分别使用不同浓度的中药提取物进行干预,观察不同中药对DOX引起的细胞损伤的影响。使用MTT法检测细胞活性。通过比色TUNEL染色和蛋白印迹法中cleaved Caspase-3蛋白表达的变化观察细胞凋亡情况。采用活性氧（ROS）/超氧化物（O2-）荧光探针评价细胞内氧化应激损伤情况。使用Western Blot法检测MAPK及其磷酸化蛋白的表达情况,观察中药对阿霉素诱导的MAPK信号通路的影响。另外,给予雄性Balb/c小鼠一次性尾静脉注射DOX（10mg/kg）,构建体内阿霉素肾损伤模型。分别使用相应不同浓度中药提取物灌胃治疗两周后,收集尿液、血清和组织标本。对肾脏组织进行H&E、Masson、PAS等染色,观察肾脏组织病理改变。使用试剂盒检测蛋白尿、血清白蛋白、血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）和肾脏组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量的变化,观察中药在体内对阿霉素引起的肾损伤和氧化应激损伤的影响。利用TCMSP数据库及文献挖掘等方法获取有效中药的单体活性成分,构建“中药-活性成分”的网络图谱,寻找不同药物间的交叉活性成分,运用阿霉素肾损伤模型对中药单体疗效及机制进行探索,具体方法同前。结果运用数据挖掘及统计学方法对导师治疗CKD的病案资料进行分析,结果显示孙伟教授运用中医药治疗CKD延缓甚至逆转疾病进展的总体有效率为66.52%,中医整体症候改善有效率为79.96%,且肾小球滤过率、血肌酐、尿素氮、蛋白尿、尿隐血等均得到良好的控制。在遣方用药方面,随着CKD病程的进展,清利活血中药的使用比例逐渐升高,最常使用的清利活血中药包括石韦、虎杖、郁金、川芎、当归、土茯苓、穿山龙、白花蛇舌草、茵陈、鸡血藤、积雪草、六月雪、玉米须、泽兰、鬼箭羽等。阿霉素体外引起肾小管上皮细胞损伤,体内引起肾小球硬化、肾小管萎缩坏死以及肾间质纤维化。同时,清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽在体内与体外均能显着减轻阿霉素引起的肾损害,体外抑制阿霉素引起的ROS及超氧化物的过度生成及细胞凋亡,作用与抗氧化剂NAC的作用相似,且抑制阿霉素引起的MAPK信号通路的激活,体内显着减轻阿霉素引起的蛋白尿及低蛋白血症,减轻阿霉素诱导的组织病理损伤,抑制阿霉素引起的SOD活性下降、GSH含量降低以及MDA水平增加。清利活血中药重要的活性成分Apigenin在体内与体外均能够显着减轻阿霉素引起的肾小球、肾小管及间质的损伤,减轻阿霉素诱导的ROS过度生成,改善体内SOD活性,恢复GSH水平,抑制MDA的生成,抑制MAPK信号通路的激活,同时还能够抑制肾脏NLRP3,IL6,IL1β等炎症相关基因的表达。结论①孙伟教授运用清利活血中药治疗CKD疗效显着;②氧化应激损伤、细胞凋亡和MAPK信号通路的激活在阿霉素肾损伤进程中发挥着重要作用;③清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽能够通过抑制氧化应激和MAPK信号通路减轻阿霉素引起的肾损伤;④清利活血中药重要活性成分Apigenin能够通过抗氧化、抗凋亡、抑制MAPK通路以及抗炎作用减轻阿霉素引起的肾损伤。
郑佳颖[7]（2020）在《活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠NF-κB、PGSK-3β表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:通过观察活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄率、生化指标、致纤维化因子表达及肾组织病理损伤状态的影响,为活肾降浊方延缓阿霉素肾病大鼠肾纤维化提供理论依据,并探讨活肾降浊方治疗CKD的疗效机制,为活肾降浊方的临床用药方向提供思考。方法:采取对Wistar雄性大鼠尾静脉进行单次注射阿霉素的方法,建立阿霉素肾病病理模型。分为活肾降浊方组（治疗组）、肾炎康复片组（对照组）、模型组、空白组四组。观察大鼠的一般状态、尿微量白蛋白/尿肌酐、24小时尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮动态变化;肾脏切片马苏染色,观察阿霉素肾病大鼠肾组织的病理改变情况;光镜下观察肾脏的病理组织结构;免疫组化观察肾组织p-JAK2、p-STAT3、NF-κB、PGSK-3β的表达情况。结果:1.治疗后与模型组相比,治疗组、对照组大鼠血肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白/尿肌酐、24小时尿蛋白定量均低于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）;2.免疫组化分析:治疗后与模型组相比,治疗组、对照组p-JAK2、p-STAT3、NF-κB、PGSK-3β在肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞及肾间质的表达减少,差异有统计学意义（P<0.05）;3.肾组织病理形态学观察:光镜下可见:空白组肾小球、肾小管及间质未见明显病理改变,排列分布正常,仅见少量肾小管基膜处呈线状分布的蓝染胶原组织;模型组成纤维细胞数量明显增多,胶原纤维增多,纤维束增粗且排列紊乱,纤维间隙变窄或消失。随着实验时间进程,间质中蓝染的胶原纤维逐渐增多,提示纤维化进行性加重;治疗组及对照组部分小管纤维化,局灶性间质纤维化,肾间质胶原纤维增加。结论:1.活肾降浊方可以降低阿霉素肾病大鼠24小时尿蛋白定量、尿微量白蛋白/尿肌酐比值,减少尿蛋白的排泄;2.活肾降浊方能够下调阿霉素肾病大鼠肾组织中p-JAK2、p-STAT3、NF-κB、PGSK-3β的表达;3.活肾降浊方能改善阿霉素肾病大鼠肾组织纤维化病理发展。
秦田雨[8]（2020）在《肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究》文中认为[目的]从整体动物、细胞和分子水平,结合系统药理学靶点预测,研究中药复方肾康注射液（Shenkang,SK）对慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）和肾纤维化的保护作用和机制,为SK对CKD及肾纤维化的临床治疗提供更多的数据支持及科学依据。[方法]1.系统药理学:首先通过数据挖掘和文献查阅构建SK分子数据库,并通过药物相似性和药物半衰期评估来筛选活性分子;使用WES药物靶向模型来预测生物活性成分的直接药物靶向;使用Cytoscape 3.2软件构建复合物-靶标,靶标-通路和靶标-疾病网络,并根据BioGPS数据库确定靶标在组织和器官中的分布。2.整体动物:C57BL/6小鼠36只,采用随机对照设计法将小鼠按体重随机分为:假手术组,模型组,阳性药（ARB）组,SK高剂量组,SK中剂量组,SK低剂量组（n=6）。对模型组、ARB组、SK各剂量组小鼠实施UUO手术,制备肾纤维化模型,假手术组分离左输尿管但不结扎输尿管。术后第一天开始给药,共计14天。假手术组和模型组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,ARB组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10g,灌胃氯沙坦钾溶液0.15 mL（生药0.13 g）/10 g,SK高剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.08 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK中剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.04 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK低剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.02 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,实验过程中观察记录小鼠体重等一般情况,给药第13天行MRI扫描测定FA值明确活体肾纤维化程度,给药14天后摘眼球取血,称量肾脏重量,分别冻存固定肾脏。比色法测定血肌酐、血尿素氮、血CysC水平,行HE和天狼星红染色观察患侧肾脏病理形态学和纤维化程度,透射电镜观察超微结构情况,Western Blot检测各组小鼠肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅰ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平,Real-time PCR检测假手术组、UUO组和SK中剂量组肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,FSP-1、ECM成分(Col Ⅲ,JAK2、STAT3、TGF-β1和负调节分子SOCS1,SOCS3 mRNA水平。3.细胞:NRK-49F细胞进行复苏传代培养,以10 ng/mL 的TGF-β1刺激48 h诱导NRK-49F细胞增殖活化,不同浓度SK（0,1,2,4mg/mL）干预后,观察细胞形态、Western Blot检测NRK-49F细胞成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅲ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平和负调节分子Prdx5的表达,Real-time PCR检测NRK-49F细胞肌成纤维细胞标志物α-SMA,JAK2、STAT3 mRNA 水平。[结果]1.系统药理学部分:以DL≥0.6为筛选标准,“HL=long”用于定义适当的HL范围。最终选出88种化合物作为活性分子。利用WES算法和CTD、TTD筛选结果,确定了 85个与治疗CKD相关的潜在化合物作用靶点,包括STAT3。通过KEGG数据库映射获得关键通路,包括NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF通路,结合CKD病理机制的相关进展,构建了 CKD治疗模块的通路,包括炎症、增殖、分化、迁移、通透性、降解等模块。对靶标-疾病相互作用网络的深入分析表明,SK治疗CKD主要通过影响6种疾病发挥作用:泌尿生殖系统疾病、代谢性疾病、内分泌疾病、心血管疾病,病理过程和免疫疾病。组织定位结果显示SK通过包括肾脏、肝脏、肺和心脏在内的组织模块发挥作用。2.整体动物部分:（1）肾功能检测:与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏血CREA、BUN、Cys-C水平显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和高剂量SK组小鼠血CREA水平显着降低（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和SK各剂量组小鼠血BUN水平显着降低（p<0.05或p<0.01）;与UUO组相比,SK高剂量组小鼠血Cys-C水平显着降低（p<0.05）。（2）肾脏重量和病理检测:与假手术组相比,UUO模型组的患侧肾质量/体重、患侧肾/对侧肾质量、对侧肾质量/体重均显着增加（p<0.05或p<0.01）。但各药物治疗后对UUO小鼠肾脏重量各指标没有产生影响。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏FA值显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB阳性药组、SK高中低剂量组FA值显着降低（p<0.01或p<0.001）,其中以SK中剂量组最为显着（p<0.001）。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏病理损伤明显;与UUO组比较,各治疗组肾脏损伤情况均有不同程度缓解,细胞外基质积聚、炎性细胞浸润、肾小管扩张和/或萎缩减轻,以SK中剂量组和高剂量组较好。与假手术组比较,UUO组小鼠天狼星红面积极显着增加（p<0.001）;与UUO组比较,ARB组、SK高、中、低剂量组小鼠患侧肾脏天狼星红染色红色面积显着减少（p<0.05或p<0.01）。电镜下观察各浓度SK对UUO所致的细胞器丰富的成纤维细胞增多,间质局灶胶原纤维增生和肾小管凋亡均有一定的改善作用。（3）Western blot检测:与假手术组相比,UUO组α-SMA蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中剂量组和低剂量组显着下调了 UUO状态下的α-SMA蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组Col Ⅰ蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO 比较,SK中剂量组显着下调了 Col Ⅰ蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组p-STAT3（Try705位点）/STAT3比例显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中（p<0.01）、低剂量（p<0.001）组显着下调了 Try705位点的STAT3磷酸化程度;与假手术组相比,UUO组p-JAK2（Try1007位点）/JAK2比例有上升趋势,但无统计学差异,与UUO 比较,SK高剂量组显着下调了 Try1007位点的JAK2磷酸化程度（p<0.05）,（4）PCR检测:与假手术组相比,UUO组小鼠患侧ECM成分Col Ⅰ、Col Ⅲ、FN,成纤维细胞活化标志物α-SMA、FSP-1,以及 JAK2、STAT3、TGF-β、JAK2/STAT3 通路负调节因子SOCS1、SOCS3 mRNA水平显着上升（p<0.05或p<0.01或p<0.001）;与UUO组相比,SK中剂量组显着降低了 Col Ⅰ、ColⅢ、FN,α-SMA、FSP-1,JAK2、TGF-β、SOCS1、SOCS3 mRNA 水平（p<0.05 或p<0.01）。3.细胞实验:TGF-β1诱导后,NRK-49F细胞的细胞骨架显示出内部微丝束,并逐渐增厚和伸长,丧失纺锤形或星形成纤维细胞外观。不同浓度的SK一定程度上逆转了TGF-β1诱导的形态变化和增殖。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞p-STAT3（Try705位点）/STAT3、Prdx5蛋白水平显着性升高（p<0.05）,p-JAK2（Try1007位点）/JAK2有一定程度升高但未达统计学意义（p>0.05）;与模型对照组相比,4 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的STAT3蛋白Try705位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,1 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的JAK2蛋白Try1007位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,4 mg/mL SK组细胞的Prdx5蛋白表达水平显着降低（p<0.05）。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞α-SMA、JAK2、STAT3 mRNA水平显着升高（p<0.05或p<0.001）;与模型对照组相比,ARB及不同浓度SK均极显着地降低了α-SMA mRNA 水平（p<0.001）,与模型对照组相比,ARB、1mg/mL、2 mg/mL SK（p<0.05）及 4 mg/mL SK（p<0.01）显着降低了 STAT3 mRNA 水平,与模型对照组相比,ARB及4 mg/mL SK显着降低了 JAK2 mRNA水平（p<0.05）。[结论]（1）系统药理学预测显示SK中多种化合物可能通过作用于与炎症、凋亡、增殖等相关的NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF等多通路的靶点分子治疗CKD。（2）SK有效改善UUO小鼠肾功能指标和肾间质纤维化,其机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路抑制成纤维细胞活化实现的,验证了系统药理学结果。（3）SK还能够抑制TGF-β1诱导NRK-49F增殖活化以及ECM产生,其作用机制可能是通过抑制JAK2/STAT3通路的激活介导的。
潘雅婧[9]（2020）在《肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究》文中提出目的:以VEGF为切入点,在动物和细胞实验探讨肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和HUVEC血管生成的调控作用及作用机制。方法:1.动物实验:将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（sham）、单侧输尿管梗阻组（UUO）、氯沙坦钾组（ARB）及高、中、低剂量肾康组（SKI-H、SKI-M、SKI-L）。除sham组外的各组行UUO手术;次日ARB组予氯沙坦钾（13 mg/kg·d）灌胃;SK]-H、SKI-M、SKI-L 组分别予 7.8 g/kg·d、3.9 g/kg·d、1.95 g/kg·d SKI 尾静脉注射。观察小鼠一般状态、记录体重变化。给药14天后检测血Scr、BUN、CysC水平;micro-CT检测肾脏血管分布;HE染色观察肾组织形态改变;天狼星红染色观察胶原沉积;IHC染色观察VEGF、VEGFR-2表达。2.细胞实验:将HUVEC分为空白组（CON）、SKI高剂量组（SKI-11）、SKI-低剂量组（SKI-L）、VE GF 沉默组（Si）、VEGF 沉默-SKI 高剂量组（Si-SKI-H）、VEGF 沉默-SKI 低剂量组（Si-SKI-L）。SKI-H、SKI-L 组分别予 8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预 24 h;Si组通过RNAi转染沉默VEGF基因;Si-SKI-H、Si-SKI-L组在转染同时分别予8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预24 h。观察血管生成情况,计算血管生成参数;real-time PCR和western blot法分别检测VEGF通路重要靶点基因和蛋白表达。结果:1.动物实验:给药14天后UUO组体重较sham组减轻（P<0.01）;ARB、SKI-H、SKI-M组体重较UUO组增高（P<0.05）。UUO组Scr、BUN、CysC水平较sham组升高（P<0.05,P<0.01）;ARB、SKI-H 组 Scr、BUN、CysC 水平较 UUO 组降低（P<0.05,P<0.01）。肉眼观察sham组双肾无明显异常改变;UUO组患侧肾脏表面粗糙、膨大、积水,肾盂肾盏扩张,实质变薄;SKI组患肾结构破坏较UUO组减轻。micro-CT见sham组肾血管密集,走向清晰;UUO组患肾血管疏松,分支减少、曲度下降;SKI组患肾血管损伤较UUO组减轻。HE染色见sham组肾脏结构完整,无明显病理损害;UUO组肾小管扩张,上皮细胞肿胀坏死,间质增宽伴炎性浸润;SKI组肾脏损伤较UUO组减轻。天狼星红染色（光镜）见sham组肾脏几乎无红染胶原;UUO组肾间质大量红色胶原聚集;SKI组红染程度较UUO组减轻。偏振光镜荧光信号变化与普通光镜所见大体一致。IHC示UUO组患肾VEGF、VEGFR-2表达较sham组降低（P<0.01）;SKI 组 VEGF、VEGFR-2 表达较 UUO 组降低（P<0.01）。剂量方面,SKI 减轻肾脏纤维化损伤和促进血管生成,以中、高剂量效果更优。2.细胞实验:沉默VEGF 24 h后Si组VEGF基因表达较CON组显着降低（P<0.01）,阴性对照组与CON组VEGF无显着差异（P>0.05）,验证转染稳定可行。血管生成方面,SKI组血管连接较CON组增多、血管网密度增大,血管生成参数提高,SKI促进HUVEC血管生成（P<0.01,P<0.05）。基因表达方面,与CON组相比,SKI-H 组 VEGF、VEGFR-2、eNOS 水平升高（P<0.05,P<0.01）;与 Si 组相比,Si-SKI-H 和 Si-SKI-L 组 VEGF、eNOS 水平升高（P<0.05,P<O.01）,SKI 上调 VEGF 通路靶点基因,且该效应在VEGF沉默时更突出。蛋白表达方面,在正常培养及VEGF沉默状态,SKI 均提高 VEGFR-2、p-VEGFR-2、eNOS、p-eNOS 表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论:1.肾康注射液可改善UUO小鼠肾功能,缓解肾纤维化病理改变,减轻纤维化损伤;可缓解肾脏微血管网损伤,上调VEGF、VEGFR-2表达,促进患侧肾脏血管生成。2.肾康注射液可促进HUVEC血管生成;可上调HUVEC的VEGF、VEGFR-2基因表达;可提高VEGFR-2、eNOS总蛋白水平及磷酸化蛋白水平。3.肾康注射液可能通过调节VEGF/VEGFR-2及下游eNOS来改善肾纤维化损伤和促进血管生成。
周珊珊[10]（2020）在《桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究》文中指出目的:桃核承气汤是《伤寒论》经典名方,临床上加减广泛用于慢性肾脏疾病的治疗。目前关于桃核承气汤的研究多集中在临床疗效研究方面,而其药效物质基础及作用机理研究十分缺乏。本研究建立在临床疗效确切的基础上,结合循证医学、中药化学、生物信息学、中药药理学、分子生物学及分析化学等多学科交叉的研究方法,对桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭进行了Meta分析,筛选了该方抗肾脏纤维化的有效物质部位,分析鉴定了有效物质部位的主要化学成分,最后基于网络药理学研究,对有效物质部位进行了抗肾脏纤维化的体内外作用机制研究。系统地对桃核承气汤进行了临床疗效评价、物质基础研究及药效作用机制研究,从而为该方的进一步开发利用奠定研究基础和提供科学依据。方法:1桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析通过检索中国知网（CNKI）数据库、中文科技期刊全文（维普,VIP）数据库、万方医学网（Wangfang）数据库和中国生物医学（CBMdisc）数据库、Pub Med、EMbase和Medline数据库,检索年限至2020年1月。以桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的随机对照试验（RCTs）,按Cochrane系统评价的方法评价纳入研究的质量,由两位评价人员独立按照纳入与剔除标准筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险,并用Review Manger 5.3软件对纳入文献结果进行Meta分析。2桃核承气汤各极性部位的提取分离采用系统溶剂萃取法,将方中桃仁、大黄、桂枝、甘草混合用70%乙醇,回流提取2次,分别为2h和1.5h,减压浓缩后将醇提液挥发至无醇味。分别用不同极性的溶剂进行萃取,最后依次得到石油醚萃取物质部位,氯仿萃取物质部位,乙酸乙酯萃取物质部位,正丁醇萃取物质部位,将其进行减压浓缩干燥后备用,芒硝作为一个单独的部位。3桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究采用转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导HK-2细胞构建体外肾纤维化模型,用桃核承气汤各萃取物质部位以不同浓度干预细胞。Elisa试剂盒检测细胞上清液胶原蛋白Iα1（COLIα1）,纤维粘连蛋白（FN）含量;利用CCK-8法确定筛选出的有效物质部位的最佳浓度;Western blot检测胶原蛋白Ⅰ（Co L-Ⅰ）,胶原蛋白Ⅲ（Co L-Ⅲ）,基质金属蛋白酶-2（MMP2）,基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP2）,结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达水平;免疫荧光染色法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;Real time-PCR检测纤溶酶原激活抑制剂-1（PAI-1）m RNA的表达。4桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究使用Welch Ultimate TM uplc XB-C18 column（100 mm×2.1mm,1.8μm）分析色谱柱;流动相A为水（含0.1%甲酸）,流动相B为色谱乙腈;梯度洗脱程序:025min,5%B;2565min,95%B;柱温:40℃;流速:0.3ml/min;进样体积:2μL;吸收波长为210nm。离子源为电喷雾电离源,采用高分辨率质谱测定正离子模式和负离子模式,氮气流速800L/h,气体温度200℃,毛细管电压30k V,扫描范围m/z 50-1500。5桃核承气汤正丁醇有效部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究通过TCMSP数据库获取桃核承气汤正丁醇有效物质部位的26个化合物的OB、DL值,以OB≥30%和DL≥0.18为阈值筛选潜在的活性成分。将筛选出的化合物导入到SEA、SIB数据库获取化合物靶标,从Dis Ge Net数据库和NCBI数据库收集疾病靶标,将化合物靶标和疾病靶标整合得到化合物潜在治疗靶标。将治疗靶标导入String数据库获取关键蛋白相互作用（PPI）信息。利用Cytoscape软件中的Clue Go Version 2.5.4插件进行KEGG通路富集分析;利用DAVID Version 6.8进行GO功能富集分析。利用Cytoscape Version 3.6.0软件构建PPI网络、活性成分-靶标网络、活性成分-靶标-信号通路网络。6桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究（1）体外实验:TGF-β1诱导HK-2细胞构建体外肾纤维化模型。CCK8法检测桃核承气汤正丁醇萃取物质部位对HK2细胞活力的影响;Western blot检测α-SMA、E-cadherin、FN以及PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白的表达;免疫荧光检测α-SMA、Ecadherin、FN和TNF-α的表达;鬼笔环肽染色观察细胞中F-actin微丝蛋白。（2）体内实验:采用单侧输尿管结扎术构建UUO大鼠肾纤维化模型,将36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组（Sham）,模型组（UUO）,桃核承气汤正丁醇有效物质部位组（NE-THCQ）。观察大鼠一般情况,分别于术后7天、14天分批次处死大鼠、采集血液制备血清标本,摘取肾脏。检测血清肌酐、尿素氮水平;H&E染色、Masson染色和透射电镜观察大鼠肾脏病理改变;Elisa试剂盒检测大鼠血清中IL-6、IL-1β的含量;免疫组化检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA和E-cadherin的表达;Western blot检测PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白的表达。结果:1桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析纳入8篇文献,共630例患者,其中治疗组321例,对照组309例。Meta分析显示,与对照组相比,桃核承气汤加减联合用药能改善CRF患者症状的总有效率[OR=4.89,95%CI为[3.28,7.29]];降低血尿素氮（BUN）[SMD=-0.62,95%CI为[-0.81,-0.43]]和血肌酐（Scr）[SMD=-3.12,95%CI为[-4.72,-1.52]];升高肌酐清除率（Ccr）[SMD=-0.56,95%CI为[-0.34,-077]],肾小球滤过率（e GFR）[SMD=0.62,95%CI为[0.30,0.94]]和血红蛋白（Hb）[SMD=-0.71,95%CI为[0.39,1.03]]。2桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位在200、400mg/m L浓度下能显着降低COLIα1和FN含量,CCK8法筛选出最佳干预浓度为200mg/m L。乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位均能降低Co L-Ⅰ,Co L-Ⅲ,TIMP2、CTGF、α-SMA表达,上调MMP2的表达,其中正丁醇萃取物质部位作用效果最为显着（P<0.01）。实时荧光定量检测发现,乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位均能抑制PAI-1m RNA的表达,且正丁醇部位最为显着（P<0.01）。3桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究初步鉴定出桃核承气汤正丁醇有效物质部位中可能的26个化合物,其中2个来自桃仁,1个来自桂枝,8个来自大黄,15个来自甘草。主要为皂苷,黄酮,萜类化合物。4桃核承气汤正丁醇有效部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究筛选出7个潜在活性化合物,得到活性成分靶标484个,潜在治疗靶标118个。通过活性成分-靶标网络发现,7,2’,4’-三羟基-5-甲氧基-3-苯基香豆素度值最高,表明其潜在治疗靶点最多,其余依次为甘草苷E、常春藤皂苷元、β-谷甾醇、甘草苷、没食子酸-3-O-（6`-O-没食子酰）葡萄糖苷、18α-羟基甘草次酸。在PPI网络中前16个关键靶标依次是ALB、IL6、AKT1、VEGFA、MAPK3、EGFR、TNF、CASP3、SRC、PTGS2、MAPK8、FN1、MMP9、JUN、KDR、IL1B。GO富集分析结果显示NE-THCQ主要影响细胞增殖、凋亡和细胞内信号级联。KEGG富集分析结果显示PI3K-AKT信号通路富集靶点最多,关联性最强,此外富集的前20条通路中,MAPK、TNF、Ras、HIF-1、NOD-like receptor、Toll-like receptor、VEGF、m TOR等信号通路均直接或间接参与了肾纤维化过程。5桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究（1）体外研究:CCK8法筛选出药物干预浓度为200mg/ml,孵育时间为12h、24h、48h时对细胞活力不产生影响。NE-THCQ能显着降低α-SMA和FN表达,并上调了E-cadherin,在48h作用最为显着（P<0.01）;显着抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞TNF-α的表达（P<0.01）和F-actin蛋白的重排;抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路磷酸化蛋白的表达,显着下调TGF-β1诱导的HK-2细胞中p-PI3K/PI3K（P<0.01）、p-m TOR/m TOR和p-AKT/AKT的比值（P<0.05）;显着抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞中HIF-1α（P<0.01）和VEGF的表达（P<0.05）。（2）体内研究:NE-THCQ能改善UUO大鼠肾脏形态病理学改变;降低血肌酐、尿素氮的水平（P<0.01）;显着减少血清IL-6、IL-β1的含量（P<0.01）;显着抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达（P<0.05或P<0.01）;抑制UUO大鼠肾组织中PI3K/AKT/m TOR信号通路磷酸化蛋白的表达,显着下调p-PI3K/PI3K、p-m TOR/m TOR（P<0.05）和p-AKT/AKT的比值（P<0.01）;显着抑制UUO大鼠肾组织中HIF-1α和VEGF的表达（P<0.01）。结论:1桃核承气汤加减辅助治疗CRF,较西药单纯治疗能提高临床疗效、改善肾功能、提高患者生存状态,但纳入文献的数量和质量有限,相关结论有待进一步验证。2初步筛选出桃核承气汤的有效物质部位群,分别为氯仿萃取物质部位,乙酸乙酯萃取物质部位和正丁醇萃取物质部位,其中正丁醇萃取物质部位为活性最佳。3初步鉴定出桃核承气汤正丁醇有效物质部位的26个可能的化合物,筛选出7个潜在活性化合物,为进一步研究其药理机制奠定了基础。4通过网络药理学研究,推测桃核承气汤正丁醇有效物质部位可能是通过调节PI3K/AKT、m TOR、HIF、VEGF等信号通路,靶向炎症因子（如TNF、IL-6、IL-1β等）,影响ECM降解酶活性（如MMP1、MMP2、MMP3等）以及刺激相关信号因子的表达从而对炎症、缺氧、血管生成、ECM的合成和降解进行综合调控,以发挥其抗肾脏纤维化的作用。5通过体内外实验发现,PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路介导了肾纤维化的发生。NE-THCQ抗肾脏纤维化的作用机制可能与其调控PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路从而抑制肾小管上皮细胞骨架重排、逆转上皮细胞间充质转化（EMT）、抑制细胞外基质（ECM）合成与分泌、抑制炎症反应、改善肾功能以及适应缺氧损伤有关。
二、红花对阿霉素诱导的肾小管间质纤维化大鼠的保护作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、红花对阿霉素诱导的肾小管间质纤维化大鼠的保护作用（论文提纲范文）
（1）基于NF-κB/HIF-1α通路探讨“黄芪-丹参”药对干预UUO肾间质纤维化模型的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 研究一基于中医传承辅助平台探讨王耀光教授治疗慢性肾脏病的用药规律分析 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究二“黄芪-丹参”对UUO实验大鼠肾脏的病理影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 研究三:“黄芪-丹参”通过NF-κB/HIF-α信号通路对UUO大鼠肾纤维化的干预机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 肾间质纤维化的相关机制以及中西医结合治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Absract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 给药方法 |
| 1.6 观察指标 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 腺嘌呤复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏形态 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 1.6 给药方法 |
| 1.7 观察指标 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏外形 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3、讨论 |
| 4、小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备 |
| 1.4 实验AQP检测 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠肾脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.2 各组大鼠肺脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.3 各组大鼠膀胱AQP蛋白检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结语 |
| 附录 文献综述 |
| 文献综述一 慢性肾功能衰竭研究进展 |
| 文献综述二 慢性肾功能衰竭中医药研究进展 |
| 文献综述三 水通道蛋白(AQPs)的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 读博期间发表的文章及参与的科研 |
| 致谢 |
（3）苦参碱防治肾病的药理作用及其机制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 抗内毒素（脂多糖）性肾损伤 |
| 2 抗阿霉素等化疗药的肾损伤 |
| 2.1 抗阿霉素肾病 |
| 2.2 抗其他化疗药肾损伤 |
| 3 抗免疫性肾损伤 |
| 4 抗尿酸性肾损伤 |
| 5 抗输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化 |
| 6 抗糖尿病肾病 |
| 7 结语 |
（4）基于网络药理学探讨益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路抗肾纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRIFCT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1 益肾活血立法的益肾活血方抗肾纤维化依据 |
| 1.1 肾纤维化的形成机制 |
| 1.1.1 细胞外基质沉积 |
| 1.1.2 炎症因子 |
| 1.1.3 血小板源性生长因子 |
| 1.1.4 转化生长因子 |
| 1.1.5 肾小管细胞上皮间充质转化 |
| 1.1.6 氧化应激反应 |
| 2 祖国医学对肾纤维化的认识 |
| 2.1 脾肾亏虚 |
| 2.2 水湿毒瘀蓄积 |
| 2.3 久病入络 |
| 3 益肾活血方与肾纤维化 |
| 3.1 益肾活血方组方 |
| 3.2 益肾活血方组方的现代药理学研究 |
| 4 基于网络药理学的中药复方研究 |
| 5 本课题研究目的及意义 |
| 第二章 基于网络药理学探讨益肾活血方治疗肾纤维化的作用机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 活性化合物的筛选 |
| 1.2 活性化合物的靶点预测 |
| 1.3 RIF相关基因的筛选 |
| 1.4 可视化网络构建 |
| 1.5 蛋白互作(PPI)网络的构建 |
| 1.6 Gene Ontology(GO)分析和KEGG通路分析 |
| 1.7 分子对接 |
| 2 结果 |
| 2.1 活性化合物筛选 |
| 2.2 活性化合物的靶点预测 |
| 2.3 网络关系构建 |
| 2.3.1 药物-化合物-疾病-靶点网络图 |
| 2.3.2 核心靶点PPI蛋白互作分析 |
| 2.4 GO及 KEGG分析 |
| 2.5 潜在活性成分-靶蛋白分子对接 |
| 3 讨论 |
| 3.1 益肾活血方治疗RIF的核心化合物及靶点 |
| 3.2 益肾活血方对细胞信号通路的调控 |
| 3.2.1 MAPK信号通路 |
| 3.2.2 NF-ΚB信号通路 |
| 3.2.3 PI3K/Akt/HIF-1α信号通路 |
| 第三章 基于网络药理学成果论证益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路的抗肾纤维化机制 |
| 第一部分 动物实验 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模和分组 |
| 2.2 给药 |
| 2.3 肾脏组织样本取材及固定 |
| 2.4 肾脏组织石蜡包埋切片 |
| 2.5 肾脏组织HE染色步骤 |
| 2.6 肾脏组织Masson染色步骤 |
| 2.7 模型评判标准 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 单侧输尿管梗阻大鼠模型的复制 |
| 4.2 益肾活血方改善单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏病理变化 |
| 4.3 益肾活血方减少单侧输尿管梗阻模型大鼠肾脏胶原纤维沉积 |
| 第二部分 WB检测肾组织VEGF、HIF-1α、PI3K、AKT蛋白表达 |
| 1 实验 |
| 1.1 动物及分组、给药方法 |
| 1.2 试剂和耗材 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 试剂及配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 结果处理 |
| 1.7 实验结果 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 WB检测肾组织PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达 |
| 3.1.1 益肾活血方抑制PI3K的蛋白表达 |
| 3.1.2 益肾活血方抑制AKT的蛋白表达 |
| 3.1.3 益肾活血方抑制HIF-1α的蛋白表达 |
| 3.1.4 益肾活血方抑制VEGF的蛋白表达 |
| 第三部分 ELISA检测血清IL-6、TNF-α表达水平 |
| 1 ELISA实验方法及步骤 |
| 1.1 试剂和耗材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 复温 |
| 1.4 加样 |
| 1.5 配液 |
| 1.6 洗涤 |
| 1.7 显色 |
| 1.8 终止 |
| 1.9 测定 |
| 1.10 读取实验结果 |
| 2 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 血清中IL-6、TNF-α的浓度比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于PI3K/AKT/HIF-1α信号通路探讨益肾活血方抗肾纤维化的机制 |
| 4.1.1 PI3K/AKT/HIF-1α信号通路与炎症 |
| 4.1.2 VEGF、HIF-α与血管新生 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 综述 基于网络药理学对复方中药作用机制的研究和思考 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（5）基于氧化应激介导MAPK信号通路调控细胞凋亡探讨茵陈对肾损伤的影响以及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 基于网络药理学探讨茵陈治疗肾病综合征的主要活性成分及药理作用机制 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 研究讨论 |
| 第二部分 茵陈对阿霉素肾病大鼠的保护机制研究 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验药物制备 |
| 2.3 实验试剂、耗材与仪器 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 数据统计与分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 茵陈可以改善阿霉素肾病大鼠的肾功能以及蛋白尿 |
| 3.2 茵陈可以改善阿霉素肾病大鼠的肾脏病理 |
| 3.3 茵陈可以通过抑制氧化应激介导MAPK信号通路转导调控细胞凋亡 |
| 4 实验讨论 |
| 第三部分 茵陈水提物冻干粉减轻阿霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤的作用机制研究 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验药物制备 |
| 2.3 实验试剂、耗材与仪器 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 茵陈中药指纹图谱 |
| 3.2 阿霉素诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤 |
| 3.3 氧化应激介导了阿霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤 |
| 3.4 WAC减轻阿霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤 |
| 3.5 阿霉素通过介导MAPK信号通路调控大鼠肾小管上皮细胞凋亡 |
| 3.6 WAC可以通过抑制氧化应激介导MAPK信号通路缓解阿霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡 |
| 4 实验讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（6）基于“阿霉素肾病”模型探讨清利活血中药治疗慢性肾脏病的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 CKD的基本概念 |
| 1.1 现代医学中CKD的定义 |
| 1.2 祖国医学中CKD的含义 |
| 2 对CKD的病因机制的认识 |
| 2.1 现代医学对CKD病因及发病机制的认识 |
| 2.2 祖国医学对CKD病因病机的认识 |
| 3 CKD的治疗 |
| 3.1 CKD的现代医学治疗 |
| 3.2 CKD的中医药治疗 |
| 4 清利活血法治疗CKD的理论基础 |
| 4.1 CKD的分子机制 |
| 4.2 CKD的常用研究模型 |
| 4.3 清利活血法在CKD治疗中的作用机理 |
| 4.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床资料研究 |
| 引言 |
| 1. 研究对象 |
| 1.1 病案来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2. 研究方法 |
| 2.1 病案预处理 |
| 2.2 信息采集方法 |
| 2.3 信息处理方法 |
| 2.4 疗效评估方法 |
| 2.5 统计分析方法 |
| 3. 研究结果 |
| 3.1 一般情况 |
| 3.2 入选病例的疗效评价结果 |
| 3.3 辨证及方药统计分析结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三部分 清利活血中药延缓CKD进展的作用机制研究 |
| 引言 |
| 1. 目的 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 药物和试剂 |
| 2.2 药品制备 |
| 2.3 细胞 |
| 2.4 动物 |
| 2.5 血清和尿液检测 |
| 2.6 组织病理检测 |
| 2.7 蛋白质印迹检测 |
| 2.8 细胞活性检测 |
| 2.9 流式细胞分析 |
| 2.10 细胞凋亡检测 |
| 2.11 氧化损伤检测 |
| 2.12 统计分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 阿霉素体外引起肾小管上皮细胞损伤 |
| 3.2 阿霉素体内引起肾损害 |
| 3.3 氧化应激介导的细胞凋亡是阿霉素引起肾小管上皮细胞损伤的重要原因 |
| 3.4 MAPK信号通路的激活参与阿霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤过程 |
| 3.5 清利活血中药泽兰、积雪草、鬼箭羽和六月雪体外减轻阿霉素引起的肾小管上皮细胞损伤 |
| 3.6 清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽体内减轻阿霉素引起的肾损害 |
| 3.7 清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽能够通过抗氧化作用抑制阿霉素引起的细胞凋亡 |
| 3.8 泽兰、积雪草和鬼箭羽抑制阿霉素引起的MAPK信号通路的激活 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 清利活血药延缓CKD进展的中药活性成分研究 |
| 引言 |
| 1. 泽兰、积雪草、鬼箭羽活性成分分析 |
| 2. 泽兰、积雪草和鬼箭羽共有的活性成分分析 |
| 3. Apigenin延缓CKD进展的作用验证与机制探索 |
| 3.1 目的 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 存在的问题与展望 |
| 1.问题与不足 |
| 2.解决方法 |
| 3.展望 |
| 结语 |
| 攻读学位期间取得的成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠NF-κB、PGSK-3β表达的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1.祖国医学对肾纤维化的认识 |
| 1.1 肾纤维化的病名 |
| 1.2 肾纤维化的病因病机 |
| 1.3 肾纤维化的中医治疗 |
| 2.现代医学对NF-κB、PGSK-3β及肾纤维化的认识 |
| 2.1 NF-κB信号通路 |
| 2.2 磷酸化糖原合成酶激酶-3β |
| 2.3 肾纤维化发展机制及与NF-κB?PGSK-3β的联系 |
| 2.4 现代医学对于肾纤维化的治疗 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验环境 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物分组及模型复制 |
| 2.2 给药方法 |
| 2.3 实验取材 |
| 2.4 观察项目及方法 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状态改变 |
| 3.2 大鼠尿蛋白排泄率测定 |
| 3.3 大鼠生化指标测定 |
| 3.4 大鼠肾组织病理学改变 |
| 讨论 |
| 1.阿霉素肾病大鼠模型的选择 |
| 2.关于肾炎康复片的选择 |
| 3.活肾降浊方方药分析 |
| 3.1 补益药 |
| 3.2 活血药 |
| 3.3 祛风除湿药 |
| 4.活肾降浊方治疗阿霉素肾病大鼠肾纤维化机理分析 |
| 4.1 大鼠一般状态改变 |
| 4.2 降低尿蛋白排泄 |
| 4.3 降低p-JAK2及p-STAT3 水平 |
| 4.4 活肾降浊方对NF-κB、PGSK-3β的下调 |
| 4.5 活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠肾组织的病理发展变化 |
| 5.问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（8）肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 慢性肾脏病肾纤维化的现代研究进展 |
| 1 病因研究 |
| 2 发病机制研究 |
| 3 治疗与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治慢性肾脏病研究进展 |
| 1 病名研究 |
| 2 病因病机研究 |
| 3 防治研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 肾康注射液治疗慢性肾脏病的系统药理学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果和讨论 |
| 3 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对UUO小鼠肾间质纤维化的保护作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 肾康注射液对NRK-49F人鼠肾间质成纤维细胞活化的作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 主要研究成果 |
| 个人简历 |
（9）肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治慢性肾脏病肾纤维化研究进展 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 临床治疗 |
| 4. 实验研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 肾康注射液治疗肾脏疾病研究概述 |
| 1. 药物基本情况 |
| 2. 临床疗效研究 |
| 3. 基础药理机制研究 |
| 4.发展前景 |
| 参考文献 |
| 综述三 血管生成在肾纤维化发生发展中作用的研究进展 |
| 1. 血管生成发生发展 |
| 2. 肾纤维化发生发展 |
| 3. 血管生成障碍与肾纤维化密切相关 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和血管生成的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对HUVEC血管生成和VEGF/VEGFR-2/eNOS的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要成果 |
（10）桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析 |
| 引言 |
| 1 方法 |
| 1.1 文献检索 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.3 资料提取与评价 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献筛选 |
| 2.2 纳入文献的基本特征 |
| 2.3 文献质量评价 |
| 2.4 Meta分析 |
| 3 讨论 |
| 第二章 桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究 |
| 引言 |
| 第一节 桃核承气汤醇提物的制备及各部位的分离 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 小结 |
| 第二节 桃核承气汤有效物质部位的筛选 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 试药与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 供试药品制备 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 质谱条件 |
| 3 分析结果 |
| 3.1 桃核承气汤正丁醇萃取物质部位总离子图 |
| 3.2 色谱峰中主要化学成分的鉴定 |
| 4 讨论 |
| 第四章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究 |
| 引言 |
| 1 方法 |
| 1.1 活性成分的筛选 |
| 1.2 活性成分作用靶标预测 |
| 1.3 疾病靶标收集 |
| 1.4 网络构建与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 桃核承气汤正丁醇有效物质部位的活性成分 |
| 2.2 桃核承气汤正丁醇有效物质部位活性成分-治疗靶标网络构建 |
| 2.3 PPI网络构建 |
| 2.4 GO功能富集和KEGG通路富集分析 |
| 2.5 桃核承气汤正丁醇有效物质部位活性成分-靶标-信号通路网络构建 |
| 3 讨论 |
| 第五章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究 |
| 引言 |
| 第一节 体外实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二节 体内实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 1 研究结论 |
| 2 创新点 |
| 3 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 |
| 综述1:肾脏纤维化机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2:中医药抗肾脏纤维化的作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 26个化合物分子离子峰图 |
| 附录三 攻读博士期间论文发表及参编论着情况 |
| 致谢 |
四、红花对阿霉素诱导的肾小管间质纤维化大鼠的保护作用（论文参考文献）
- [1]基于NF-κB/HIF-1α通路探讨“黄芪-丹参”药对干预UUO肾间质纤维化模型的机制研究[D]. 秦浩. 天津中医药大学, 2021(01)
- [2]基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究[D]. 边红萍. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [3]苦参碱防治肾病的药理作用及其机制的研究进展[J]. 张明发,沈雅琴. 现代药物与临床, 2021(05)
- [4]基于网络药理学探讨益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路抗肾纤维化的机制研究[D]. 方桂玉. 广西中医药大学, 2021(02)
- [5]基于氧化应激介导MAPK信号通路调控细胞凋亡探讨茵陈对肾损伤的影响以及机制研究[D]. 黄国顺. 南京中医药大学, 2021
- [6]基于“阿霉素肾病”模型探讨清利活血中药治疗慢性肾脏病的作用及机制研究[D]. 吴其晶. 南京中医药大学, 2021(01)
- [7]活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠NF-κB、PGSK-3β表达的影响[D]. 郑佳颖. 黑龙江省中医药科学院, 2020(02)
- [8]肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究[D]. 秦田雨. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究[D]. 潘雅婧. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究[D]. 周珊珊. 湖北中医药大学, 2020(08)